本發(fā)明涉及眼科醫(yī)療器械用品，尤其涉及一種活性人工角膜及其制備方法。

背景技術(shù)：

角膜疾病是目前全球主要致盲性眼病，占眼科致盲性眼病的第二位。我國有角膜病患者3237萬人，已經(jīng)致盲患者已達(dá)400多萬人，且隨著創(chuàng)傷、化學(xué)傷、感染等患者增多，致盲群體每年以10多萬增加。治療角膜疾病的最佳方法是角膜移植，在這些患者當(dāng)中，絕大多數(shù)人可以通過角膜移植重見光明。但由于供體角膜材料來源的嚴(yán)重緊缺，每年能夠進(jìn)行角膜移植的患者僅為5000人左右，只占到實(shí)際需要手術(shù)病例的2％，遠(yuǎn)遠(yuǎn)無法滿足病患需要。

角膜疾病不僅使患者喪失勞動能力，降低生活質(zhì)量，造成身體與精神上的損害，也對家庭造成嚴(yán)重的損失和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，對社會也造成極大不利影響。因此，角膜替代物---人工角膜成為治療此類疾病有效、可行的手術(shù)途徑，尋求理想的人工角膜一直是眾多患者的夢想，也是科技工作者的努力方向。

人工角膜是用異質(zhì)成形材料制成的一種特殊屈光裝置，通過手術(shù)植入患眼，取代混濁病變的角膜組織，從而達(dá)到保持眼球完整、去除感染病灶、恢復(fù)角膜透明、獲得視覺功能等目的。

目前臨床上獲得應(yīng)用的人工角膜都是國外產(chǎn)品，具體包括boston人工角膜、pintcueei人工角膜、osteo-odonto人工角膜、alphacor人工角膜，以及strampelli人工角膜等。尚未有獲得廣泛臨床應(yīng)用的我國自主的人工角膜產(chǎn)品。這些國外產(chǎn)品的特點(diǎn)如下：(1)boston人工角膜(dohlman型)需要安裝在一新鮮的供體角膜植片上，即還是需要供體的角膜才能完成治療；患者在術(shù)后需配戴軟性角膜接觸鏡片，以防眼部淚液蒸發(fā)以及減少人工角膜的凹陷，從而減少供體角膜支架壞死和融解的可能性；人工角膜纖維滲出膜形成、青光眼、持續(xù)性上皮缺損、無菌性玻璃體炎、眼內(nèi)炎及視網(wǎng)膜脫離是boston人工角膜術(shù)后最常見的并發(fā)癥，其中，人工角膜纖維滲出膜形成的發(fā)病率更高達(dá)24～65％。而且，部分患者術(shù)后還會發(fā)生結(jié)膜瓣漏水、角膜前基質(zhì)變薄溶解等并發(fā)癥，甚至導(dǎo)致人工角膜排出。(2)俄羅斯產(chǎn)micof人工角膜應(yīng)用于眼部化學(xué)傷有一定療效，但存在手術(shù)方法較復(fù)雜、并發(fā)癥較多等問題；(3)以chirilapros人工角膜為基礎(chǔ)進(jìn)行自主研發(fā)改良型聚羥乙基丙烯酸甲酯-聚甲基丙烯酸甲酯一體化人工角膜，目前尚處在動物試驗(yàn)階段。

從目前應(yīng)用的結(jié)果來看，無論是boston、osteo或alphacor人工角膜，其人工材料與機(jī)體的生物相容性、手術(shù)過程的復(fù)雜性、術(shù)后的長期療效、術(shù)后各種并發(fā)癥的防治、術(shù)后最佳視功能的維持等都尚待提高，這些問題是角膜盲患者復(fù)明的最大障礙，亦是患者術(shù)后視力的最大威脅，也極大地限制了人工角膜的進(jìn)一步發(fā)展及廣泛應(yīng)用。隨著社會經(jīng)濟(jì)的迅速發(fā)展，人們對健康的關(guān)注度也越來越高，醫(yī)療器械的發(fā)展必須與現(xiàn)代科技相結(jié)合，跟上時代發(fā)展的步伐，才能滿足人們?nèi)找嬖鲩L的對治療效果的需求。

目前，在人工角膜方面，中國知識產(chǎn)權(quán)局授權(quán)了發(fā)明專利18項(xiàng)，公開發(fā)明專利22項(xiàng)，例如：cn1141067c公開了一種用溶脹聚合粒子濾出法制備人工角膜的方法，通過標(biāo)準(zhǔn)篩篩取成孔劑，將生物相容性聚合物用四氫呋喃溶解制成飽和溶液，再與成孔劑攪拌混合后灌注于環(huán)形模具中制得的中空圓柱半成品，再將引發(fā)劑、交聯(lián)劑、生物相容性聚合物單體的混合液倒入半成品中進(jìn)行反應(yīng)，然后把已成型的人工角膜毛坯切割、打磨與離子水浸泡，得到人工角膜。

cn1128096c公開了一種生物誘導(dǎo)型活性人工角膜的制備方法，具體包括將殼聚糖溶于酸溶液，將膠原和透明質(zhì)酸溶于水；將殼聚糖酸溶液與膠原和透明質(zhì)酸的水溶液在室溫下攪拌；得到的混合液中加入碳二亞胺交聯(lián)劑、成纖維細(xì)胞生長因子，表皮細(xì)胞生長因子和細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長因子，再充分混合半小時；將得到的混合液注入預(yù)制的角膜模具中，注滿角膜模具后將其放入烘箱內(nèi)烘干后取出得角膜制品；用清水浸泡清洗烘干后所得的角膜制品以去除殘留雜質(zhì)，并使其在水中放置，制得了生物誘導(dǎo)型活性人工角膜。

cn100340309c公開了一種生物誘導(dǎo)型活性人工角膜，組分包括殼聚糖0.5％～3％、膠原0.5％～3％、透明質(zhì)酸0.1％～0.5％、水93.5％～98.8％，為助于刺激自體生長因子富集速度，在材料上整合角膜生長因子。

cn102920532b公開了一種人工角膜，包括支架和鏡柱，支架沿一球面延展，中心處設(shè)有孔狀的由醫(yī)用甲基丙烯酸甲酯制成的支架座，內(nèi)壁設(shè)置有內(nèi)螺紋；鏡柱的徑向截面為圓形；包括依次連接且共軸設(shè)置的導(dǎo)入段、螺紋段和外露段；螺紋段的周面帶有與所述內(nèi)螺紋配合的外螺紋，支架與所述鏡柱配合時，凸面的凸出方向與所述支架的凸出方向一致。

cn104368046b公開了一種纖維增強(qiáng)型載藥水凝膠人工角膜裙邊支架及其制備方法，裙邊支架由親水性水凝膠、纖維和可生物降解載藥微球組成，纖維的含量為6～10％、可生物降解載藥微球的含量為8～15％、親水性水凝膠的含量為75～86％，纖維無序地分布在親水性水凝膠中。

cn1314461c公開了一種生物活性人工角膜，包括光學(xué)中心和周邊支架，周邊支架是由生物活性鈣鹽、高分子聚乙烯醇、溶劑制備，先將聚乙烯醇溶于溶劑，加入生物活性鈣鹽混合均勻得混合溶液后加入致孔劑得混合物，將混合物置于模具成型為中空圓柱體周邊支架，在周邊支架內(nèi)腔中成形光學(xué)中心后將其在去離子水中除去殘留的溶劑、致孔劑和其它雜質(zhì)。

cn100484497c公開了一種具有生物活性的人工角膜的制備方法，以動物角膜基質(zhì)為材料，采用酶消化、反復(fù)凍融、洗滌、co-60輻照、復(fù)合促進(jìn)角膜細(xì)胞生長或/和阻止局部病變發(fā)展的功能組分的步驟制備獲得人工角膜。

cn101380486b提供了一種活性再生人工角膜移植物及其制備方法，組成成分包括殼聚糖、膠原、硫酸軟骨素、聚乙二醇、聚乙烯醇和、三蒸水，還包括適量角膜細(xì)胞生長因子、纖維連接蛋白和層粘連蛋白。將殼聚糖、膠原和硫酸軟骨分別溶于鹽酸、醋酸和水，然后按比例將各組分在室溫下攪拌混勻后注入模具中烘干，再用水浸泡清洗烘干后獲得人工角膜制品。

cn101843923b公開了一種利用新鮮羊膜制備組織工程人工角膜內(nèi)皮載體支架的方法，先采用硫酸妥布霉素液對新鮮羊膜進(jìn)行浸泡消毒，經(jīng)胰蛋白酶-edta消化液倒置消化后，用細(xì)胞刮刀輕刮羊膜上皮面以全部去除殘留上皮細(xì)胞，獲得去上皮層羊膜，平鋪在培養(yǎng)板孔中牢固干貼后，用去上皮層羊膜專用包被液進(jìn)行包被處理，吸出包被液晾干后即可作為組織工程人工角膜內(nèi)皮的載體支架使用。

cn102580147b公開了一種具有抗菌活性的人工角膜，包括多孔周邊支架部與光學(xué)中心部，支架部包括具有抗菌性的殼聚糖衍生物、聚乙烯醇、納米磷酸鹽，光學(xué)中心部包括聚乙烯醇水凝膠、聚甲基丙烯酸羥乙酯水凝膠。

cn102755204b公開了一種新型組裝式人工角膜，包括中央光學(xué)部分和固定支架部分，光學(xué)部分包括球蓋體和柱形透明體，球蓋體的上表面為球面，下表面與透明體的上表面連接，支架部分的中部設(shè)有通孔，通孔側(cè)壁上設(shè)有固定環(huán)；透明體通過通孔貫穿固定支架部分。

cn103830021b公開了一種人工角膜及其制備方法，包括球冠狀的角膜體光學(xué)功能區(qū)和球帶狀的支撐區(qū)，光學(xué)功能區(qū)與支撐區(qū)相互結(jié)合，其接合部為相互交織融合的一體式過渡結(jié)構(gòu)；其中，角膜體光學(xué)功能區(qū)由具有良好生物相容性和透光性的聚羥乙基丙烯酸甲酯水凝膠制成，支撐區(qū)由經(jīng)絲素纖維均勻增強(qiáng)的phema多孔支架制成，兩者之間自然一體化連接。

cn104436302b公開了一種納米超薄生物膜差異修飾前后表面的人工角膜及制作方法，光學(xué)部的前表面依次反復(fù)沉積有聚陽離子層及表皮生長因子層；光學(xué)部的后表面由內(nèi)而外依次反復(fù)沉積有聚陽離子層以及ha層，最外層為ha層，其制備方法包括使人工角膜表面荷以負(fù)電荷；使聚陽離子和表皮生長因子交替吸附在人工角膜前表面；使聚陽離子和ha交替吸附在人工角膜后表面，最后再干燥、密封包裝。

cn106139249a公開了一種多元聚合物人工角膜的制備方法，包括經(jīng)過合成多元共聚材料、制備角膜三維支架、使用3d生物打印機(jī)打印角膜形狀的三維立體支架、利用ecm對三維支架進(jìn)行功能修飾、殘余角膜微組織化方法的構(gòu)建等步驟，制備了人工角膜。

cn105688282a公開了一種在體誘導(dǎo)細(xì)胞化并快速透明的新型生物人工角膜，采用的制備方法包括通過角膜原材料獲取、角膜支架制備、角膜支架深度修飾、角膜深度滅活去熱原、角膜輻照滅菌、角膜內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)和種植等步驟構(gòu)建了不同厚度深、淺板層生物人工角膜和全層生物人工角膜。

因?yàn)?，從本質(zhì)上來看，要獲得能夠臨床應(yīng)用且穩(wěn)定的人工角膜，需要解決兩大難題：

(1)人工角膜周邊與人眼的優(yōu)異生物相容性：

許多人工制作的角膜材料，由于采用高分子材料、金屬或無機(jī)材料，導(dǎo)致生物相容性不足，產(chǎn)生免疫反應(yīng)等，引起炎癥，發(fā)生角膜溶解、人工角膜脫出，其根本原因是人工材料不能與宿主角膜產(chǎn)生理想的生物愈合。

(2)保持人工角膜中心(貼合瞳孔)部位的光學(xué)透明性與生物學(xué)惰性：一些材料克服了生物相容性的不足，且與人眼能夠緊密貼合，但是，由于細(xì)胞長入、新生血管長入，或眼睛中其他物質(zhì)的粘附與沉積，造成前后膜的形成，使角膜材料在一段時間后，中心部位會逐漸失去光學(xué)透明，無法維持最佳視功能，致使人工角膜材料失效。

但是，從目前已有的專利及產(chǎn)品來說，普遍存在如下不足：

(1)現(xiàn)有專利較少考慮到人工角膜周邊的生物相容性等問題，采用能夠促進(jìn)周邊角膜細(xì)胞生長的活性成分較少，同時也未考慮到采用梯度的水凝膠作為角膜周邊材料的重要性；

(2)多數(shù)人工角膜采用一體化設(shè)計，中央光學(xué)部位也復(fù)合了水凝膠成分，這樣就很容易造成一些細(xì)胞與新生血管長入，或眼睛中其他物質(zhì)的粘附與沉積，造成前后膜的形成，逐漸失去透明性；

(3)現(xiàn)有的人工角膜專利中，所設(shè)計的角膜的中央部位都沒有采用生物惰性化處理。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，本發(fā)明的首要目的在于提供一種活性人工角膜。本發(fā)明提供了一種具有中央部分光學(xué)透明，周邊生物活性的新型人工角膜，通過梯度紫外光輻照聚合技術(shù)制備中央光學(xué)透明，周邊具有梯度水凝膠特性的人工角膜基材，再采用納米涂層技術(shù)，在人工角膜基材中央部位(內(nèi)外面)進(jìn)行聚偏二氟乙烯、四氟甲烷、七氟丙烷的涂層與等離子體處理，形成惰性表面，進(jìn)一步對基材周邊進(jìn)行膠原接枝、小分子多肽和bfgf誘導(dǎo)活化，使基材生物活性化與組織工程化，最后獲得中央光學(xué)性質(zhì)優(yōu)異、周邊生物相容性好、結(jié)構(gòu)簡單、手術(shù)方便并且能夠長期穩(wěn)定存在而不脫出的活性人工角膜。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種上述活性人工角膜的制備方法。

本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種活性人工角膜，該人工角膜為含梯度組分的一體式合成高分子聚合物水凝膠結(jié)構(gòu)，包括生物惰性的中央光學(xué)部分與生物活性的周邊部分。

所述的高分子聚合物為丙烯酸衍生物的聚合物，具體包括甲基丙烯酸甲酯的聚合物，甲基丙烯酸羥乙酯-丙烯酸的共聚物。

所述的梯度成分是指組成整個人工角膜的高聚物在不同部位的含量呈梯度分布，具體為中央光學(xué)部位，即貼近瞳孔位置的人工角膜，其成分為純pmma(甲基丙烯酸甲酯的聚合物，即：聚甲基丙烯酸甲酯)，直徑為5毫米；離開中央部位，其pmma含量逐漸降低，p(hema-aas)(甲基丙烯酸羥乙酯-丙烯酸的共聚物)的含量逐漸增加，到周邊時，pmma含量為0，全部為p(hema-aas)，梯度的變化為半徑每增大0.5毫米，pmma含量下降15％，p(hema-aas)的含量增加15％。

所述的生物惰性的中央光學(xué)部分的成分為聚合物pmma，上面再涂覆透明含氟化合物，得到既可保持光學(xué)透明性，也具備生物惰性的光學(xué)部分。

所述的涂覆透明含氟化合物，首先，在聚合物pmma上涂覆50～200納米的聚偏二氟乙烯涂層，形成納米氟塑料涂層，然后采用等離子技術(shù)，在該涂層上進(jìn)一步涂覆30～80納米的四氟甲烷、七氟丙烷涂層，通過雙層涂覆產(chǎn)生生物惰性層。

所述的生物活性的周邊部分，其主體由p(hema-aas)水凝膠組成，其中含有貫穿的孔洞結(jié)構(gòu)，其部分通過接枝與分子復(fù)合，負(fù)載有生物活性成分。

所述的孔洞結(jié)構(gòu)是通過準(zhǔn)分子激光加工技術(shù)加工獲得，該孔洞孔徑為160～200納米，孔分布在靠外徑部位密度大，靠中央部分孔洞少。

所述的通過接枝與分子復(fù)合，負(fù)載有生物活性成分：先在水凝膠主體接枝膠原蛋白，然后進(jìn)行小分子多肽的自組裝，再在多肽表面復(fù)合上生長因子。

所述的小分子多肽是v6d2(含纈氨酸及天冬氨酸的小分子肽)與alps(含丙氨酸、亮氨酸、脯氨酸和絲氨酸的小分子肽)兩種肽的復(fù)合物。

所述的生長因子為bfgf和egf等中的至少一種。其中，bfgf是指堿性成纖維細(xì)胞生長因子，egf是指表皮細(xì)胞生長因子。

一種活性人工角膜的制備方法，包括如下步驟：

第一步：擬以丙烯酸衍生物等為原料，通過光引發(fā)劑引發(fā)自由基，采用分層梯度紫外光輻照聚合技術(shù)，制備具有梯度水凝膠特性的人工角膜基材，基材的中央(與人眼瞳孔貼合，直徑為5毫米)部位為純pmma，周邊則隨著半徑擴(kuò)大，pmma組分含量逐漸遞減，p(hema-aas)含量逐漸遞增，p(hema-aas)水凝膠結(jié)構(gòu)可保持角膜濕潤，并且有益角膜細(xì)胞的生長及與人眼角膜的融合。然后，采用準(zhǔn)分子激光加工技術(shù)，逐層進(jìn)行穿孔加工，獲得具有合理孔洞結(jié)構(gòu)，多孔支架具有類似細(xì)胞外基質(zhì)的特性，能夠支持細(xì)胞生長、增殖和分泌細(xì)胞外基質(zhì)，使之與宿主角膜愈合成一體，可以穩(wěn)定支持基材中央(光學(xué)部)達(dá)到長期存留。如圖1所示。

所述的丙烯酸衍生物為丙烯酸(鈉)(aas)、甲基丙烯酸甲酯(mma)、甲基丙烯酸羥乙酯(hema)。

第二步：為降低人工角膜中心部位的生物學(xué)活性，我們采用納米涂層技術(shù)，在人工角膜基材中央部位(內(nèi)外面)，進(jìn)行聚偏二氟乙烯涂層處理，形成納米氟塑料涂層，然后再在涂層上進(jìn)一步進(jìn)行四氟甲烷、七氟丙烷等離子體處理，在基材中心部位形成惰性表面，使光學(xué)部位不吸附細(xì)胞，避免細(xì)胞長入、新生血管長入，或眼睛中其他物質(zhì)的粘附與沉積，避免其它材料常見的前后膜形成，以保證該部位的長期穩(wěn)定的視覺功能。

第三步：避開中心部位，對基材周邊進(jìn)行膠原蛋白接枝，再進(jìn)行小分子多肽(v6d2與alps兩種肽的復(fù)合物)的自組裝，并進(jìn)行bfgf、egf分子復(fù)合粘附，使基材生物活性化及組織工程化，獲得能夠與患者高度相容的人工角膜。

作為優(yōu)選的方案，由本發(fā)明采用的bfgf、egf生長因子、小分子多肽活性成分由暨南大學(xué)基因工程藥物國家工程中心生產(chǎn)，或由廣東南海朗肽制藥有限公司生產(chǎn)。

作為優(yōu)選的方案，由本發(fā)明采用的聚偏二氟乙烯由美國杜邦公司或日本三菱公司生產(chǎn)的聚偏二氟乙烯產(chǎn)品。

作為優(yōu)選的方案，由本發(fā)明采用的四氟甲烷、七氟丙烷由佛山市科的氣體化工有限公司生產(chǎn)。

本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)，具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果：

(1)采用梯度功能材料制備技術(shù)，以梯度分層澆鑄紫外光聚合方法，制備具有梯度mma-hema-aas組份含量的一體式人工角膜基體材料，基材中心(中央)貼近瞳孔部分為pmma，隨著半徑擴(kuò)展，pmma比例逐漸降低，p(hema-aas)比例逐漸增加，到基材周邊，則全部為p(hema-aas)，以此解決人工角膜強(qiáng)度與水凝膠生物相容性的匹配問題，使制作的人工角膜植入體內(nèi)可以長期穩(wěn)定存在。

(2)采用準(zhǔn)分子激光加工技術(shù)，在人工角膜周邊制作具有貫穿型孔洞結(jié)構(gòu)，合理的孔結(jié)構(gòu)與分布為宿主角膜細(xì)胞的生長提供支持，有利于患者眼睛與人工角膜緊密貼合。

(3)采用聚偏氟乙烯透明材料的納米涂層技術(shù)、四氟甲烷與七氟丙烷等離子體對人工角膜的中心部位(內(nèi)外面)進(jìn)行惰性化處理，使制作的人工角膜中心光學(xué)部分保持惰性，細(xì)胞與血管無法長入，蛋白質(zhì)及其他分泌物無法在光學(xué)部分粘附，以維持最佳視功能。

(4)采用“接枝-復(fù)合”技術(shù)方法，將i-型膠原、小分子多肽和堿性成纖維生長因子(bfgf)固定于人工角膜周邊表面，獲得具有生物誘導(dǎo)作用的活性涂層，植入體內(nèi)后能主動調(diào)動機(jī)體有利因素，調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞生物學(xué)行為。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的人工角膜的整體圖；其中，(1)-中央光學(xué)部分，(2)-帶孔洞的周邊水凝膠活性部分。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。

以丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸羥乙酯為原料，加入光引發(fā)劑，通過分層梯度紫外光輻照聚合技術(shù)，制備具有梯度水凝膠特性的人工角膜基材，基材的中央(與人眼瞳孔貼合，直徑為5毫米)部位為純pmma，周邊則隨著半徑擴(kuò)大，每增加0.5毫米，pmma組分含量減少15％，p(hema-aas)含量增加15％，直到外邊部位的pmma組分含量為零，p(hema-aas)含量為100％。然后，在人工角膜基材中央部位(內(nèi)外面)，進(jìn)行聚偏二氟乙烯涂層處理，形成納米氟塑料涂層，然后再在涂層上進(jìn)一步進(jìn)行四氟甲烷、七氟丙烷等離子體處理，在基材中心部位形成惰性表面，最后，采用準(zhǔn)分子激光加工技術(shù)，對周邊進(jìn)行穿孔加工，再進(jìn)行膠原蛋白接枝與小分子多肽(v6d2與alps兩種肽的復(fù)合物)的自組裝，并進(jìn)行bfgf分子復(fù)合，獲得能夠與患者高度生物相容的人工角膜。

選擇3個月的日本大耳白兔10只，通過堿燒傷方式進(jìn)行建模，然后植入本發(fā)明的人工角膜，在一個時期內(nèi)顯微鏡下觀察角膜恢復(fù)情況，設(shè)定觀察指標(biāo)如下：①人工角膜在位率及在位時間；②出現(xiàn)繼發(fā)性青光眼情況；③人工角膜前/后增殖膜出現(xiàn)情況；④眼內(nèi)炎出現(xiàn)情況；⑤角膜溶解情況，動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的人工角膜在位時間及在位率符合要求；繼發(fā)性青光眼發(fā)生率小，發(fā)生比例符合統(tǒng)計要求；通過含氟化合物的處理，本發(fā)明的人工角膜基本不出現(xiàn)增殖膜；在植入1周內(nèi)，會出現(xiàn)輕微的眼內(nèi)炎，然后逐漸消失；沒有出現(xiàn)角膜溶解情況，表明本發(fā)明制備的人工角膜具有較好的適用性。

上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。