馬鮫魚超低溫冷凍精液的復(fù)蘇方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及超低溫冷凍精液的解凍復(fù)活方法，具體涉及馬鮫魚超低溫冷凍精液的復(fù)蘇方法。
【背景技術(shù)】
[0002]馬鮫魚屬鱸形目，鲅科，是一種重要的海洋經(jīng)濟(jì)魚類。雖然馬鮫魚人工繁殖和養(yǎng)殖難度較大，但目前已獲得初步成果。馬鮫魚批量人工繁殖中，對馬鮫魚精液的保存和復(fù)活也是關(guān)健點(diǎn)。魚類精液的保存方法多種多樣，如4°C常溫保存，低溫保存，超低溫冷凍保存等，超低溫冷凍保存不但精子保存時(shí)間長，且精子質(zhì)量變化很少，但超低溫冷凍保存時(shí)精子復(fù)蘇難度較大，目前只有家畜的冷凍精液解凍復(fù)蘇的報(bào)道，如公開號(hào)為CN104322484的發(fā)明專利申請，就公開了先以50°C /min的速率，將凍存精液升至_5°C，再以3°C /min的速率將凍存精液升至5°C，得到復(fù)蘇的豬精子。但魚類精子生命力較弱，常規(guī)的解凍對魚類精子損傷較大，因此需要進(jìn)一步研究后才能應(yīng)用，還沒有魚類及馬鮫魚超低溫冷凍精液的復(fù)蘇方法方面的研究報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種馬鮫魚超低溫冷凍精液的復(fù)蘇方法，該復(fù)蘇方法使冷凍精液中精子損傷較少，精子復(fù)蘇率可以達(dá)到85%以上。
[0004]本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為:馬鮫魚超低溫冷凍精液的復(fù)蘇方法，步驟如下:
a、將裝有馬鮫魚超低溫冷凍精液的凍存管從液氮中取出，放入40?50°C恒溫水浴中，搖動(dòng)凍存管，至凍存管中馬鮫魚超低溫冷凍精液完全溶解，取出凍存管，得到解凍后的馬鮫魚精液；
b、將解凍后的馬鮫魚精液與精子復(fù)蘇液按體積比1:100的比例混合，靜置溫養(yǎng)2?3min，得到復(fù)蘇的馬鮫魚精子，所述精子復(fù)蘇液為溫度18?20°C，pH7.6?8.4，鹽度20?30%。的純凈海水。
[0005]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于馬鮫魚超低溫冷凍精液的復(fù)蘇方法，該復(fù)蘇方法先將馬鮫魚超低溫冷凍精液在恒溫水浴中解凍，再用精子復(fù)蘇液溫養(yǎng)解凍后的馬鮫魚精子，使復(fù)蘇后的精子活率可以達(dá)到新鮮精子的水平，解凍復(fù)蘇過程中精子損傷較少，精子復(fù)蘇率可以達(dá)到85%以上。
【具體實(shí)施方式】
[0006]以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0007]實(shí)施例1
馬鮫魚超低溫冷凍精液的復(fù)蘇方法，將裝有馬鮫魚超低溫冷凍精液的凍存管從液氮中取出，放入45°C恒溫水浴中，搖動(dòng)凍存管，至凍存管中馬鮫魚超低溫冷凍精液完全溶解(一般2 min左右)，取出凍存管，得到解凍后的馬鮫魚精液，將解凍后的馬鮫魚精液與精子復(fù)蘇液(溫度19°C，pH8.0，鹽度25%。的純凈海水)按體積比1:100的比例混合，靜置溫養(yǎng)2.5min，得到復(fù)蘇的馬鮫魚精子，檢測后精子活率可以達(dá)到新鮮精子相當(dāng)，統(tǒng)計(jì)后精子復(fù)蘇率達(dá)到88%以上。
[0008]實(shí)施例2
馬鮫魚超低溫冷凍精液的復(fù)蘇方法，將裝有馬鮫魚超低溫冷凍精液的凍存管從液氮中取出，放入40°C恒溫水浴中，搖動(dòng)凍存管，至凍存管中馬鮫魚超低溫冷凍精液完全溶解(一般2 min左右)，取出凍存管，得到解凍后的馬鮫魚精液，將解凍后的馬鮫魚精液與精子復(fù)蘇液(溫度18°C，pH8.4，鹽度30%。的純凈海水)按體積比1:100的比例混合，靜置溫養(yǎng)3 min,得到復(fù)蘇的馬鮫魚精子，檢測后精子活率可以達(dá)到新鮮精子相當(dāng)，統(tǒng)計(jì)后精子復(fù)蘇率達(dá)到86%以上。
[0009]實(shí)施例3
馬鮫魚超低溫冷凍精液的復(fù)蘇方法，將裝有馬鮫魚超低溫冷凍精液的凍存管從液氮中取出，放入50°C恒溫水浴中，搖動(dòng)凍存管，至凍存管中馬鮫魚超低溫冷凍精液完全溶解(一般2 min左右)，取出凍存管，得到解凍后的馬鮫魚精液，將解凍后的馬鮫魚精液與精子復(fù)蘇液(溫度20°C，pH7.6，鹽度20%。的純凈海水)按體積比1:100的比例混合，靜置溫養(yǎng)2 min,得到復(fù)蘇的馬鮫魚精子，檢測后精子活率可以達(dá)到新鮮精子相當(dāng)，統(tǒng)計(jì)后精子復(fù)蘇率達(dá)到85%以上。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.馬鮫魚超低溫冷凍精液的復(fù)蘇方法，其特征在于步驟如下: a、將裝有馬鮫魚超低溫冷凍精液的凍存管從液氮中取出，放入40?50°C恒溫水浴中，搖動(dòng) 凍存管，至凍存管中馬鮫魚超低溫冷凍精液完全溶解，取出凍存管，得到解凍后的馬鮫魚精液； b、將解凍后的馬鮫魚精液與精子復(fù)蘇液按體積比1:100的比例混合，靜置溫養(yǎng)2?3min，得到復(fù)蘇的馬鮫魚精子，所述精子復(fù)蘇液為溫度18?20°C，pH7.6?8.4，鹽度20?30%。的純凈海水。2.如權(quán)利要求1所述的馬鮫魚超低溫冷凍精液的復(fù)蘇方法，其特征在于步驟a中，恒溫水浴的溫度為45°C。3.如權(quán)利要求1所述的馬鮫魚超低溫冷凍精液的復(fù)蘇方法，其特征在于步驟b中，精子復(fù)蘇液為溫度19°C，pH98.0，鹽度25%。的純凈海水。
【專利摘要】本發(fā)明公開了馬鮫魚超低溫冷凍精液的復(fù)蘇方法，該復(fù)蘇方法先將馬鮫魚超低溫冷凍精液在恒溫水浴中解凍，再用精子復(fù)蘇液溫養(yǎng)解凍后的馬鮫魚精子，使復(fù)蘇后的精子活率可以達(dá)到新鮮精子的水平，解凍復(fù)蘇過程中精子損傷較少，精子復(fù)蘇率可以達(dá)到85%以上。
【IPC分類】C12N5/071
【公開號(hào)】CN105062954
【申請?zhí)枴緾N201510502997
【發(fā)明人】鄭春靜, 劉軍
【申請人】寧波市海洋與漁業(yè)研究院
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2015年8月17日