本說明書涉及細胞凍存領(lǐng)域，特別涉及一種car-t細胞凍存液及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、細胞制劑在程序降溫凍存時會發(fā)生液態(tài)到固態(tài)的相變過程，并會釋放大量潛熱，此潛熱釋放時的臨界點稱為潛熱點。當(dāng)潛熱點出現(xiàn)，凍存液開始有冰晶形成，樣本開始釋放熱量，溫度可能反而會上升。此時，就需要向腔體內(nèi)迅速噴入大量液氮，從而快速降溫，拉大溫差，帶走熱量，使得細胞制劑迅速越過相變期，從而避免細胞損傷。而凍存液做為一種藥用輔料，和細胞藥物形成的制劑需要回輸給患者，因此要求使用gmp級別以上的輔料，同時在細胞程序降溫時要求凍存液可以最大可能減少冰晶對細胞損傷，而且細胞制劑在程序降溫凍存時應(yīng)處于合適的凍存密度范圍，從而保證細胞凍存復(fù)蘇后的活率和臨床療效。

2、現(xiàn)有凍存工藝包括以下步驟：將car-t細胞洗滌后以凍存處方重懸均勻形成細胞制劑懸液，然后按照特定規(guī)格分裝至無菌凍存管或凍存袋中，接著按照固定的凍存程序進行程序降溫凍存,最后轉(zhuǎn)移至液氮中儲存。

3、在進行小劑量car-t細胞制劑回輸(如針對腦膠質(zhì)瘤的car-t細胞治療)時由于需要的單人份制劑體積較小(如5ml以下)，常規(guī)凍存管包材涉及敞口操作會增加細胞制劑染菌風(fēng)險，使用帶魯爾接口的cell?seal?vial封閉式凍存管包材(sexton?biotechnologies)進行car-t細胞制劑凍存非常必要，而現(xiàn)有的適用于car-t細胞的制劑處方和凍存密度以及凍存程序基本是針對普通凍存管和凍存袋優(yōu)化的，不確定是否適用于cell?seal?vial封閉式凍存管包材，因此基于cell?seal?vial封閉式凍存管的car-t細胞制劑凍存處方和凍存密度優(yōu)化至關(guān)重要。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了解決上述結(jié)束問題，本申請?zhí)峁┮环N基于cell?seal?vial封閉式凍存管包材的car-t細胞凍存制劑處方和凍存密度優(yōu)化方法，其中降溫程序采用程序降溫儀預(yù)設(shè)的降溫程序(具體凍存程序見附圖1)，在凍存程序與凍存處方和凍存密度共同作用下，提升cellseal?vial封閉式凍存管包材凍存的car-t細胞的活率和功能活性，從而確保car-t細胞制劑回輸后的療效。

2、本申請?zhí)峁┮环Ncar-t細胞凍存液，包括20％人血清白蛋白、復(fù)方電解質(zhì)和cs10，所述20％人血清白蛋白、復(fù)方電解質(zhì)和cs10的體積比為2:2:6。

3、本申請還提供一種凍存car-t細胞的方法，使用上述的car-t細胞凍存液凍存car-t細胞。

4、本申請還提供上述的car-t細胞凍存液或上述的方法在car-t細胞凍存中的應(yīng)用。

5、本申請帶來的有益效果包括但不限于：本申請?zhí)峁┮环N基于cell?seal凍存管的car-t細胞凍存液和凍存方法，使用本申請的細胞凍存液和凍存方法凍存的car-t細胞，復(fù)蘇后細胞活率和得率高、car陽性率數(shù)據(jù)穩(wěn)定、細胞殺傷效率高。復(fù)蘇后細胞活率均在83％以上，細胞得率均在94％以上，car陽性率穩(wěn)定，細胞殺傷效率達到70％以上，該方法簡單、高效且為封閉式凍存包材、有利于小體積car-t細胞制劑凍存以及回輸。并且本申請的凍存液中cs10的體積含量只有60％，顯著降低了凍存液的成本。

技術(shù)特征：

1.一種car-t細胞凍存液，包括20％人血清白蛋白、復(fù)方電解質(zhì)和cs10，所述20％人血清白蛋白、復(fù)方電解質(zhì)和cs10的體積比為2:2:6。

2.如權(quán)利要求1所述的car-t細胞凍存液，其特征在于，所述car-t細胞為感染了靶向il-13rα2的慢病毒的car-t細胞。

3.一種凍存car-t細胞的方法，其特征在于，使用如權(quán)利要求1或2所述的car-t細胞凍存液凍存car-t細胞。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述細胞懸液中細胞密度為0.5～1.5x107/ml。

6.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述細胞懸液中細胞密度為1x107/ml；

7.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，步驟c)中，所述程序降溫儀已預(yù)冷至4℃；

8.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述降溫程序為：

9.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述car-t細胞感染了靶向il-13rα2的慢病毒。

10.如權(quán)利要求1或2所述的car-t細胞凍存液或權(quán)利要求3～9任一項所述的方法在car-t細胞凍存中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本申請涉及細胞凍存領(lǐng)域，特別涉及一種CAR?T細胞凍存液及其應(yīng)用。本申請公開了一種CAR?T細胞凍存液，包括20％人血清白蛋白、復(fù)方電解質(zhì)和CS10，所述20％人血清白蛋白、復(fù)方電解質(zhì)和CS10的體積比為2:2:6。使用本申請的細胞凍存液和凍存方法凍存的CAR?T細胞，復(fù)蘇后細胞活率和得率高、CAR陽性率數(shù)據(jù)穩(wěn)定、細胞殺傷效率高。并且本申請的凍存液中CS10的體積含量只有60％，顯著降低了凍存液的成本。

技術(shù)研發(fā)人員：趙振軍,栗紅建,張丹,趙圓,李朝暉
受保護的技術(shù)使用者：江蘇譜新生物醫(yī)藥有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8