本發(fā)明涉及檢測(cè)，具體涉及一種蕎麥中蕎麥光敏素的提取及檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

1、蕎麥作為一種重要的藥食同源雜糧作物，具有重要的營養(yǎng)保健價(jià)值，富含淀粉、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素、膳食纖維、微量元素等，除此之外還富含黃酮類、酚類、肽類、甾體類等具有生物活性的物質(zhì)，具有很好的降糖、降血脂、降膽固醇、抗氧化等功能。蕎麥的傳統(tǒng)食用部位是種子，蕎麥發(fā)芽后其營養(yǎng)成分與活性得到進(jìn)一步改善，因此蕎麥幼嫩植株也相繼被開發(fā)成產(chǎn)品。然而，蕎麥發(fā)芽后其抗?fàn)I養(yǎng)因子或潛在危害成分的變化卻關(guān)注不足。

2、蕎麥中的蕎麥光敏性(fagopyrin)是100多年前發(fā)現(xiàn)的。由于其特殊的分子結(jié)構(gòu)，研究人員未得到蕎麥光敏素的純物質(zhì)，因而其理化特性、生物合成方法以及生物活性尚不明晰。過量食用蕎麥芽、蕎麥葉或蕎麥花在陽光下會(huì)導(dǎo)致皮膚發(fā)紅、腫脹和瘙癢等癥狀。蕎麥光敏素及其原形態(tài)都存在于植物中，類似于金絲桃素和原金絲桃素，它是一種具有光毒性的天然熒光色素，它和金絲桃素都是萘駢二蒽酮的衍生物，這些化合物只有在萃取溶劑中溶解后才能轉(zhuǎn)化，而原蕎麥光敏素是唯一的植物產(chǎn)品。2013年等通過色譜分析分離出8種熒光物質(zhì)，這8種熒光材料的紫外-可見吸收光譜均在590nm且光譜模式保持不變，證明蕎蕎麥光敏素是由多種化合物組成的一類物質(zhì)，并提出了蕎麥光敏素的六種可能結(jié)構(gòu)：a、b、c、d、e和f，其中a、b和c蕎麥光敏素的分子式相同，但具有不同的結(jié)構(gòu)式，d和e的分子式是一個(gè)，但有不同的結(jié)構(gòu)式。

3、蕎麥光敏素的檢測(cè)一般采用紫外-可見分光光度法和熒光光度法。紫外-可見光譜中蕎麥光敏素的最大吸收在284、329、545和590nm處，大多數(shù)都以590nm處的吸光值來計(jì)算蕎麥光敏素的含量。紫外-可見分光光度法中測(cè)得蕎麥光敏素的含量是hplc的6倍，蕎麥提取物中大量的葉綠素及衍生物，其吸收波長(zhǎng)也是590nm，會(huì)影響紫外-可見分光光度法的準(zhǔn)確性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種蕎麥中蕎麥光敏素的提取及檢測(cè)方法。

2、為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

3、本發(fā)明公開了一種蕎麥中蕎麥光敏素的提取方法，將苦蕎芽烘干、粉碎后與提取劑混合后振蕩、超聲、離心，取上清液，加甲醇溶解過濾后，在全光譜植物燈下衍生。

4、優(yōu)選的，所述提取劑為甲醇、丙酮、四氫呋喃、乙酸、無水乙醇、乙醇、乙醇與丙酮的混合液中的任意一種，所述乙醇與丙酮的體積比為1：1。

5、優(yōu)選的，所述苦蕎芽與提取劑的料液比為80～120：3。

6、優(yōu)選的，超聲溫度為40～60℃，超聲時(shí)間為0.5～4h。

7、優(yōu)選的，衍生時(shí)間為0.5～4h。

8、相應(yīng)的，一種蕎麥光敏素的檢測(cè)方法，用電噴霧質(zhì)譜法對(duì)樣品提取液中的蕎麥光敏素進(jìn)行表征鑒定，質(zhì)譜條件：液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用，esi正離子模式，流速0.3ml/min，柱溫35℃，流動(dòng)相a：0.1％甲酸水溶液，v/v；流動(dòng)相b：乙腈，0～5min，90％b；毛細(xì)管電壓135v，毛細(xì)管溫度300℃，質(zhì)量掃描范圍m/z：600～800da。

9、優(yōu)選的，色譜條件為色譜柱c18，流動(dòng)相a液：乙腈溶液，b液：0.1％三氟乙酸水、0.1％甲酸水、0.1％乙酸水、0.2％磷酸水、10mmol/l乙酸銨水、一級(jí)水、6mmol/l磷酸氫二鈉水溶液，ph＝3.0中的任意一種，梯度變化為0～5min：40％～30％b；5～10min：30％～10％b；10～15min：10％～0％b；15～20min：0％b；20～23min：0％～40％b；進(jìn)樣量：10μl，流速：1.0ml/min，dad檢測(cè)波長(zhǎng)590±2nm；fld：激發(fā)波長(zhǎng)：330nm，發(fā)射波長(zhǎng)：590nm。

10、本發(fā)明具備以下有益效果：

11、1、本發(fā)明優(yōu)化蕎麥光敏素的提取方法，并通過高效液相色譜法聯(lián)合dad檢測(cè)器、質(zhì)譜檢測(cè)器、fld檢測(cè)器等對(duì)其進(jìn)行定性定量分析，建立了一種準(zhǔn)確可行的高效液相色譜法檢測(cè)蕎麥中蕎麥光敏素測(cè)定方法，可以為蕎麥光敏素的檢測(cè)提供參考。

12、2、本發(fā)明建立了蕎麥中蕎麥光敏素的高效液相色譜-dad和fld測(cè)定方法，對(duì)蕎麥中蕎麥光敏素含量測(cè)定方法進(jìn)行優(yōu)化，分別比較了不同提取劑、料液比、超聲溫度、超聲時(shí)間和曝光時(shí)間對(duì)蕎麥光敏素的影響，目前能確定有至少3中蕎麥光敏素的衍生物存在。該方法檢出限低、定量準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，技術(shù)指標(biāo)均能滿足日常蕎麥分析檢測(cè)要求，可為蕎麥中蕎麥光敏素測(cè)定提供可靠的檢測(cè)方法依據(jù)。

技術(shù)特征：

1.一種蕎麥中蕎麥光敏素的提取方法，其特征在于：將苦蕎芽或甜蕎芽烘干、粉碎后與提取劑混合后振蕩、超聲、離心，取上清液，加甲醇溶解過濾后，在全光譜植物燈下衍生。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述提取劑為甲醇、丙酮、四氫呋喃、乙酸、無水乙醇、乙醇、乙醇與丙酮的混合液中的任意一種，所述乙醇與丙酮的體積比為1：1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取方法，其特征在于：所述苦蕎芽與提取劑的料液比為80～120：3。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于：超聲溫度為40～60℃，超聲時(shí)間為0.5～4h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于：衍生時(shí)間為0.5～4h。

6.一種權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)提取方法提取的蕎麥光敏素的檢測(cè)方法，其特征在于：用電噴霧質(zhì)譜法對(duì)樣品提取液中的蕎麥光敏素進(jìn)行表征鑒定，質(zhì)譜條件：液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用，esi正離子模式，流速0.3ml/min，柱溫35℃，流動(dòng)相a：0.1％甲酸水溶液，v/v；流動(dòng)相b：乙腈，0～5min，90％b；毛細(xì)管電壓135v，毛細(xì)管溫度300℃，質(zhì)量掃描范圍m/z：600～800da。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)方法，其特征在于：色譜條件為色譜柱c18，流動(dòng)相a液：乙腈溶液，b液：0.1％三氟乙酸水、0.1％甲酸水、0.1％乙酸水、0.2％磷酸水、10mmol/l乙酸銨水、一級(jí)水、6mmol/l磷酸氫二鈉，ph＝3.0中的任意一種，梯度變化為0～5min：40％～30％b；5～10min：30％～10％b；10～15min：10％～0％b；15～20min：0％b；20～23min：0％～40％b；進(jìn)樣量：10μl，流速：1.0ml/min，dad檢測(cè)波長(zhǎng)590±2nm；fld：激發(fā)波長(zhǎng)：330nm，發(fā)射波長(zhǎng)：590nm。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種蕎麥中蕎麥光敏素的提取及檢測(cè)方法。具體技術(shù)方案為：一種蕎麥中蕎麥光敏素的提取方法，將苦蕎芽或甜蕎芽烘干、粉碎后與提取劑混合后振蕩、超聲、離心，取上清液，加甲醇溶解過濾后，在全光譜植物燈下衍生。本發(fā)明優(yōu)化蕎麥光敏素的提取方法，并通過高效液相色譜法聯(lián)合DAD檢測(cè)器、質(zhì)譜檢測(cè)器、FLD檢測(cè)器等對(duì)其進(jìn)行定性定量分析，建立了一種準(zhǔn)確可行的高效液相色譜法檢測(cè)蕎麥中蕎麥光敏素測(cè)定方法，可以為蕎麥光敏素的檢測(cè)提供參考。

技術(shù)研發(fā)人員：龔靜平,彭鐮心
受保護(hù)的技術(shù)使用者：成都大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8