本發(fā)明涉及抗病毒藥物制備領(lǐng)域，具體涉及丹參酮i(tanshinone?i)在制備治療艾滋病的藥物中的應(yīng)用，丹參酮i(tanshinone?i)通過干擾程序性核糖體移碼從而抑制病毒的合成，最終發(fā)揮抗病毒的作用。

背景技術(shù)：

1、hiv-1病毒顆粒呈球形，直徑約為100-120納米，這種病毒的粒子核心包含兩條單鏈rna。hiv-1的基因組在兩端各有一個長末端重復(fù)序列(ltr)，在這兩個ltr之間，基因編碼著構(gòu)成病毒結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵蛋白?；蚪M全長為9.7kb，包含9個開放閱讀框，其中3個結(jié)構(gòu)基因(gag,pol,env)編碼結(jié)構(gòu)蛋白和酶，6個調(diào)控蛋白基因(tat,rev,nef,vif,vpu,vpr)編碼調(diào)節(jié)蛋白和附屬蛋白。gag蛋白編碼基質(zhì)蛋白(ma,p17)、衣殼蛋白(ca,p24)及核衣殼蛋白(nc,p15)，在病毒顆粒的組裝和成熟過程中起核心作用。pol蛋白編碼逆轉(zhuǎn)錄酶(rt，包含核糖核酸酶h活性)、蛋白酶(pr)和整合酶(in)，這些酶在病毒復(fù)制過程中至關(guān)重要。env蛋白編碼包膜糖蛋白gp160，gp160可以裂解為囊膜蛋白gp120和穿膜蛋白gp41，參與病毒與宿主細胞的融合。tat和rev蛋白對hiv的基因表達調(diào)控至關(guān)重要，tat蛋白增強病毒基因的轉(zhuǎn)錄活性，rev蛋白促進未拼接或未完全拼接的病毒mrna從胞核向胞漿的運輸。nef、vif、vpr、vpu蛋白參與病毒的復(fù)制、感染性、細胞病變效應(yīng)以及病毒顆粒的組裝和釋放。

2、-1prf是一種調(diào)控蛋白質(zhì)翻譯的機制。某些病毒的特征性mrna序列包含程序性核糖體移碼(prf)信號。當核糖體在蛋白質(zhì)翻譯過程中遇到這些信號時，它傾向于暫停翻譯。這會導(dǎo)致大多數(shù)核糖體繼續(xù)在原始閱讀框架中翻譯，而一小部分會在mrna上滑移，導(dǎo)致移碼并開始在新的閱讀框架中翻譯，使得病毒能夠從單一rna模板翻譯兩種蛋白質(zhì)。在某些情況下，-1prf信號在胚胎發(fā)育期間調(diào)節(jié)兩種不同多肽的表達，而在其他情況下，它們導(dǎo)致截短的蛋白質(zhì)產(chǎn)品，可能與全長蛋白質(zhì)的功能不同。

3、hiv-1病毒巧妙地利用宿主細胞的核糖體程序性移碼機制來合成其自身的蛋白質(zhì)。hiv-1的-1prf機制允許hiv-1從單一的gag編碼mrna中表達gag-pol蛋白，這對于病毒的復(fù)制和感染性至關(guān)重要。-1prf信號促使核糖體移碼，精確控制gag與gag-pol的合成比例，即使是prf效率的微小變化，無論是提高還是降低，都會對病毒產(chǎn)量產(chǎn)生顯著的抑制效果。hiv-1的-1prf機制是通過特定的mrna序列和結(jié)構(gòu)來調(diào)節(jié)的。這一機制涉及到兩個基本的rna元素：滑動序列和下游的莖環(huán)結(jié)構(gòu)。對于hiv-1而言，這個序列是u?uuu?uua。這個序列是核糖體發(fā)生-1prf的具體位置。另一個元素是刺激信號，即位于滑動序列下游特定距離的mrna二級結(jié)構(gòu)。在hiv-1中，這個刺激信號包含在一個69個堿基的片段中，它形成了一個擴展的莖環(huán)結(jié)構(gòu)，有助于調(diào)節(jié)-1prf事件的可能性。這個結(jié)構(gòu)與大多數(shù)其他病毒的-1prf信號不同，后者通常形成偽結(jié)。

4、當核糖體在翻譯hiv-1gag-pol?mrna時遇到這個信號，它會在這個序列處暫停。這個特殊的rna結(jié)構(gòu)使得核糖體能夠識別該區(qū)域，并在大約5％的情況下誘導(dǎo)核糖體向后移位一個核苷酸。這種移位使得核糖體跳過了gag蛋白的終止密碼子，使得原本的orf序列轉(zhuǎn)變?yōu)閜ol蛋白的編碼序列，從而允許gag-pol融合蛋白的翻譯。移碼后，核糖體在新的閱讀框架中繼續(xù)翻譯，產(chǎn)生hiv-1的p160gag-pol多聚蛋白。如果沒有發(fā)生-1prf，核糖體將維持原有的閱讀框架，并遇到gag基因的終止密碼子，結(jié)果只產(chǎn)生p55gag多聚蛋白。然而，大多數(shù)核糖體在遇到gag開放閱讀框末端的終止密碼子時會停止翻譯，僅產(chǎn)生gag蛋白。通過這種方式，hiv-1病毒能夠確保有足夠的gag蛋白來構(gòu)建病毒結(jié)構(gòu)，同時限制pol蛋白的數(shù)量，以維持病毒復(fù)制和組裝的精細平衡。在hiv-1中，-1prf的效率大約為5％，這對于病毒粒子的形成和病毒的感染性至關(guān)重要。任何影響這一機制的因素，無論是病毒自身的mrna結(jié)構(gòu)還是宿主因子，都可能對病毒的復(fù)制能力和感染性產(chǎn)生顯著影響。

5、hiv-1的-1prf機制是病毒復(fù)制和進化的關(guān)鍵因素。它不僅影響病毒的傳播效率和潛伏狀態(tài)，還對病毒的遺傳多樣性和適應(yīng)性起著重要作用。深入研究-1prf機制有助于開發(fā)新的抗病毒治療策略，為hiv-1感染的治療和預(yù)防提供新的途徑。探索可以影響-1prf效率的藥物以及其作用機制是當前和未來的研究重點，有可能為有些病毒的藥物設(shè)計和治療方案提供新的見解。了解程序性核糖體移碼過程以及相關(guān)機制研究對于開發(fā)抗病毒藥物和臨床治療具有十分重要的意義。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種丹參酮i(tanshinone?i)的新用途，即在制備治療艾滋病的藥物中的應(yīng)用。

2、為達到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

3、本發(fā)明的第一方面發(fā)現(xiàn)一種可以顯著降低程序性核糖體移碼的藥物丹參酮i(tanshinone?i)，其結(jié)構(gòu)通式如式i所示：

4、

5、本發(fā)明根據(jù)模式細胞構(gòu)建得到通過計算firefly?luciferase/renillaluciferase的值就可以表征程序性核糖體移碼效率的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，通過大批量藥物篩選以及濃度梯度加藥試驗，以及化合物作用機制檢索再結(jié)合實驗驗證，如下：

6、本發(fā)明將丹參酮i(tanshinone?i)按濃度梯度處理穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株r-(-1prf)-f-293t，檢測firefly?luciferase與renilla?luciferase的值。如實施例1、圖2所示，經(jīng)丹參酮i(tanshinone?i)處理后renilla?luciferase的酶含量沒有發(fā)生顯著的變化，而fireflyluciferase的酶含量顯著降低，其兩者比值明顯降低，表明這類化合物顯著降低hiv-1的-1prf效率，可接近一半。

7、本發(fā)明將丹參酮i(tanshinone?i)按濃度梯度處理穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株r-(-1prf)-f-hela、r-(-1prf)-f-thp1，檢測firefly?luciferase與renilla?luciferase的值。如實施例2、實施例3、圖3、圖4所示，丹參酮i(tanshinone?i)處理后firefly?luciferase的酶含量顯著降低，-1prf的效率顯著降低，表明這類化合物對不同類型細胞的移碼效率都有抑制作用。

8、本發(fā)明將pnl43-de質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入293t，用丹參酮i(tanshinone?i)處理后，通過western?blot技術(shù)檢測細胞內(nèi)gag-pol蛋白的表達水平。如實施例4、圖5所示，隨著丹參酮i(tanshinone?i)作用濃度的增加，gag蛋白表達量沒有顯著變化，gag-pol融合蛋白的含量明顯減少，表明這類化合物通過改變gag-pol與gag蛋白的比率，使程序性核糖體移碼效率顯著降低，能夠在真正的hiv-1病毒中對程序性核糖體移碼的效率產(chǎn)生影響。

9、本發(fā)明將pnl-43-de突變型質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細胞后，丹參酮i(tanshinone?i)處理細胞，檢測病毒粒子產(chǎn)生的情況。如實施例5、圖6所示，丹參酮i(tanshinone?i)處理之后上清中p24蛋白顯著下降，表明這類化合物具有顯著的抗病毒效果。

10、本發(fā)明將pnl-43-de突變型質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細胞后，丹參酮i(tanshinone?i)處理細胞，通過real-time?pcr檢測了培養(yǎng)基中上清病毒含量的變化。如實施例6、圖7所示，丹參酮i(tanshinone?i)處理之后上清上清中病毒含量逐漸降低，可降低百分之50，表明這類化合物使細胞內(nèi)病毒包裝減少，導(dǎo)致病毒產(chǎn)生量降低。

11、綜上所述，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，這種化合物可以顯著抑制程序性核糖體移碼的效率，進而降低了gag-pol融合蛋白的含量，從而打亂了gag-pol蛋白的生成比例，導(dǎo)致病毒無法有效組裝，使病毒產(chǎn)生量降低，最終達到抗病毒的效果。

12、本發(fā)明的第二方面提供丹參酮i化合物在制備用于治療艾滋病的藥物中的應(yīng)用。

13、本發(fā)明的第三方面提供丹參酮i化合物在制備用于抗病毒的藥物和/或病毒顆粒組裝抑制劑和/或病毒程序化-1核糖體移碼抑制劑中的應(yīng)用，所述病毒為hiv-1。

14、本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：

15、(1)本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了丹參酮i(tanshinone?i)能夠顯著降低程序性核糖體移碼效率，打亂了gag-pol蛋白的產(chǎn)生比例導(dǎo)致病毒無法有效組裝而促使病毒在細胞內(nèi)生成的效率下降，具有良好的抗hiv-1病毒的效果。

16、(2)本發(fā)明利用丹參酮i化合物制備得到治療艾滋病的藥物。