本發(fā)明涉及一種益生菌制劑領(lǐng)域，具體涉及一種防癌抗癌益生菌組合物及其制備方法。技術(shù)背景肝癌是全球常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率居所有腫瘤的第7位，病死率居第3位；在男性人群中，其發(fā)病率居第5位，病死率居第2位。目前，大部分早期肝癌可通過手術(shù)、射頻消融和肝動(dòng)脈化學(xué)療法栓塞等方法治愈，但很多患者被發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于肝癌晚期，同時(shí)對(duì)放射療法和化學(xué)療法缺乏敏感性，預(yù)后很差，因而研究肝癌與腸道微生態(tài)的關(guān)系可能是肝癌早期診治的新策略。腸道微生態(tài)紊亂促進(jìn)肝癌進(jìn)展。Fox等分別在致癌化合物和肝炎病毒轉(zhuǎn)基因誘導(dǎo)的小鼠肝癌模型中發(fā)現(xiàn)，腸道微生態(tài)與肝癌形成風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)，這一發(fā)現(xiàn)為肝癌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和預(yù)防提供了理論支持。Dapito等率先指出，腸道微生態(tài)和TLR4通過增加肝臟有絲分裂原免疫調(diào)節(jié)的表達(dá)和阻礙凋亡來促進(jìn)肝癌進(jìn)展，而腸道無菌狀態(tài)則有效抑制肝癌的發(fā)展，明顯減少肝癌體積，這表明腸道微生態(tài)可作為晚期肝病向肝癌進(jìn)展的治療靶標(biāo)。Zhang等在通過致癌化合物誘導(dǎo)的肝癌模型中發(fā)現(xiàn)了腸道微生態(tài)在肝癌發(fā)生、發(fā)展機(jī)制中的重要性，通過益生菌對(duì)腸道微生態(tài)進(jìn)行適度調(diào)節(jié)，這可能成為一種新型的阻止肝癌進(jìn)展的方法。隨后，Yoshimoto等報(bào)道，在小鼠肝癌模型中，高脂肪飲食會(huì)增加腫瘤的發(fā)生概率。高脂肪飲食改變了腸道細(xì)菌的組成，導(dǎo)致"脫氧膽酸"生成增加，后者是微生物膽汁酸代謝的副產(chǎn)品，會(huì)造成DNA損傷。這些發(fā)現(xiàn)表明飲食、微生物群和癌癥之間的復(fù)雜的機(jī)制性聯(lián)系，也提示了以腸道微生態(tài)為作用靶點(diǎn)的新型治療方法。然而，目前有關(guān)臨床肝癌患者腸道微生態(tài)的變化還鮮見報(bào)道，是亟待研究的重要問題。益生菌是一類對(duì)宿主有益的活性微生物，是定植于人體腸道、生殖系統(tǒng)內(nèi)，能產(chǎn)生確切健康功效從而改善宿主微生態(tài)平衡、發(fā)揮有益作用的活性有益微生物的總稱。當(dāng)人體內(nèi)有足夠的益生菌時(shí)，人就會(huì)處于健康的狀態(tài)，但是一旦體內(nèi)菌群失去平衡，比如菌種間比例發(fā)生大幅變化或者超出正常數(shù)值時(shí)，那么腹瀉、過敏、胃口不佳、疲倦、免疫力低等一系列病癥就會(huì)隨之而來，人體的健康就會(huì)亮紅燈，而這時(shí)適當(dāng)添加益生菌或益生元，協(xié)助體內(nèi)菌群平衡，才能讓人重現(xiàn)健康狀態(tài)。在正常情況下，成年人體內(nèi)的有益菌群同有害菌群之間處于相對(duì)平衡狀態(tài)。一旦平衡受到破壞，如服用抗生素、放療、化療、情緒壓抑、身體衰弱、缺乏免疫力等等，就會(huì)導(dǎo)致雙歧桿菌大量消亡，而有害細(xì)菌卻大量繁殖，后果是，人體健康處于不佳狀態(tài)：對(duì)疾病的抵抗力降低，產(chǎn)氣莢膜梭茵等腐敗細(xì)菌在腸道中分解食物殘?jiān)煞?，產(chǎn)生氨、胺類、硫化氫、糞臭素、吲哚、亞硝酸鹽、細(xì)菌毒素等有害物質(zhì)，人體長(zhǎng)期吸收會(huì)引起腸功能紊亂，導(dǎo)致便秘、腹瀉、發(fā)育受阻、肝臟受損以及動(dòng)脈硬化、膽固醇增加、血壓升高、免疫力下降，甚至誘發(fā)癌癥。國(guó)內(nèi)外學(xué)者報(bào)告雙歧桿菌具有激活機(jī)體巨噬細(xì)胞或LAK細(xì)胞的吞噬活性，并產(chǎn)生一定量的細(xì)胸因子如TNF—α、INF—γ等可直接殺死腫瘤細(xì)胞。抑制腫瘤內(nèi)血管形成，破壞腫瘤組織微血管，最終導(dǎo)致出血、壞死。雙歧桿菌等生理性細(xì)菌可通過腫瘤細(xì)胞凋亡的表達(dá)的相關(guān)基因，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡而達(dá)到抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用。誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的老化和異質(zhì)化，以便促使機(jī)體內(nèi)LAK和天噬細(xì)胞的識(shí)別和捕殺，達(dá)到清除腫瘤細(xì)胞的目的?？梢栽黾訖C(jī)體對(duì)放療的放射線的耐受性，改善放化療患者的惡心、嘔吐等胃腸道副作用。2015年一篇發(fā)表在Science雜志上的文章：CommensalBifidobacteriumpromotesantitumorimmunityandfacilitatesanti-PD-L1efficacy，揭示共生的雙歧桿菌提高抗腫瘤免疫力，并且促進(jìn)抗PD-L1腫瘤免疫療法的效果。由此可見益生菌對(duì)于人體的防癌抗癌具有十分重要的作用，但是目前市場(chǎng)上從益生菌出發(fā)制備的防癌抗癌的藥物較少。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)上述問題，本發(fā)明提供一種防癌抗癌益生菌制劑及其制備方法，通過食用益生菌制劑，對(duì)于易感人群具有防癌的效果，對(duì)于癌癥患者，可以通過食療抵抗癌癥，達(dá)到防癌抗癌的效果，。為實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：一種防癌抗癌益生菌制劑，該益生菌制劑包含益生菌、益生元、膳食纖維、無水葡萄糖、維生素。進(jìn)一步，該益生菌制劑各成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為：益生菌5％～7％；益生元10％～20％；膳食纖維60％～75％；無水葡萄糖5％～10％；維生素1％～3％。進(jìn)一步，上述益生菌為乳雙歧桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌、唾液乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、干酪乳桿菌、瑞士乳桿菌、短乳酸桿菌中的三種或者三種種以上混合而成；其中，益生菌活菌量為109～1011CFU/g。進(jìn)一步，上述益生菌為嗜酸乳桿菌、乳雙歧桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌、青春雙歧桿菌混合而成。進(jìn)一步，上述益生元為低聚果糖、低聚乳果糖、低聚半乳糖中的任一種或兩種混合而成。進(jìn)一步，上述益生元為低聚果糖、低聚半乳糖混合而成。進(jìn)一步，上述維生素為維生素B1、維生素B12、維生素D2、維生素D3、維生素A、維生素C、維生素E中的任意四種或者四種以上混合而成。進(jìn)一步，上述維生素為維生素A、維生素B1、維生素C、維生素E混合而成。進(jìn)一步，上述膳食纖維為低聚木糖、蘋果果膠、柚皮果膠、藍(lán)莓果膠中任意兩種或者兩種以上混合而成。一種制備上述益生菌制劑的方法，包括如下步驟：1)按配方量將益生菌、益生元、膳食纖維、無水葡萄糖、維生素依次置于無菌混合機(jī)內(nèi)，混合均勻；2)使用全自動(dòng)膠囊充填機(jī)充填步驟1)完成后的混合物，填充好的腸溶膠囊使用膠囊拋光機(jī)清除吸附在膠囊外壁上的細(xì)粉，使膠囊光潔，無菌下包裝。雙歧桿菌和乳酸菌等有益細(xì)菌則在抑制人體有害細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖，抵抗病原茵的感染，合成人體需要的維生素，促進(jìn)人體對(duì)礦物質(zhì)的吸收，產(chǎn)生醋酸、丙酸、丁酸和乳酸等有機(jī)酸刺激腸道蠕動(dòng)，促進(jìn)排便，防止便秘以及抑制腸道腐敗作用、凈化腸道環(huán)境、分解致癌物質(zhì)、刺激人體免疫系統(tǒng)，從而提高抗病能力、降低血液膽固醇、延緩衰老等方面有著重要作用。大凡腸道中雙歧桿菌多的人身體比較健康，而腐敗細(xì)菌多的人，身體衰弱多病。因此可以說，腸道中雙歧桿菌的多少，是判斷人體健康的晴雨表。雙歧桿菌有體內(nèi)結(jié)合黃曲霉素能力。此外雙歧桿菌可以與亞硝酸胺或亞硝基胍等誘導(dǎo)劑發(fā)生結(jié)合，掩蓋誘變劑的活性基因，或使誘變劑活性基因降解，致其推動(dòng)活性。雙歧桿菌與煙熏肉或油炸食品誘變?cè)哂懈呶叫?，從而保護(hù)機(jī)體細(xì)胞免受這些致癌物質(zhì)損害。雙歧桿菌可通過調(diào)整腸道正常菌群，抑制腸道許多腐敗菌生長(zhǎng)，從而減少一些致癌物質(zhì)產(chǎn)生，從而大大降低了消化道癌癥的發(fā)生率。膳食纖維是是一種多糖?？扇苄陨攀忱w維在胃腸道內(nèi)和淀粉等碳水化合物交織在一起，并延緩后者的吸收；不可溶性膳食纖維可促進(jìn)人體胃腸道蠕動(dòng)，加快食物通過胃腸道，減少吸收；大腸中的不可溶性纖維還可以吸收水分軟化大便，從而防治便秘。相比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果在于：1.本發(fā)明所述的益生菌制劑針對(duì)癌癥易感人群和癌癥患者，對(duì)于易感人群具有防癌的效果，對(duì)于癌癥患者，可以配合現(xiàn)有的醫(yī)療手段，進(jìn)行癌癥的食療；2.除益生菌外，本發(fā)明還添加了益生元、膳食纖維、無水葡萄糖、維生素等物質(zhì)作為補(bǔ)充，可有效改善益生菌定植環(huán)境，增強(qiáng)益生菌抗癌效果；3.本發(fā)明最終制備的益生菌制劑混合物將以腸溶膠囊為載體，克服了益生菌食用后經(jīng)胃酸、膽汁等極端環(huán)境后到達(dá)腸道定植的低活菌率，從而利于益生菌發(fā)揮腸道保健作用。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體的實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。實(shí)施例1一種防癌抗癌益生菌制劑，該益生菌制劑包含益生菌、益生元、膳食纖維、無水葡萄糖、維生素，該益生菌制劑各組分的含量分別如下：嗜酸乳桿菌、乳雙歧桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌、青春雙歧桿菌(重量比1:1:1:1)750g；低聚果糖、低聚半乳糖(重量比1:1)1350g；低聚木糖、蘋果果膠(重量比1:1)9500g；無水葡萄糖1050g；維生素A、維生素B1、維生素C、維生素E(重量比1:1:1:1)350g；通過以下方法制備而成：1)按配方量將嗜酸乳桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌、乳雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、蘋果果膠、無水葡萄糖維生素A、維生素B1、維生素C、維生素E依次置于無菌混合機(jī)內(nèi)，混合均勻；2)使用全自動(dòng)膠囊充填機(jī)充填步驟1)完成后的混合物，填充好的腸溶膠囊使用膠囊拋光機(jī)清除吸附在膠囊外壁上的細(xì)粉，使膠囊光潔，無菌下包裝。將上述制備的防癌抗癌益生菌制劑進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)和測(cè)試。1、益生菌計(jì)數(shù)將裝好的5g的益生菌膠囊用5ml的無菌水溶解，取出100μL，用無菌水稀釋10-8，取出3份稀釋后的100μL益生菌溶液，分別加入3個(gè)瓊脂糖培養(yǎng)皿中，進(jìn)行益生菌的計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)方法參照GB4789.2-2010，各益生菌活菌平均數(shù)如表1所示。表1益生菌活菌數(shù)活菌名稱稀釋度平均數(shù)檢測(cè)結(jié)果(CFU)青春雙歧桿菌10-8181.8×109乳雙歧桿菌10-8202×109長(zhǎng)雙歧桿菌10-81151.15×1010嗜酸乳桿菌10-8535.3×109注：菌落形成單位(CFU，Colony-FormingUnits)指單位體積中的活菌個(gè)數(shù)；稀釋度:益生菌用無菌水稀釋的倍數(shù)；平均數(shù):3個(gè)瓊脂培養(yǎng)皿中，每種益生菌的平均克隆數(shù)。2、殺瘤實(shí)驗(yàn)1)實(shí)驗(yàn)將HepG2細(xì)胞、收集，計(jì)數(shù)；2)用對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞數(shù)量為4000cell/200ul，鋪于96孔板中，共鋪3個(gè)孔；將5g的益生菌溶解于5ml無菌水中，取5μL、10μL、20μL無菌水溶解的益生菌，分別加入三孔中，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2小時(shí)；2)向每孔中加入20μLMTT溶液，放于37℃孵育；3)觀察是否有甲瓚生成，向每孔中加入100μL三聯(lián)液，于37℃孵育過夜；4)第二天早上于酶標(biāo)儀OD595檢測(cè)其吸光度，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。注：MTT全稱3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide，商品名:噻唑藍(lán)，是一種黃顏色的染料?；罴?xì)胞線粒體中琥珀酸脫氫酶能夠代謝還原MTT，同時(shí)在細(xì)胞色素C的作用下，生成藍(lán)色(或藍(lán)紫色)不溶于水的甲臜(Formazan)，甲臜的多少可以用酶標(biāo)儀在570nm處進(jìn)行測(cè)定。在通常情況下，甲臜生成量與活細(xì)胞數(shù)成正比，因此可根據(jù)光密度OD值推測(cè)出活細(xì)胞的數(shù)目。由于死細(xì)胞中不含琥珀酸脫氫酶，因此加入MTT不會(huì)有反應(yīng)。如圖1所示為不同濃度的益生菌對(duì)HepG2細(xì)胞的抑制率，從圖中可以看到隨著益生菌加入量的增加對(duì)HepG2細(xì)胞的抑制率越高。3、裸鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1)培養(yǎng)HepG2細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，用生理鹽水調(diào)整細(xì)胞濃度為5*107cells/ml；2)用6號(hào)針頭的注射器取適量細(xì)胞懸液注射于裸鼠的皮下，每個(gè)接種部位注射0.2ml；3)4周后觀察到裸鼠成瘤，并記錄裸鼠的重量，成瘤大?。?)將裸鼠分成4組，第一組是空白對(duì)照組，喂食裸鼠純水；第二組為低劑量組，喂食裸鼠益生菌劑量為25mg/kg；第三組為中劑量組，喂食裸鼠益生菌劑量為50mg/kg；第四組為高劑量組，喂食裸鼠益生菌劑量為100mg/kg；5)連續(xù)喂食7天后，檢查裸鼠腫瘤情況。表2荷瘤裸鼠攝入益生菌結(jié)果評(píng)估表上表表明，服用益生菌的荷瘤裸鼠，腫瘤得到明顯控制。4、肝癌患者實(shí)驗(yàn)招募10名肝癌的患者，連續(xù)30天服用益生菌，服用劑量為10g/Day。抽取患者的外周血，用ELISA方法檢測(cè)使用前后病人的CEA值(腫瘤指標(biāo))。表310例服用益生菌病人外周血CEA值從表中可以看出，服用防癌抗癌益生菌制劑后，病人的CEA值均降低，說明該防癌抗癌益生菌制可以減輕癌癥患者的病癥。實(shí)施例2一種防癌抗癌益生菌制劑，該益生菌制劑包含益生菌、益生元、膳食纖維、無水葡萄糖、維生素，該益生菌制劑各組分的含量分別如下：嬰兒雙歧桿菌、鼠李糖乳桿菌、唾液乳桿菌(重量比2:1:1)1050g；低聚半乳糖1500g；低聚木糖、柚皮果膠(重量比3:1)10500g；無水葡萄糖1500g；維生素B12、維生素D2、維生素D3、維生素E、維生素C(重量比1:2:1:3)450g。通過以下方法制備而成：1)按配方量將嬰兒雙歧桿菌、鼠李糖乳桿菌、唾液乳桿菌、低聚半乳糖、低聚木糖、柚皮果膠、無水葡萄糖1500g、維生素B12、維生素D2、維生素D3、維生素E、維生素C依次置于無菌混合機(jī)內(nèi)，混合均勻；2)使用全自動(dòng)膠囊充填機(jī)充填步驟1)完成后的混合物，填充好的腸溶膠囊使用膠囊拋光機(jī)清除吸附在膠囊外壁上的細(xì)粉，使膠囊光潔，無菌下包裝。實(shí)施例3一種防癌抗癌益生菌制劑，該益生菌制劑包含益生菌、益生元、膳食纖維、無水葡萄糖、維生素，該益生菌制劑各組分的含量分別如下：植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、干酪乳桿菌、瑞士乳桿菌、短乳酸桿菌(重量比1:1:1:2:2)750g；低聚果糖、低聚半乳糖(重量比1:2)2250g；低聚木糖、蘋果果膠、藍(lán)莓果膠(重量比2:1：1)11250g；無水葡萄糖600g；維生素A、維生素D2、維生素D3、維生素E、維生素C(重量比1:2:1:1)150g。通過以下方法制備而成：按配方量將植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、干酪乳桿菌、瑞士乳桿菌、短乳酸桿菌、低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、蘋果果膠、藍(lán)莓果膠、無水葡萄糖、維生素A、維生素D2、維生素D3、維生素E、維生素C依次置于無菌混合機(jī)內(nèi)，混合均勻；2)使用全自動(dòng)膠囊充填機(jī)充填步驟1)完成后的混合物，填充好的腸溶膠囊使用膠囊拋光機(jī)清除吸附在膠囊外壁上的細(xì)粉，使膠囊光潔，無菌下包裝。上述實(shí)施方式僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，不能以此來限定本發(fā)明保護(hù)的范圍，本領(lǐng)域的技術(shù)人員在發(fā)明的基礎(chǔ)上所做的任何非實(shí)質(zhì)性的變化及替換均屬于本發(fā)明所要求保護(hù)的范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3