一種快速預(yù)警煙草及煙草制品霉變的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于煙草及煙草制品霉變快速預(yù)警技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速預(yù)警煙 草及煙草制品霉變的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 霉變對卷煙產(chǎn)品質(zhì)量和安全性產(chǎn)生嚴(yán)重影響，煙草及煙草制品在醇化儲存、加工 運(yùn)輸中，若環(huán)境溫濕度條件適宜，細(xì)菌或真菌微生物會大量生長，使煙草及煙草制品發(fā)生霉 變，產(chǎn)生霉味、異味。隨著霉變程度加重，使煙草及煙草制品品質(zhì)降低直至失去使用價(jià)值，霉 菌產(chǎn)物的致癌毒性還會危害消費(fèi)者健康。煙草霉菌常見的菌株類型有黑曲霉 niger(AN) Aspergillusornatus 、產(chǎn)貴著霉Pencilliumckrysogenum (PC)、匍枝根霉熱sto/oflifkKRS)等。
[0003] 2004年，菲莫公司的N.K.Meruva采用閉路溶出氣相色譜/飛行時(shí)間質(zhì)譜法 (CLSA-GC/T0F-MS)，測定了幾種常見煙草霉菌菌株在代謝過程產(chǎn)生的微生物揮發(fā)性有機(jī)化 合物（MVOCs)，主要包括1-辛烯-3-醇、2-辛烯-1-醇、2-甲基-1- 丁醇、3-甲基-1- 丁醇、 1-辛烯和2 -戊酮等，且1-辛烯-3-醇、1-辛烯是大多菌株都可產(chǎn)生的MVOCs種類。因此， 這些MVOCs可用做煙草霉變的特征標(biāo)志物。
[0004] 1-辛烯-3-醇別名蘑菇醇，分子式為C8H160,分子量為128. 21，為無色至黃色液體， 不溶于水，溶于乙醇等有機(jī)熔劑，沸點(diǎn)84-85 °C/25mmHg(lit.)，相對密度0.83g/mL(25 °〇(1行.）），折光指數(shù)為 1.437 (/?20/1)(1^.))。
[0005] 1-辛烯-3-醇天然存在于番茄、蘑菇、葡萄、香蕉、甜瓜、草莓等植物中。具有蘑菇 香、青香、蔬菜香以及油膩的氣息。用于調(diào)配蘑菇、西紅柿、土豆、牛奶、堅(jiān)果等食用香精。建 議用量為在最終加香食品中濃度約為〇. 2~6mg/kg。1-辛烯-3-醇的FEMA編號為2805， FDA編號為172. 515,CoE編號為72,中國GB2760 - 1996批準(zhǔn)其為允許使用的食品香料。
[0006] 現(xiàn)有的煙草霉變監(jiān)測方法，有微生物學(xué)檢驗(yàn)，如霉菌計(jì)數(shù)方法，需要5天實(shí)驗(yàn)周 期；化學(xué)方法，如氣相色譜質(zhì)譜法測定霉變煙草中麥角留醇，該方法需要對樣品進(jìn)行衍生化 前處理；高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定霉變煙草中麥角留醇，該方法需要對煙草樣品研 磨萃取，且對儀器條件有相對較高要求，而且麥角留醇更宜應(yīng)用在煙草霉變較明顯情況下， 不能起到很好煙草霉變的預(yù)警作用。因此，需要開發(fā)較為快速簡便的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種快速預(yù)警煙草及煙草制品霉變的方法。
[0008] 基于上述目的，本發(fā)明采取了如下技術(shù)方案： 一種快速預(yù)警煙草及煙草制品霉變的方法，包括如下步驟： 第一步，煙草或煙草制品霉變：稱取0.l~〇. 3g煙草或煙草制品碎片，放入20mL頂空瓶 中，制備系列樣品，首先，對這些樣品進(jìn)行揮發(fā)性有機(jī)化合物分析，作為未霉變對照樣品；然 后將這些樣品不加蓋，放在恒溫恒濕箱中讓其霉變； 第二步，定性識別煙草或煙草制品霉變揮發(fā)性標(biāo)志物：（1)每天抽樣或者在前期隔一 天抽樣、10天以后每天抽樣，使用頂空-固相微萃取-氣相色譜/質(zhì)譜法分析上述實(shí)驗(yàn)中的 樣品，在EI源電子能量70eV下得到全掃描模式標(biāo)準(zhǔn)譜圖，掃描范圍35~350amu; (2)測試柱 空白、樣品瓶空白，比較步驟（1)所得到的譜圖，對出現(xiàn)差異的色譜峰進(jìn)行NIST譜庫檢索； (3)通過上述譜圖篩查，定性識別出煙草或煙草制品中霉變揮發(fā)性有機(jī)化合物中的1-辛 烯-3-醇，并得到1-辛烯-3-醇的保留時(shí)間；（4)保留指數(shù)輔助定性。
[0009] 進(jìn)一步地，還包括第三步，1-辛稀-3-醇的定量：（1)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制，稱取 0. 1~0. 3g未發(fā)生霉變的煙葉碎片或煙絲，加入1-辛烯-3-醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液， 使用頂空-固相微萃取-氣相色譜/質(zhì)譜法分檢測上述標(biāo)準(zhǔn)溶液，相色譜/質(zhì)譜選擇SIM掃 描方式，選擇離子m/z為57、43,以濃度為橫坐標(biāo)、響應(yīng)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線， 依據(jù)工作曲線和1-辛烯-3-醇的響應(yīng)強(qiáng)度進(jìn)行定量。
[0010] 較好地，所述第一步中恒溫恒濕箱的溫度為35°c，相對濕度為85%。
[0011] 具體地，所述第一步中保留指數(shù)輔助定性的具體步驟為：將c5-c12正構(gòu)烷烴混標(biāo) 甲醇溶液在相同條件下，測定其保留時(shí)間，通過計(jì)算公式計(jì)算出1-辛烯-3-醇的保留指數(shù)， 與文獻(xiàn)報(bào)道參考值比較，輔助表征1-辛烯-3-醇定性的準(zhǔn)確性。
[0012] 所述定量時(shí)，頂空固相微萃取的條件為：樣品加熱溫度80°C，預(yù)熱3min，萃取時(shí) 間5min，解吸7min，進(jìn)樣后在250 °C烤針lOmin;氣相色譜-質(zhì)譜條件為：毛細(xì)管色譜柱： DB-5MS(30mX0.25mmX0.25Mm)、DB-VRX(40mX0.18mmX1.00Mm);載氣為 高純氦氣，恒流流速為1. 5mL/min;進(jìn)樣口溫度為230°C，分流比為20:1 ;程序升溫初溫 40°C，保持3min，以6. 0°C/min升至230°C，保持0. 5min;離子源溫度為230°C，傳輸線溫度 為 250°C。
[0013] 本發(fā)明建立了一種新的快速預(yù)警煙草及煙草制品霉變的方法，以及定性或/和定 量測定煙草霉變微生物揮發(fā)性特征有機(jī)化合物1-辛烯-3-醇的HS-SPME-GC/MS方法，與現(xiàn) 有其他技術(shù)相比，有以下優(yōu)點(diǎn)： 本發(fā)明方法可通過定性監(jiān)測煙草微生物揮發(fā)性有機(jī)化合物，如1-辛烯-3-醇，快速預(yù) 警煙草及煙草霉變的發(fā)生； 本發(fā)明方法直接稱取少量的煙草或煙草制品放入頂空瓶密封即可分析，操作很方便， 不需要進(jìn)行研磨粉碎等前處理，與其他方法相比可更好地保持樣品本身形態(tài)特征，不會產(chǎn) 生像其他方法前處理過程對目標(biāo)物造成的損失，提高分析的靈敏度，并大大降低了煙草霉 變試驗(yàn)所需耗費(fèi)的時(shí)間； 本發(fā)明使用固相微萃取SPME自動進(jìn)樣針，對揮發(fā)性有機(jī)化合物有較好的吸附富集，SPME技術(shù)不需要對目標(biāo)物完全萃取、更不需要有機(jī)溶劑萃取進(jìn)樣，在嚴(yán)格控制操作條件，如 萃取時(shí)間和溫度、解吸時(shí)間和溫度，保持頂空瓶內(nèi)基質(zhì)體積一致或接近，比如在稱取煙草或 煙草制品的樣品時(shí)保持稱重質(zhì)量接近。
【附圖說明】
[0014] 圖1是實(shí)施例1中在第0、13、15、16天定性檢測1-辛烯3-醇的色譜峰； 圖2是實(shí)施例1中C5-C12正構(gòu)烷烴混標(biāo)甲醇溶液與定性檢測1-辛烯3-醇相同實(shí)驗(yàn)條 件下的保留時(shí)間； 圖3是實(shí)施例1繪制的1-辛烯3-醇標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 以下結(jié)合具體