本發(fā)明涉及山雞椒組培苗根培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：

山雞椒(litseacubeba(lour.)pers.)，又名山蒼子，山蒼樹等，屬于樟科(lauracea)木姜子屬(litsealam)落葉灌木或小喬木，是原產(chǎn)于我國(guó)的珍貴天然香料植物。其果實(shí)、葉、花等組織可蒸提精油，精油中檸檬醛含量高達(dá)60-90％，是制造高級(jí)化妝品、藥品、食品添加劑、病蟲害防治劑、潤(rùn)滑油等的重要原料。山雞椒精油市場(chǎng)需求巨大，然而在山雞椒精油加工中多利用野生山雞椒資源，并且多以毀滅性的砍樹為主要采摘方式，致使山雞椒資源嚴(yán)重枯竭，苗木供應(yīng)極度緊張。傳統(tǒng)繁殖方式是種子繁殖，然而山雞椒種子發(fā)芽率極低，且優(yōu)良性質(zhì)不能穩(wěn)定遺傳，嚴(yán)重影響山雞椒精油質(zhì)量和產(chǎn)量。采用組織培養(yǎng)方法可極大縮短育苗周期，不僅繁殖率高且可保持繁殖母株優(yōu)良性狀，是解決山雞椒苗木原料供應(yīng)緊張的極佳手段。

目前，采用常見培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗生根培養(yǎng)的生根率可達(dá)80％左右，但是組培生根率可直接影響組培生產(chǎn)成本，而且關(guān)系到移栽成活率的高低，因此有必要對(duì)山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法作進(jìn)一步優(yōu)化。

有鑒于此，特提出本發(fā)明以解決上述技術(shù)問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，采用該生根培養(yǎng)基可有效提高山雞椒組培苗的生根率，以改善采用現(xiàn)有山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗的生根率提升效果不佳的技術(shù)問(wèn)題。

本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)方法。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，主要由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，吲哚丁酸(indolebutyricacid，iba)0.7-0.9mg/l，吲哚乙酸(indoleaceticacid，iaa)0.2-0.3mg/l，萘乙酸(naphthylaceticacid，naa)0.1-0.2mg/l，活性炭(activatedcarbon，ac)0.5-1.0mg/l，蔗糖19.0-21.0g/l和瓊脂7.0-8.0g/l，ph為5.8-6.0。

進(jìn)一步的，所述山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基主要由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.75-0.85mg/l，iaa0.2-0.3mg/l，naa0.1-0.15mg/l，ac0.75-1.0mg/l，蔗糖19.5-20.5g/l和瓊脂7.2-7.8g/l，ph為5.8-6.0。

進(jìn)一步的，所述山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基主要由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.8mg/l，iaa0.2-0.3mg/l，naa0.1mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和瓊脂7.5g/l，ph為5.8。

進(jìn)一步的，所述1/2ms基本培養(yǎng)基包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機(jī)物，主要由以下濃度的組分組成：

大量元素：硝酸鉀950mg/l，硝酸銨825mg/l，七水硫酸鎂185mg/l，磷酸二氫鉀85mg/l，二水氯化鈣220mg/l；

微量元素：四水硫酸錳22.3mg/l，七水硫酸鋅8.6mg/l，硼酸6.2mg/l，碘化鉀0.83mg/l，二水鉬酸鈉0.25mg/l，五水硫酸銅0.025mg/l，六水氯化鈷0.025mg/l；

鐵鹽：七水硫酸亞鐵27.8mg/l，乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/l；

有機(jī)物：甘氨酸2mg/l，鹽酸吡哆醇0.5mg/l，鹽酸硫胺素0.1mg/l，煙酸0.5mg/l，肌醇100mg/l。

進(jìn)一步的，采用所述山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根率大于等于95％。

本發(fā)明還提供了一種山雞椒組培苗的生根培養(yǎng)方法，采用上述的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)。

進(jìn)一步的，所述生根培養(yǎng)的條件為：培養(yǎng)溫度為23-27℃，光照時(shí)間15-16h，黑暗時(shí)間為8-9h，光照強(qiáng)度為1800-2200lux，培養(yǎng)時(shí)間至少為25天。

進(jìn)一步的，所述生根培養(yǎng)的條件為：培養(yǎng)溫度為23-27℃，光照時(shí)間16h，黑暗時(shí)間為8h，光照強(qiáng)度為2000lux，培養(yǎng)時(shí)間為25天。

進(jìn)一步的，選取木質(zhì)化、長(zhǎng)約2-3cm的山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)。

進(jìn)一步的，采用所述山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根率大于等于95％。

與已有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

(1)本發(fā)明提供了一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，該生根培養(yǎng)基是在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上引入吲哚丁酸、吲哚乙酸、萘乙酸等生根誘導(dǎo)物質(zhì)，并利用各物質(zhì)的協(xié)同配合作用并通過(guò)對(duì)各物質(zhì)用量的限定，使得該生根培養(yǎng)基對(duì)于山雞椒組培苗有較強(qiáng)的誘導(dǎo)生根效應(yīng)，從而使得山雞椒組培苗的生根率達(dá)到95％以上，移栽成活率達(dá)到100％，有效改善了采用傳統(tǒng)山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基對(duì)于組培苗的生根率以及移栽成活率提升效果不佳的技術(shù)問(wèn)題。

(2)本發(fā)明提供了一種山雞椒組培苗的生根培養(yǎng)方法，通過(guò)采用上述山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基以及調(diào)整培養(yǎng)條件，使得山雞椒組培苗的生根率有了進(jìn)一步提高，為山雞椒的工廠化生產(chǎn)提供了更可靠、操作性更強(qiáng)的技術(shù)依據(jù)，加快了其繁殖與推廣。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明具體實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)具體實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發(fā)明的一些實(shí)施方式，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為采用實(shí)施例10中的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)條件培養(yǎng)出的組培苗的生根情況；

圖2為采用對(duì)比例14中的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)條件培養(yǎng)出的組培苗的生根情況；

圖3為采用實(shí)施例10中的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)條件培養(yǎng)出的組培苗生根后的移栽成活情況，處于同一水平上的三株組培苗為同一生長(zhǎng)時(shí)期，其中：(a)移栽10天；(b)移栽30天；(c)移栽60天。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過(guò)市售購(gòu)買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，主要由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.7-0.9mg/l，iaa0.2-0.3mg/l，naa0.1-0.2mg/l，ac0.5-1.0mg/l，蔗糖19.0-21.0g/l和瓊脂7.0-8.0g/l，ph為5.8-6.0。

本發(fā)明提供的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，是在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上引入吲哚丁酸、吲哚乙酸、萘乙酸等生根誘導(dǎo)物質(zhì)，并利用各物質(zhì)的協(xié)同配合作用以及對(duì)各物質(zhì)用量的特定限定，使得該生根培養(yǎng)基對(duì)于山雞椒組培苗有較強(qiáng)的誘導(dǎo)生根效應(yīng)，從而使得山雞椒組培苗的生根率達(dá)到95％以上，移栽成活率達(dá)到100％，改善了采用傳統(tǒng)山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基對(duì)于組培苗的生根率以及移栽成活率提升效果不佳的技術(shù)問(wèn)題。

具體的，利用根系吸收營(yíng)養(yǎng)和水分是植物一種本能，培養(yǎng)基中高的營(yíng)養(yǎng)元素及糖可使組培苗產(chǎn)生依賴性而不易生根，減少營(yíng)養(yǎng)成分及糖的濃度即可刺激生根。另外，培養(yǎng)基中的一些無(wú)機(jī)鹽成分不利于根的產(chǎn)生，故要適當(dāng)降低無(wú)機(jī)鹽濃度才有利于根的分化，因此本發(fā)明在以ms為基本培養(yǎng)基的生根培養(yǎng)中，大量元素要降到1/2，故選用1/2ms為基本培養(yǎng)基。

在組織培養(yǎng)中，外植體的生根與外源激素的作用密不可分，其中適當(dāng)濃度的生長(zhǎng)素類物質(zhì)對(duì)生根影響很大，具有一定的誘導(dǎo)分化作用。不同植物對(duì)生根誘導(dǎo)所需要生長(zhǎng)素類物質(zhì)的種類也不同。

本發(fā)明中，主要是選用吲哚丁酸、吲哚乙酸、萘乙酸生長(zhǎng)素類物質(zhì)作為生根誘導(dǎo)物質(zhì)。

其中，吲哚丁酸，又稱iba，其主要作用是誘導(dǎo)插枝生根，尤其是不定根的生長(zhǎng)。

iba典型但非限定的濃度為0.7mg/l、0.72mg/l、0.74mg/l、0.76mg/l、0.78mg/l、0.80mg/l、0.82mg/l、0.84mg/l、0.86mg/l、0.88mg/l或0.90mg/l。

吲哚乙酸，又稱iaa，可由莖、葉和根系吸收，使用濃度不同，既可起促進(jìn)作用，也可起抑制作用。穩(wěn)定性相對(duì)較差，強(qiáng)光照條件下更容易氧化分解，用于組織培養(yǎng)中，誘導(dǎo)愈傷組織和根的形成，以加速根的形成和提高植株生根的百分率。

iaa典型但非限定的濃度為0.2mg/l、0.21mg/l、0.22mg/l、0.23mg/l、0.24mg/l、0.25mg/l、0.26mg/l、0.27mg/l、0.28mg/l、0.29mg/l或0.3mg/l。

萘乙酸，又稱naa，為人工合成的生長(zhǎng)素類物質(zhì)，在使用過(guò)程中不易氧化、穩(wěn)定性更強(qiáng)。

naa典型但非限定的濃度為0.1mg/l、0.11mg/l、0.12mg/l、0.13mg/l、0.14mg/l、0.15mg/l、0.16mg/l、0.17mg/l、0.18mg/l、0.19mg/l或0.2mg/l。

在培養(yǎng)基中加入活性炭(ac)，其目的主要是利用其吸附能力，減少一些有害物質(zhì)的不利影響，同時(shí)也創(chuàng)造暗環(huán)境，對(duì)某些植物誘導(dǎo)生根有利。

在本發(fā)明中，ac典型但非限定的濃度為0.5mg/l、0.55mg/l、0.6mg/l、0.65mg/l、0.7mg/l、0.75mg/l、0.8mg/l、0.85mg/l、0.9mg/l、095mg/l、或1.0mg/l。

在組織快繁中，被培養(yǎng)的培養(yǎng)物大多不能進(jìn)行光合作用，能進(jìn)行的也不能滿足其對(duì)糖類的需求，因此必須在培養(yǎng)基中添加糖作為碳源和能源，同時(shí)對(duì)維持培養(yǎng)基一定的滲透壓也有重要作用。而蔗糖是最重要的碳源之一。

在本發(fā)明中，蔗糖典型但非限定的濃度為19.0mg/l、19.2mg/l、19.4mg/l、19.6mg/l、19.8mg/l、20.0mg/l、20.2mg/l、20.4mg/l、20.6mg/l、20.8mg/l或21.0mg/l。

瓊脂典型但非限定的濃度為7.0mg/l、7.1mg/l、7.2mg/l、7.3mg/l、7.4mg/l、7.5mg/l、7.6mg/l、7.7mg/l、7.8mg/l、7.9mg/l或8.0mg/l。

本發(fā)明所述的“主要由……組成”，意指其除所述組分外，還可以包括其他組分，這些其他組分賦予山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基不同的特性。除此之外，本發(fā)明所述的“主要由……組成”，還可以替換為封閉式的“為”或“由……組成”。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基主要由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.75-0.85mg/l，iaa0.2-0.3mg/l，naa0.1-0.15mg/l，ac0.75-1.0mg/l，蔗糖19.5-20.5g/l和瓊脂7.2-7.8g/l，ph為5.8-6.0。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基主要由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.8mg/l，iaa0.2-0.3mg/l，naa0.1mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l，瓊脂7.5g/l，ph為5.8。

組培苗對(duì)生根培養(yǎng)基中的添加物，尤其是生根誘導(dǎo)物質(zhì)的種類和濃度非常敏感，通過(guò)合理選擇和搭配山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基中的各組分，使得各組分之間的協(xié)同配合作用更強(qiáng)，山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基對(duì)于組培苗的生根誘導(dǎo)作用更強(qiáng)，使得生根率進(jìn)一步提高。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述1/2ms基本培養(yǎng)基包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機(jī)物，主要由以下濃度的組分組成：

大量元素：硝酸鉀950mg/l，硝酸銨825mg/l，七水硫酸鎂185mg/l，磷酸二氫鉀85mg/l，二水氯化鈣220mg/l；

微量元素：四水硫酸錳22.3mg/l，七水硫酸鋅8.6mg/l，硼酸6.2mg/l，碘化鉀0.83mg/l，二水鉬酸鈉0.25mg/l，五水硫酸銅0.025mg/l，六水氯化鈷0.025mg/l；

鐵鹽：七水硫酸亞鐵27.8mg/l，乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/l；

有機(jī)物：甘氨酸2mg/l，鹽酸吡哆醇0.5mg/l，鹽酸硫胺素0.1mg/l，煙酸0.5mg/l，肌醇100mg/l。

與ms基本培養(yǎng)基相比，1/2ms基本培養(yǎng)基中的大量元素要降到1/2，其他微量元素、鐵鹽、有機(jī)物濃度不變。

應(yīng)該說(shuō)明的是，上述1/2ms基本培養(yǎng)基中的各組分以及iba、iaa、naa、ac、蔗糖、瓊脂等各物質(zhì)的濃度均具有相同的計(jì)算基準(zhǔn)。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，采用所述山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根率大于等于95％。

采用的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗有較強(qiáng)的生根誘導(dǎo)效應(yīng)，生根率大于等于95％，典型但非限制性的生根率為95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％、99.5％或100％。

根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，還提供了一種山雞椒組培苗的生根培養(yǎng)方法，采用上述山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)。

成功的組織培養(yǎng)，在很大程度上依賴于對(duì)培養(yǎng)基的選擇。在山雞椒組培苗生根培養(yǎng)方法中采用上述山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，該生根培養(yǎng)基是利用iaa、iba、naa與1/2ms基本培養(yǎng)基協(xié)同配合作用，以及在適宜的培養(yǎng)條件下，使得山雞椒組培苗的生根率可達(dá)到95％以上。

根的生長(zhǎng)關(guān)系到移栽成活率的高低，高的生根率有助于移栽成活率的提升。采用本發(fā)明提供的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，并且在適宜的培養(yǎng)條件下，生根率可達(dá)95％以上，移栽成活率達(dá)到100％。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述生根培養(yǎng)的條件為：培養(yǎng)溫度為23-27℃，光照時(shí)間15-16h，黑暗時(shí)間為8-9h，光照強(qiáng)度為1800-2200lux，培養(yǎng)時(shí)間至少為25天。

生根培養(yǎng)條件對(duì)于組培苗的生根發(fā)育以及后期的移栽成活具有很大影響。在本發(fā)明中，典型但非限制性的培養(yǎng)溫度為23℃、23.5℃、24℃、24.5℃、25℃、25.5℃、26℃、26.5℃或27℃。

典型但非限制性的光照時(shí)間為15h、15.5h或16h，黑暗時(shí)間為8h、8.5h或9h。

典型但非限制性的光照強(qiáng)度為1800lux、1850lux、1900lux、1950lux、2000lux、2050lux、2100lux、2150lux或2200lux。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述生根培養(yǎng)的條件為：培養(yǎng)溫度為23-27℃，光照時(shí)間16h，黑暗時(shí)間為8h，光照強(qiáng)度為2000lux，培養(yǎng)時(shí)間為25天。

通過(guò)對(duì)生根培養(yǎng)條件的進(jìn)一步限定，進(jìn)一步提高山雞椒組培苗的生根率以及后期的移栽成活率。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，選取木質(zhì)化、長(zhǎng)約2-3cm的山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)。

山雞椒組培苗的來(lái)源主要是通過(guò)將選取的外植體采用初代培養(yǎng)后再繼代培養(yǎng)得到。

材料選取：采取健康、無(wú)病蟲害的山雞椒半木質(zhì)化帶芽枝條作為外植體；

材料預(yù)處理：將外植體在自來(lái)水浸泡16小時(shí)，剪取帶芽莖段2-3cm，用自來(lái)水沖洗干凈，洗衣粉溶液浸泡10-15分鐘，流水沖洗1小時(shí)；

消毒處理：70％酒精浸泡20s，0.1％升汞消毒7min，無(wú)菌水沖洗5遍；

初代培養(yǎng)：接種于初代培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)分化培養(yǎng)，得到初代組培苗；

繼代培養(yǎng)：再將初代組培苗置于繼代培養(yǎng)基中，得到健壯的繼代苗。

在得到的繼代苗中選取木質(zhì)化、長(zhǎng)約2-3cm的山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，可以促使山雞椒無(wú)根苗出根整齊一致，提高生根率。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，采用上述山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根率大于等于95％。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基主要由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，吲哚丁酸0.7-0.9mg/l，吲哚乙酸0.2-0.3mg/l，萘乙酸0.1-0.2mg/l，活性炭0.5-1.0mg/l，蔗糖19.0-21.0g/l，瓊脂7.0-8.0g/l，ph為5.8-6.0；

優(yōu)選的，所述山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基主要由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，吲哚丁酸0.8mg/l，吲哚乙酸0.2-0.3mg/l，萘乙酸0.1mg/l，活性炭1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和瓊脂7.5g/l，ph為5.8。

下面結(jié)合具體實(shí)施例和對(duì)比例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。

材料選?。翰扇〗】?、無(wú)病蟲害的山雞椒半木質(zhì)化帶芽枝條作為外植體；

材料預(yù)處理：將外植體在自來(lái)水浸泡16h，剪取帶芽莖段2-3cm，用自來(lái)水沖洗干凈，洗衣粉溶液浸泡10-15min，流水沖洗1h；

消毒處理：70％酒精浸泡20s，0.1％升汞消毒7min，無(wú)菌水沖洗5遍；

初代培養(yǎng)：接種于初代培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)分化培養(yǎng)，得到初代組培苗，初代培養(yǎng)基為ms+ba2.0mg/l+iba0.1mg/l；

繼代培養(yǎng)：再將初代組培苗置于繼代培養(yǎng)基中，得到健壯的繼代苗，繼代培養(yǎng)基為ms+ba2.0mg/l+iba0.1mg/l；

其中ba(benzylaminopurine)為芐氨基腺嘌呤。

在得到的繼代苗中選取木質(zhì)化、長(zhǎng)約2-3cm的山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，選用實(shí)施例1-14和對(duì)比例1-16的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法進(jìn)行生根培養(yǎng)。

實(shí)施例1

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.7mg/l，iaa0.2mg/l，naa0.1mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖19.0g/l和瓊脂7.0g/l，ph為6.0。

實(shí)施例2

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.7mg/l，iaa0.2mg/l，naa0.1mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖21.0g/l和瓊脂8.0g/l，ph為6.0。

實(shí)施例3

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.8mg/l，iaa0.2mg/l，naa0.1mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和瓊脂7.5g/l，ph為5.8。

實(shí)施例4

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.8mg/l，iaa0.3mg/l，naa0.1mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和瓊脂7.5g/l，ph為5.8。

實(shí)施例5

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.8mg/l，iaa0.2mg/l，naa0.1mg/l，ac0.5mg/l，蔗糖20.0g/l和瓊脂7.5g/l，ph為5.8。

實(shí)施例6

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.8mg/l，iaa0.3mg/l，naa0.2mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和瓊脂7.5g/l，ph為5.8。

實(shí)施例7

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.9mg/l，iaa0.25mg/l，naa0.15mg/l，ac0.8mg/l，蔗糖21.0g/l和瓊脂7.0g/l，ph為5.9。

實(shí)施例8

一種山雞椒組培苗的生根培養(yǎng)方法，采用實(shí)施例1的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)的條件為：培養(yǎng)溫度為23℃左右，光照時(shí)間15h，黑暗時(shí)間為9h，光照強(qiáng)度為1900lux，培養(yǎng)時(shí)間為25天。

實(shí)施例9

一種山雞椒組培苗的生根培養(yǎng)方法，采用實(shí)施例2的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)的條件與實(shí)施例8中的生根培養(yǎng)的條件相同。

實(shí)施例10

一種山雞椒組培苗的生根培養(yǎng)方法，采用實(shí)施例3的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)的條件為：培養(yǎng)溫度為25℃左右，光照時(shí)間16h，黑暗時(shí)間為8h，光照強(qiáng)度為2000lux，培養(yǎng)時(shí)間為25天。

實(shí)施例11

一種山雞椒組培苗的生根培養(yǎng)方法，采用實(shí)施例4的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)的條件與實(shí)施例10的生根培養(yǎng)的條件相同。

實(shí)施例12

一種山雞椒組培苗的生根培養(yǎng)方法，采用實(shí)施例5的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)的條件與實(shí)施例10的生根培養(yǎng)的條件相同。

實(shí)施例13

一種山雞椒組培苗的生根培養(yǎng)方法，采用實(shí)施例6的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)的條件與實(shí)施例10的生根培養(yǎng)的條件相同。

實(shí)施例14

一種山雞椒組培苗的生根培養(yǎng)方法，采用實(shí)施例7的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)的條件為：培養(yǎng)溫度為27℃左右，光照時(shí)間16h，黑暗時(shí)間為8h，光照強(qiáng)度為2200lux，培養(yǎng)時(shí)間為25天。

對(duì)比例1

本對(duì)比例為實(shí)施例10的對(duì)比例，除了iba的濃度為0.50mg/l，山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基的其他組分與濃度以及培養(yǎng)條件與實(shí)施例10相同。

對(duì)比例2

本對(duì)比例為實(shí)施例11的對(duì)比例，除了iba的濃度為0.50mg/l，山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基的其他組分與濃度以及培養(yǎng)條件與實(shí)施例11相同。

對(duì)比例3

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.5mg/l，iaa0.1mg/l，naa0.1mg/l，ac0.5mg/l，蔗糖20.0g/l和瓊脂7.5g/l，ph為5.8；

采用該生根培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為25℃左右，光照時(shí)間16h，黑暗時(shí)間為8h，光照強(qiáng)度為2000lux，培養(yǎng)時(shí)間為25天。

對(duì)比例4

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.5mg/l，iaa0.2mg/l，naa0.4mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和瓊脂7.5g/l，ph為5.8；

采用該生根培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為25℃左右，光照時(shí)間16h，黑暗時(shí)間為8h，光照強(qiáng)度為2000lux，培養(yǎng)時(shí)間為25天。

對(duì)比例5

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.5mg/l，iaa0.3mg/l，naa0.4mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和瓊脂7.5g/l，ph為5.8。

采用該生根培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件與對(duì)比例4相同。

對(duì)比例6

本對(duì)比例為實(shí)施例10的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，除了naa的濃度為0.40mg/l，山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基的其他組分與濃度以及培養(yǎng)條件與實(shí)施例10相同。

對(duì)比例7

本對(duì)比例為實(shí)施例11的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，除了naa的濃度為0.40mg/l，山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基的其他組分與濃度以及培養(yǎng)條件與實(shí)施例11相同。

對(duì)比例8

本對(duì)比例為實(shí)施例12的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，除了iaa的濃度為0.10mg/l，山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基的其他組分與濃度以及培養(yǎng)條件與實(shí)施例12相同。

對(duì)比例9

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.20mg/l，iaa0.20mg/l，naa0.10mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖19.0g/l和瓊脂7.0g/l，ph為5.9；

采用該生根培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為26℃左右，光照時(shí)間16h，黑暗時(shí)間為8h，光照強(qiáng)度為2100lux，培養(yǎng)時(shí)間為25天。

對(duì)比例10

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.20mg/l，iaa0.30mg/l，naa0.10mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖19.0g/l和瓊脂7.0g/l，ph為5.9；

采用該生根培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件與對(duì)比例9相同。

對(duì)比例11

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.20mg/l，iaa0.20mg/l，naa0.40mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖19.0g/l和瓊脂7.0g/l，ph為5.9；

采用該生根培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件與對(duì)比例9相同。

對(duì)比例12

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.20mg/l，iaa0.30mg/l，naa0.40mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖19.0g/l和瓊脂7.0g/l，ph為5.9；

采用該生根培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件與對(duì)比例9相同。

對(duì)比例13

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.20mg/l，iaa0.10mg/l，naa0.10mg/l，ac0.5mg/l，蔗糖21.0g/l和瓊脂8.0g/l，ph為6.0；

采用該生根培養(yǎng)基對(duì)山雞椒組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件與對(duì)比例9相同。

對(duì)比例14

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.80mg/l，iaa0.20mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和瓊脂7.5g/l，ph為5.8。

本對(duì)比例為實(shí)施例10的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，除了在該山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基中未添加naa外，山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基的其他組分與濃度以及培養(yǎng)條件與實(shí)施例10相同。

對(duì)比例15

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.80mg/l，naa0.20mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和瓊脂7.5g/l，ph為5.8；

本對(duì)比例為實(shí)施例10的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，除了在該山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基中未添加iaa外，山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基的其他組分與濃度以及培養(yǎng)條件與實(shí)施例10相同。

對(duì)比例16

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iaa0.20mg/l，naa0.10mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和瓊脂7.5g/l，ph為5.8；

本對(duì)比例為實(shí)施例10的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，除了在該山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基中未添加iba外，山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基的其他組分與濃度以及培養(yǎng)條件與實(shí)施例10相同。

對(duì)比例17

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iba0.8mg/l，iaa0.3mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和瓊脂7.5g/l，ph為5.8；

本對(duì)比例為實(shí)施例11的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，除了在該山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基中未添加naa外，山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基的其他組分與濃度以及培養(yǎng)條件與實(shí)施例11相同。

對(duì)比例18

一種山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基，由以下濃度的組分組成：1/2ms基本培養(yǎng)基，iaa0.30mg/l，naa0.10mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和瓊脂7.5g/l，ph為5.8；

本對(duì)比例為實(shí)施例11的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，除了在該山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基中未添加iba外，山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基的其他組分與濃度以及培養(yǎng)條件與實(shí)施例11相同。

對(duì)比例19

本對(duì)比例為實(shí)施例11的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，除了蔗糖的濃度為17.00mg/l外，山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基的其他組分與濃度以及培養(yǎng)條件與實(shí)施例11相同。

需要說(shuō)明的是，上述所有實(shí)施例和對(duì)比例中采用的1/2ms基本培養(yǎng)基組成均相同，包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機(jī)物，主要由以下濃度的組分組成：

大量元素：硝酸鉀950mg/l，硝酸銨825mg/l，七水硫酸鎂185mg/l，磷酸二氫鉀85mg/l，二水氯化鈣220mg/l；

微量元素：四水硫酸錳22.3mg/l，七水硫酸鋅8.6mg/l，硼酸6.2mg/l，碘化鉀0.83mg/l，二水鉬酸鈉0.25mg/l，五水硫酸銅0.025mg/l，六水氯化鈷0.025mg/l；

鐵鹽：七水硫酸亞鐵27.8mg/l，乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/l；

有機(jī)物：甘氨酸2mg/l，鹽酸吡哆醇0.5mg/l，鹽酸硫胺素0.1mg/l，煙酸0.5mg/l，肌醇100mg/l。

實(shí)驗(yàn)例1

采用上述實(shí)施例8-14和對(duì)比例1-19的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基在各自的培養(yǎng)條件下對(duì)山雞椒組培苗進(jìn)行誘導(dǎo)生根實(shí)驗(yàn)，均取50株，對(duì)生根率、平均根數(shù)、平均根長(zhǎng)和移栽成活率進(jìn)行測(cè)定。其中，生根率(％)＝生根株數(shù)/接種總株數(shù)×100％，平均根數(shù)＝總生根數(shù)/總株數(shù)，平均根長(zhǎng)＝所有根總長(zhǎng)/總生根數(shù)，移栽成活率＝移栽成活株數(shù)/移栽總株數(shù)×100％，需要說(shuō)明的是，各實(shí)施例與對(duì)比例所采用的移栽基質(zhì)均相同，且移栽成活率是在移栽后30天進(jìn)行統(tǒng)計(jì)的，具體測(cè)定結(jié)果見表1：

表1各實(shí)施例和對(duì)比例中的山雞椒組培苗的生根情況測(cè)定結(jié)果

從表1中可以看出，實(shí)施例8-14提供的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基對(duì)于山雞椒組培苗的生根誘導(dǎo)效應(yīng)遠(yuǎn)高于對(duì)比例1-19中的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基。

具體的，實(shí)施例11為實(shí)施例10的對(duì)照實(shí)驗(yàn)，兩者不同之處在于山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基中iaa的濃度不同。iaa的濃度不同，對(duì)于組培苗生根誘導(dǎo)效應(yīng)不同。

實(shí)施例12為實(shí)施例10的對(duì)照實(shí)驗(yàn)，兩者不同之處在于山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基中活性炭的濃度不同。在一定范圍內(nèi)，活性炭的含量越多，越能吸附培養(yǎng)基中的有害物質(zhì)，從而對(duì)于山雞椒組培苗誘導(dǎo)生根有利。

對(duì)比例1和對(duì)比例2分別為實(shí)施例10和實(shí)施例11的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，在實(shí)施例10和實(shí)施例11中的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基中iba濃度為0.8mg/l，對(duì)比例1和對(duì)比例2中的iba濃度為0.5mg/l。從表1中數(shù)據(jù)可以看出，山雞椒組培苗對(duì)于iba的濃度的濃度較為敏感，iba能夠促進(jìn)根系條數(shù)的增加，對(duì)于山雞椒組培苗的生根生長(zhǎng)有顯著作用。

對(duì)比例4為對(duì)比例1的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，兩者不同之處在于naa的濃度不同。由此可以看出，naa濃度的變化，也直接影響著山雞椒組培苗的生根率。

對(duì)比例6和對(duì)比例7分別為實(shí)施例10和實(shí)施例11的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，在實(shí)施例10和實(shí)施例11的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基中naa的濃度為0.1mg/l，對(duì)比例1和對(duì)比例2中naa的濃度為0.4mg/l。從表1中數(shù)據(jù)可以看出，naa濃度越大，反而不利于山雞椒組培苗生根率的提升，故naa的濃度應(yīng)在適宜的范圍內(nèi)。

對(duì)比例8為實(shí)施例12的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，兩者不同之處在于山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基中iaa的濃度不同。當(dāng)iaa的濃度超出0.20-0.30mg/l這個(gè)范圍時(shí)，山雞椒組培苗生根率有所下降。

對(duì)比例14-16均為實(shí)施例10的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，實(shí)施例10中山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基為1/2ms+iba0.8mg/l+iaa0.2mg/l+naa0.1mg/l+ac1mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂7.5g/l，對(duì)比例14中山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基為1/2ms+iba0.8mg/l+iaa0.2mg/l+ac1mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂7.5g/l，對(duì)比例15中山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基為1/2ms+iba0.8mg/l+naa0.1mg/l+ac1mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂7.5g/l，對(duì)比例16中山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基為1/2ms+iaa0.2mg/l+naa0.1mg/l+ac1mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂7.5g/l，可以看出，對(duì)比例14-16采用的生根誘導(dǎo)物質(zhì)為iba、iaa和naa其中兩種物質(zhì)的組合。從表1中可以看出，采用實(shí)施例10中的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基不論是從生根率或者平均根數(shù)、平均根長(zhǎng)來(lái)講，還是從移栽成活率來(lái)講，均遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于對(duì)比例14-16。

圖1為采用實(shí)施例10中的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)條件培養(yǎng)出的組培苗的生根情況，圖2為采用對(duì)比例14中的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)條件培養(yǎng)出的組培苗的生根情況，圖1和圖2所示僅是實(shí)施例10和對(duì)比例14在各自50株平行樣中具有代表性的一株。從圖1和2中也可以很直觀的看出，采用實(shí)施例10進(jìn)行生根培養(yǎng)的山雞椒組培苗根長(zhǎng)較長(zhǎng)，且枝芽長(zhǎng)勢(shì)較好，其生根情況明顯優(yōu)于采用對(duì)比例14培養(yǎng)的山雞椒組培苗的生根情況。而且從圖3中可以看出，采用實(shí)施例10進(jìn)行生根培養(yǎng)的山雞椒組培苗在后期的移栽過(guò)程中成活情況良好。

對(duì)比例17和對(duì)比例18均為實(shí)施例11的對(duì)比實(shí)驗(yàn)。與實(shí)施例11不同，對(duì)比例17山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基中未添加naa，對(duì)比例18山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基中未添加iba。由表1數(shù)據(jù)可以看出，采用實(shí)施例11山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基的生根率可高達(dá)100％，即實(shí)現(xiàn)100％生根，而且平均根數(shù)和平均根長(zhǎng)都處于較高水平。而采用對(duì)比例17和對(duì)比例18山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基的生根率和組培苗生根的平均根數(shù)明顯低于實(shí)施例11，生根率和平均根數(shù)則直接影響到后期的移栽成活率，故采用對(duì)比例17和對(duì)比例18的生根培養(yǎng)基培養(yǎng)的山雞椒組培苗的移栽成活率也遠(yuǎn)低于實(shí)施例11。

由此可以看出，iba、iaa和naa這三種物質(zhì)之間存在著協(xié)同配合關(guān)系，而且這種協(xié)同配合關(guān)系是在特定的濃度范圍內(nèi)才得以實(shí)現(xiàn)的。換而言之，采用iba、iaa和naa這三種物質(zhì)需要在特定范圍內(nèi)，才能產(chǎn)生對(duì)山雞椒組培苗的良好的誘導(dǎo)生根效應(yīng)。偏離此特定范圍時(shí)，生根率、平均根數(shù)、平均根長(zhǎng)以及移栽成活率都有所降低。

對(duì)比例19也為實(shí)施例11的對(duì)比實(shí)驗(yàn)。兩者不同之處在于生根培養(yǎng)基中蔗糖的濃度不同。采用對(duì)比例19生根培養(yǎng)基的山雞椒組培苗的生根情況劣于實(shí)施例11。蔗糖作為山雞椒組培苗生根培養(yǎng)中的碳源，濃度過(guò)低，會(huì)直接影響到山雞椒組培苗的生根情況，故蔗糖濃度應(yīng)處于本發(fā)明限定的濃度范圍內(nèi)。

綜上所述，本發(fā)明提供的山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基通過(guò)各物質(zhì)之間的協(xié)同配合作用以及對(duì)于特定濃度的限定，使得山雞椒組培苗的生根率可達(dá)到95％以上，移栽成活率達(dá)到100％，相比采用傳統(tǒng)山雞椒組培苗生根培養(yǎng)基對(duì)于山雞椒組培苗的生根率、移栽成活率均有了顯著的提升，為山雞椒的工廠化生產(chǎn)提供了更可靠、操作性更強(qiáng)的技術(shù)依據(jù)，加快了其繁殖與推廣。

最后應(yīng)說(shuō)明的是：以上各實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制；盡管參照前述各實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實(shí)施例技術(shù)方案的范圍。