【】本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥，特別涉及一種用于膿毒癥的指示物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

0、
背景技術(shù)：

1、膿毒癥是一種感染性疾病，由于細(xì)菌或病毒感染，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)失衡，大量的炎癥因子釋放，最終導(dǎo)致多器官功能衰竭甚至死亡，大多數(shù)患者并發(fā)急性腎損傷，dic，休克等，這些通常與更高的發(fā)病率和死亡率相關(guān)，因此，對膿毒癥患者進(jìn)行準(zhǔn)確診斷和適當(dāng)處理，是實(shí)現(xiàn)最佳治療效果的必要條件。

2、目前，膿毒癥的診斷和預(yù)后評估面臨兩大挑戰(zhàn)：一是缺乏簡便、快速的診斷標(biāo)志物，二是現(xiàn)有的對膿毒癥預(yù)后進(jìn)行評估的生物標(biāo)志物不足。雖然已經(jīng)報道了一系列膿毒癥的血漿診斷標(biāo)志物，包括c反應(yīng)蛋白(crp)和降鈣素原(pct)等，然而，這些標(biāo)志物的診斷價值有限。同時，sofa評分雖然廣泛應(yīng)用，卻因復(fù)雜性和對醫(yī)生主觀判斷的依賴而受限。鑒于膿毒癥診斷和預(yù)后評估的復(fù)雜性，開發(fā)新的生物標(biāo)志物以提升評估精度至關(guān)重要。因此，有必要提供一種新的生物標(biāo)志物及其制備方法，來更精準(zhǔn)地評估膿毒癥，以解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

0、
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

1、為了克服上述問題，本發(fā)明提出一種可有效解決上述問題的用于膿毒癥的指示物及其制備方法和應(yīng)用。

2、本發(fā)明解決上述技術(shù)問題提供的一種技術(shù)方案是：提供一種用于膿毒癥的指示物及其制備方法和應(yīng)用，包括檢測體液中scd147的試劑盒，所述試劑盒為基于流式熒光技術(shù)定量檢測體液中scd147的試劑盒，所述試劑盒包括偶聯(lián)有捕獲抗體的微球、生物素標(biāo)記的檢測抗體和報告分子。

3、優(yōu)選地，所述捕獲抗體為scd147兔單克隆抗體，所述檢測抗體為標(biāo)記有生物素的scd147鼠單克隆抗體。

4、優(yōu)選地，所述檢測抗體選擇與捕獲抗體相對應(yīng)的結(jié)合不同抗原表位的抗體，可以形成夾心復(fù)合結(jié)構(gòu)。

5、優(yōu)選地，所述報告分子為標(biāo)記有熒光素標(biāo)記的鏈霉親和素。

6、優(yōu)選地，所述試劑盒還包括校準(zhǔn)品、質(zhì)控品1、質(zhì)控品2、樣本稀釋液和清洗液，所述校準(zhǔn)品、質(zhì)控品1、質(zhì)控品2為含有scd147重組蛋白的凍干品。

7、一種用于膿毒癥的指示物的制備方法，包括材料準(zhǔn)備、配制偶聯(lián)有捕獲抗體的微球、配制生物素標(biāo)記的檢測抗體、配制報告分子、制備校準(zhǔn)品、制備質(zhì)控品、制備樣本稀釋液、制備清洗液。

8、優(yōu)選地，所述配制偶聯(lián)有捕獲抗體的微球，包括：

9、取微球，磁分離，棄上清，加入mes緩沖液重懸；

10、edc和sulfo-nhs用mes緩沖液配成溶液；

11、向微球懸液中依次加入edc溶液和sulfo-nhs溶液，混勻；

12、微球磁分離棄上清，用mes緩沖液洗一次，再次磁分離棄上清；

13、向微球中加入抗體，補(bǔ)充mes緩沖液，混勻；

14、微球磁分離，棄上清，加入封閉液，混勻封閉反應(yīng)；

15、微球磁分離，棄上清，加入保存液重懸，保存。

16、優(yōu)選地，所述配制生物素標(biāo)記的檢測抗體，包括用無水dmf溶解活化的生物素n-羥基丁二酰亞胺酯，加入鼠抗人的scd147單克隆抗體后室溫孵育，pbs溶液過夜透析，除去未反應(yīng)的生物素n-羥基丁二酰亞胺酯，即可得到生物素標(biāo)記的檢測抗體。

17、優(yōu)選地，所述報告分子為sa-pe，用pbs溶液稀釋至5μg/ml備用。

18、一種用于膿毒癥的指示物在膿毒癥評估中的應(yīng)用。

19、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的用于膿毒癥的指示物及其制備方法和應(yīng)用，相比于健康人和非膿毒癥患者，膿毒癥患者中血漿scd147水平明顯升高，可作為膿毒癥診斷的生物標(biāo)志物，并且可以預(yù)測膿毒癥的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后，同時本發(fā)明提供了一種操作簡單，靈敏度高，重復(fù)性好，應(yīng)用更加廣泛的scd147檢測試劑盒的制備方法。

技術(shù)特征：

1.一種用于膿毒癥的指示物，其特征在于，包括檢測體液中scd147的試劑盒，所述試劑盒為基于流式熒光技術(shù)定量檢測體液中scd147的試劑盒，所述試劑盒包括偶聯(lián)有捕獲抗體的微球、生物素標(biāo)記的檢測抗體和報告分子。

2.如權(quán)利要求1所述的用于膿毒癥的指示物，其特征在于，所述捕獲抗體為scd147兔單克隆抗體，所述檢測抗體為標(biāo)記有生物素的scd147鼠單克隆抗體。

3.如權(quán)利要求1所述的用于膿毒癥的指示物，其特征在于，所述檢測抗體選擇與捕獲抗體相對應(yīng)的結(jié)合不同抗原表位的抗體，可以形成夾心復(fù)合結(jié)構(gòu)。

4.如權(quán)利要求1所述的用于膿毒癥的指示物，其特征在于，所述報告分子為標(biāo)記有熒光素的鏈霉親和素。

5.如權(quán)利要求1所述的用于膿毒癥的指示物，其特征在于，所述試劑盒還包括校準(zhǔn)品、質(zhì)控品1、質(zhì)控品2、樣本稀釋液和清洗液，所述校準(zhǔn)品、質(zhì)控品1、質(zhì)控品2為含有scd147重組蛋白的凍干品。

6.一種用于膿毒癥的指示物的制備方法，其特征在于，包括材料準(zhǔn)備、配制偶聯(lián)有捕獲抗體的微球、配制生物素標(biāo)記的檢測抗體、配制報告分子、制備校準(zhǔn)品、制備質(zhì)控品、制備樣本稀釋液、制備清洗液。

7.如權(quán)利要求6所述的用于膿毒癥的指示物的制備方法，其特征在于，所述配制偶聯(lián)有捕獲抗體的微球，包括：

8.如權(quán)利要求6所述的用于膿毒癥的指示物的制備方法，其特征在于，所述配制生物素標(biāo)記的檢測抗體，包括用無水dmf溶解活化的生物素n-羥基丁二酰亞胺酯，加入鼠抗人的scd147單克隆抗體后室溫孵育，pbs溶液過夜透析，除去未反應(yīng)的生物素n-羥基丁二酰亞胺酯，即可得到生物素標(biāo)記的檢測抗體。

9.如權(quán)利要求6所述的用于膿毒癥的指示物的制備方法，其特征在于，所述報告分子為sa-pe，用pbs溶液稀釋至5μg/ml備用。

10.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的用于膿毒癥的指示物在膿毒癥評估中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種用于膿毒癥的指示物及其制備方法和應(yīng)用，包括檢測體液中sCD147的試劑盒，所述試劑盒為基于流式熒光技術(shù)定量檢測體液中sCD147的試劑盒，所述試劑盒包括偶聯(lián)有捕獲抗體的微球、生物素標(biāo)記的檢測抗體和報告分子。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的用于膿毒癥的指示物及其制備方法和應(yīng)用可以預(yù)測膿毒癥的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后，同時本發(fā)明提供了一種操作簡單，靈敏度高，重復(fù)性好，應(yīng)用更廣泛的sCD147檢測試劑盒的制備方法。

技術(shù)研發(fā)人員：姜擁軍,尚紅,楊帆,傅雅靜,王盼,陳佳琦,鄧橙,董麗芳
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8