本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)檢測(cè)，具體涉及一種羥丁基殼聚糖樣品前處理方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、殘留蛋白質(zhì)可能引起過(guò)敏反應(yīng)，從而影響羥丁基殼聚糖在眾多醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用的安全性，因此能夠精確的測(cè)定蛋白質(zhì)的殘留量是至關(guān)重要的。檢測(cè)蛋白質(zhì)含量的常用方法包括凱氏定氮法、福林酚法以及考馬斯亮藍(lán)法。凱氏定氮法以其良好的重現(xiàn)性而著稱(chēng)，然而，該方法需要特定的儀器設(shè)備，操作過(guò)程耗時(shí)且復(fù)雜，且對(duì)樣品的需求量較大，因此并不適宜于大批量樣品的快速分析，此外，由于殼聚糖及其衍生物中本身就存在氮元素，因此也不適于采用該法檢測(cè)。相對(duì)而言，福林酚法和考馬斯亮藍(lán)法在靈敏度和操作簡(jiǎn)便性方面表現(xiàn)更佳，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)多個(gè)樣品的同時(shí)測(cè)定。然而，有研究指出，在堿性環(huán)境下，殼聚糖及其衍生物的氨基會(huì)與福林酚試劑中的銅離子反應(yīng)，形成大量絮狀沉淀，從而對(duì)測(cè)定結(jié)果造成干擾。此外，羥丁基殼聚糖易與鹽酸或磷酸配制的考馬斯亮藍(lán)染液發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致吸光度異常增大，且吸光度值并不隨樣品濃度的改變而變化。因此亟需一種準(zhǔn)確度可靠、靈敏度高、精密度高的適用于測(cè)定羥丁基殼聚糖中微量蛋白質(zhì)含量的有效方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、一種羥丁基殼聚糖樣品前處理方法，包括如下步驟：

2、將羥丁基殼聚糖樣品溶于水中，獲得羥丁基殼聚糖水溶液；向羥丁基殼聚糖水溶液中加入鹽溶液，浸提；待浸提結(jié)束后，離心，取上清液，作為樣品液。

3、在上述羥丁基殼聚糖樣品前處理方法中，所述羥丁基殼聚糖水溶液的質(zhì)量濃度選自

4、1.5～5.0％；優(yōu)選為1.5％、2％、3％或4％。

5、在上述羥丁基殼聚糖樣品前處理方法中，所述鹽為中性鹽，具體可選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、硫酸鉀、硝酸鋇中的一種或幾種。

6、在上述羥丁基殼聚糖樣品前處理方法中，所述鹽溶液的質(zhì)量濃度選自10～20％；優(yōu)選為10％。

7、在上述羥丁基殼聚糖樣品前處理方法中，所述羥丁基殼聚糖水溶液與鹽溶液的質(zhì)量比選自(0.5～2.5):(2.5～4.5)；優(yōu)選為1:4。

8、在上述羥丁基殼聚糖樣品前處理方法中，所述浸提的條件選自：在20～80℃水浴中以100～300r/min的轉(zhuǎn)速震蕩浸提10～300min；優(yōu)選為：在40℃水浴中以120r/min的轉(zhuǎn)速震蕩浸提4h。

9、在上述羥丁基殼聚糖樣品前處理方法中，所述離心的條件選自：5000～10000rpm離心2～15min；優(yōu)選為：10000rpm離心10min。

10、本發(fā)明提供了上述羥丁基殼聚糖樣品前處理方法在羥丁基殼聚糖中蛋白質(zhì)含量檢測(cè)中的應(yīng)用。

11、本發(fā)明提供了一種羥丁基殼聚糖中蛋白質(zhì)含量檢測(cè)方法，包括如下步驟：

12、將上述羥丁基殼聚糖樣品前處理方法中制備的羥丁基殼聚糖樣品液采用考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行羥丁基殼聚糖樣品中蛋白質(zhì)含量的檢測(cè)。

13、在本發(fā)明中，所述考馬斯亮藍(lán)法參照中國(guó)藥典第四部(2020年版)0731蛋白質(zhì)含量測(cè)定法中的“第五法-考馬斯亮藍(lán)法”。

14、本發(fā)明的有益效果為：

15、本發(fā)明基于羥丁基殼聚糖的溫度敏感性和其在鹽溶液中的難溶性，開(kāi)發(fā)了一種鹽浸提-考馬斯亮藍(lán)法，用于浸提并測(cè)定羥丁基殼聚糖中的蛋白質(zhì)含量，該方法去除了羥丁基殼聚糖本身對(duì)蛋白質(zhì)檢測(cè)的干擾，準(zhǔn)確度可靠、靈敏度高、精密度高、重現(xiàn)性好，是一種適用于測(cè)定羥丁基殼聚糖中微量蛋白質(zhì)含量的有效方法，從而在蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域展現(xiàn)出較好的應(yīng)用前景和價(jià)值。

技術(shù)特征：

1.一種羥丁基殼聚糖樣品前處理方法，其特征在于，包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥丁基殼聚糖樣品前處理方法，其特征在于，所述羥丁基殼聚糖水溶液的質(zhì)量濃度選自1.5～5.0％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥丁基殼聚糖樣品前處理方法，其特征在于，所述鹽為中性鹽。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的羥丁基殼聚糖樣品前處理方法，其特征在于，所述中性鹽選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、硫酸鉀、硝酸鋇中的一種或幾種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥丁基殼聚糖樣品前處理方法，其特征在于，所述鹽溶液的質(zhì)量濃度選自10～20％。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥丁基殼聚糖樣品前處理方法，其特征在于，所述羥丁基殼聚糖水溶液與鹽溶液的質(zhì)量比選自(0.5～2.5):(2.5～4.5)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥丁基殼聚糖樣品前處理方法，其特征在于，所述浸提的條件選自：在20～80℃水浴中以100～300r/min的轉(zhuǎn)速震蕩浸提10～300min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥丁基殼聚糖樣品前處理方法，其特征在于，所述離心的條件選自：5000～10000rpm離心2～15min。

9.權(quán)利要求1～8任一項(xiàng)所述羥丁基殼聚糖樣品前處理方法在羥丁基殼聚糖中蛋白質(zhì)含量檢測(cè)中的應(yīng)用。

10.一種羥丁基殼聚糖中蛋白質(zhì)含量檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種羥丁基殼聚糖樣品前處理方法及其應(yīng)用，屬于蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。所述樣品前處理方法，步驟如下：將羥丁基殼聚糖樣品溶于水中，獲得羥丁基殼聚糖水溶液；向羥丁基殼聚糖水溶液中加入鹽溶液，浸提；待浸提結(jié)束后，離心，取上清液，作為樣品液。本發(fā)明基于羥丁基殼聚糖的溫度敏感性和其在鹽溶液中的難溶性，開(kāi)發(fā)了一種鹽浸提?考馬斯亮藍(lán)法，用于浸提并測(cè)定羥丁基殼聚糖中的蛋白質(zhì)含量，該方法去除了羥丁基殼聚糖本身對(duì)蛋白質(zhì)檢測(cè)的干擾，準(zhǔn)確度可靠、靈敏度高、精密度高、重現(xiàn)性好，從而在蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域展現(xiàn)出較好的應(yīng)用前景和價(jià)值。

技術(shù)研發(fā)人員：鄒圣燦,孫婷,王寶群,劉桂亭,程紅麗,林莎莎
受保護(hù)的技術(shù)使用者：青島琛藍(lán)海洋生物工程有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8