本發(fā)明涉及疾病動物模型領(lǐng)域，尤其是涉及一種代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌模型的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)：

1、肝癌是全球第六位較常見的惡性腫瘤，也是導(dǎo)致人類死亡的第三位惡性腫瘤死因，其中肝細胞癌(hcc)為肝癌最常見類型，約占全部肝癌發(fā)病的80％。代謝相關(guān)脂肪肝(mafld)這一脂肪肝疾病新命名法的提出，使得代謝相關(guān)脂肪肝不再是排除性診斷，而是基于存在代謝功能障礙，因此現(xiàn)在可以與其他肝臟疾病共存。而慢性乙型肝炎病毒(hbv)感染影響全球約2.96億人，是全球肝硬化和肝癌的主要病因。

2、hbv可以通過直接和間接機制促進hcc的發(fā)展，包括直接的破壞與間接免疫誘導(dǎo)損傷，同時hbvdna基因組與宿主基因的整合，宿主基因的不穩(wěn)定性、癌基因和腫瘤抑制基因的突變以及突變蛋白的表達都會導(dǎo)致癌癥的發(fā)生，而mafld-hcc的相關(guān)研究也提示了，包括多種信號通路的異常激活在內(nèi)的機制會促成mafld患者向hcc轉(zhuǎn)變。

3、在亞洲，尤其是東亞人群中，存在hbv感染的背景，于中老年并發(fā)mafld，進一步進展為hcc，相對貼合該地區(qū)肝癌發(fā)病的流行病學(xué)現(xiàn)狀。但目前暫未有相對符合這一發(fā)病過程的、適合較多樣本進行觀察的實驗動物。造成這一問題的主要原因是非靈長類動物對于hbv病毒沒有或很少易感，但hbv-tg轉(zhuǎn)基因小鼠的出現(xiàn)使得非靈長類實驗動物也可以進行hbv感染的研究。

4、小鼠作為模式生物，由于養(yǎng)殖成本低、再生能力強、同為哺乳動物與人類親緣關(guān)系相對較近等特性，在構(gòu)造疾病模型上具有廣泛的應(yīng)用。本發(fā)明提出了一個利用特殊飼料誘導(dǎo)來構(gòu)造代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌模型的新方法。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌模型的構(gòu)建方法，選用hbv-tg小鼠為實驗動物，利用高脂高果糖高膽固醇飼料構(gòu)建代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌模型，該構(gòu)建方法穩(wěn)定性、重復(fù)性好，客觀簡單，可操作性強，減少了其他可能的干擾因素。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌模型的構(gòu)建方法，包括如下步驟：

3、s1、將hbv基因組線性化后注射到c57bl/6小鼠受精卵中，建立hbv轉(zhuǎn)基因小鼠c57bl/6n-tg?6/vst；

4、s2、使用高脂高果糖高膽固醇飼料喂養(yǎng)步驟s1中的hbv轉(zhuǎn)基因小鼠c57bl/6n-tg6/vst，獲得代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌小鼠模型。

5、優(yōu)選地，hbv轉(zhuǎn)基因小鼠的血清和肝組織中可檢測到hbv?dna、hbsag。

6、優(yōu)選地，hbv基因組為genbank?no.af305422.1。

7、優(yōu)選地，步驟s2中，飼養(yǎng)條件為：溫度28.5℃，12小時光照/12小時黑暗。

8、優(yōu)選地，步驟s2中，高脂高果糖高膽固醇飼料采用自主進食的方式喂養(yǎng)。

9、因此，本發(fā)明一種代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌模型的構(gòu)建方法，具有以下有益效果：

10、(1)本發(fā)明采取無創(chuàng)方法構(gòu)建代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌動物模型，將高脂高果糖高膽固醇飼料應(yīng)用到構(gòu)建代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌動物模型中，在減少動物模型傷害的情況下，通過實驗動物自主口服高脂高果糖高膽固醇飼料，成功建立了代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌動物模型；

11、(2)本發(fā)明的構(gòu)建方法穩(wěn)定性、重復(fù)性好，客觀簡單，可操作性強，減少了其他可能的干擾因素，為研究代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌的相關(guān)機制和治療手段的開發(fā)提供了必要的實驗基礎(chǔ)；

12、(3)本發(fā)明選用hbv-tg小鼠構(gòu)建代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌模型，小鼠作為模式動物，具有養(yǎng)殖成本相對低，繁殖能力強，同為哺乳動物與人類親緣關(guān)系相對較近等優(yōu)勢，相對于靈長類動物，小鼠在繁殖和造模的簡易程度上擁有絕對的優(yōu)勢，并且小鼠發(fā)育迅速，可以快速模擬人類的相關(guān)發(fā)病的病理過程和治療。

13、下面通過附圖和實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案做進一步的詳細描述。

技術(shù)特征：

1.一種代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌模型的構(gòu)建方法，其特征在于，包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌模型的構(gòu)建方法，其特征在于：hbv轉(zhuǎn)基因小鼠的血清和肝組織中可檢測到hbv?dna、hbsag。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌模型的構(gòu)建方法，其特征在于：hbv基因組為genbank?no.af305422.1。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌模型的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟s2中，飼養(yǎng)條件為：溫度28.5℃，12小時光照/12小時黑暗。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌模型的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟s2中，高脂高果糖高膽固醇飼料采用自主進食的方式喂養(yǎng)。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌模型的構(gòu)建方法，屬于疾病動物模型技術(shù)領(lǐng)域。構(gòu)建方法包括如下步驟：S1、將HBV基因組線性化后注射到C57BL/6小鼠受精卵中，建立HBV轉(zhuǎn)基因小鼠；S2、使用D09100310飼料喂養(yǎng)步驟S1中的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠，獲得代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌小鼠模型。本發(fā)明一種代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌模型的構(gòu)建方法，選用HBV?Tg小鼠為實驗動物，利用D09100310小鼠飼料構(gòu)建代謝相關(guān)脂肪性肝病合并慢性乙型肝炎相關(guān)肝細胞癌模型，穩(wěn)定性、重復(fù)性好，客觀簡單，可操作性強，減少了其他可能的干擾因素。

技術(shù)研發(fā)人員：徐亮,蒯文濤,田方圓,宓余強,雷晨,蘇瑞,曹麗霞
受保護的技術(shù)使用者：天津市第二人民醫(yī)院（天津市傳染病醫(yī)院）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8