本發(fā)明涉及中草藥，尤其是涉及白頭翁根莖外泌體樣囊泡及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、根據(jù)國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)最新數(shù)據(jù)報(bào)告，肺癌已成為癌癥相關(guān)死亡的頭號(hào)殺手。化療耐藥是導(dǎo)致肺癌患者預(yù)后不佳甚至死亡的重要原因。肺癌組織的代謝變化引發(fā)了有氧糖酵解現(xiàn)象，而有氧糖酵解是導(dǎo)致腫瘤化療耐藥和惡性進(jìn)展的關(guān)鍵。因此，重編碼腫瘤代謝對(duì)于改善肺癌化療耐藥生態(tài)位從而阻遏肺癌惡性進(jìn)展具有重要臨床意義。

2、白頭翁為毛莨科植物，又稱為野丈人、奈何草、白頭公等，用藥部分主要為根部，性味苦寒，歸胃、大腸經(jīng)。白頭翁有效成分為三萜皂苷、三萜酸、鼠李糖、白頭翁素、2,3-羥基白樺酸、胡蘿卜苷等多種化學(xué)成分。從現(xiàn)代藥理角度分析，白頭翁具有清熱解毒、涼血止痢、治陰癢、擅清陽(yáng)明之濕熱的功效，具有抑菌、抗炎、殺蟲、抗腫瘤、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等生物活性，在臨床中應(yīng)用較為廣泛。中藥有效成分在實(shí)際應(yīng)用中常存在活性容易喪失的問題，并且傳統(tǒng)藥物可能會(huì)造成機(jī)體損傷，存在安全性問題?，F(xiàn)有技術(shù)中缺少治療效果強(qiáng)、可靶向并抑制腫瘤的有效中草藥，從白頭翁中提取外泌體并用于抗腫瘤治療的相關(guān)研究，未見報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供白頭翁根莖外泌體樣囊泡及其制備方法與應(yīng)用。

2、本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：

3、本發(fā)明的技術(shù)方案，提供白頭翁根莖外泌體樣囊泡在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

4、進(jìn)一步地，提供所述白頭翁根莖外泌體樣囊泡的制備方法，包括如下步驟：

5、s1、將白頭翁根莖榨汁，過(guò)濾后收集濾液；

6、s2、將s1步驟得到的濾液離心，收集沉淀，重懸后過(guò)濾得到包含有白頭翁根莖外泌體樣囊泡的溶液。

7、進(jìn)一步地，于s1步驟，所述白頭翁根莖在榨汁破碎之前，需要使用無(wú)菌水清洗，并與預(yù)冷后的pbs緩沖液混合。優(yōu)選地，所述pbs溶液于4℃預(yù)冷。

8、進(jìn)一步地，于s1步驟，白頭翁根莖與pbs溶液的添加比例為(1～1.2)g：(1～1.2)ml；在一些具體實(shí)施方式中，白頭翁根莖與pbs溶液的比例優(yōu)選為1g：1ml。

9、進(jìn)一步地，于s1步驟，所述過(guò)濾為使用0.45μm濾膜過(guò)濾。

10、進(jìn)一步地，于s2步驟，將濾液于4℃、2000-120000g轉(zhuǎn)速下離心若干次，每次的離心時(shí)間為15-135min。

11、進(jìn)一步地，于s2步驟，將濾液于4℃、2000～3000g轉(zhuǎn)速下離心15～20min，收集上清液i；將上清液i于4℃，10000～20000g離心30～45min，收集上清液ii；將上清液ii于4℃，100000～120000g離心90～135min，收集沉淀。

12、在一些具體實(shí)施方式中，于s2步驟，優(yōu)選為：將濾液于4℃、2000g轉(zhuǎn)速下離心15min，收集上清液i；將上清液i于4℃，10000g離心30min，收集上清液ii；將上清液ii于4℃，120000g離心90min，收集沉淀。

13、在一些具體實(shí)施方式中，于s2步驟，將沉淀用pbs溶液重懸后，用0.22μm濾膜過(guò)濾。

14、進(jìn)一步地，提供白頭翁根莖外泌體樣囊泡，基于上述技術(shù)方案所述的制備方法得到。

15、在一些具體實(shí)施方式中，所述外泌體囊泡的粒徑為180-220nm。

16、進(jìn)一步地，所述應(yīng)用中的腫瘤指的是非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；

17、進(jìn)一步地，所述應(yīng)用中bge-exo用生理鹽水分散溶解；

18、進(jìn)一步地，所述bge-exo對(duì)腫瘤細(xì)胞具有靶向作用，可以被細(xì)胞攝取，能夠在腫瘤細(xì)胞組織中富集。

19、進(jìn)一步地，所述應(yīng)用包括：bge-exo作為腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖抑制劑、腫瘤細(xì)胞遷移抑制劑以及腫瘤細(xì)胞凋亡促進(jìn)劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

20、進(jìn)一步地，當(dāng)bge-exo作為生長(zhǎng)增殖抑制劑/腫瘤細(xì)胞遷移抑制劑/腫瘤細(xì)胞凋亡促進(jìn)劑，抑制hcc-1833細(xì)胞/a549細(xì)胞時(shí)，濃度為100～500μg/ml；當(dāng)bge-exo用于裸鼠模型時(shí)，注射的劑量為135mg/kg。

21、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

22、(1)白頭翁根莖外泌體樣囊泡bge-exo提取工藝簡(jiǎn)便，過(guò)程安全環(huán)保無(wú)污染。而且，原材料白頭翁成本低、易大規(guī)模獲取，為后續(xù)研究與應(yīng)用提供了充足且經(jīng)濟(jì)的物質(zhì)支撐。

23、(2)bge-exo治療方案是對(duì)傳統(tǒng)中藥治療的創(chuàng)新性拓展。它具備諸多優(yōu)良特性，如高度的安全性、有效藥物成分的穩(wěn)定性、極低的毒性、良好的可溶性以及精準(zhǔn)的靶向性。這些特性使得bge-exo在相關(guān)治療領(lǐng)域展現(xiàn)出極為可觀的應(yīng)用前景。

24、(3)本申請(qǐng)的初步研究結(jié)果表明，bge-exo能夠在腫瘤組織中高度富集。同時(shí)，它對(duì)肺癌的惡性進(jìn)展具有顯著的抑制作用，具體表現(xiàn)為抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖和遷移能力、阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程以及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。

25、(4)本發(fā)明所制備的白頭翁根莖外泌體樣囊泡能夠很好地融入傳統(tǒng)中藥領(lǐng)域。其具有高度的安全性、有效藥物成分的穩(wěn)定性、低毒性以及良好的可溶性，這些優(yōu)勢(shì)共同賦予了它廣泛的應(yīng)用前景。

技術(shù)特征：

1.白頭翁根莖外泌體樣囊泡在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述白頭翁根莖外泌體樣囊泡的制備方法，包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白頭翁根莖外泌體樣囊泡在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，于s1步驟，所述白頭翁根莖在榨汁破碎之前，使用無(wú)菌水清洗，并與預(yù)冷后的pbs緩沖液混合。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的白頭翁根莖外泌體樣囊泡在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，于s1步驟，白頭翁根莖與pbs溶液的添加比例為(1～1.2)g：(1～1.2)ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白頭翁根莖外泌體樣囊泡在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，于s1步驟，所述過(guò)濾為：使用0.45μm濾膜過(guò)濾。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白頭翁根莖外泌體樣囊泡在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，于s2步驟，將濾液于4℃、2000-120000g轉(zhuǎn)速下離心若干次，每次的離心時(shí)間為15-135min。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的白頭翁根莖外泌體樣囊泡在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，于s2步驟，將濾液于4℃、2000～3000g轉(zhuǎn)速下離心15～20min，收集上清液i；將上清液i于4℃，10000～20000g離心30～45min，收集上清液ii；將上清液ii于4℃，100000～120000g離心90～135min，收集沉淀；

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白頭翁根莖外泌體樣囊泡在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述白頭翁根莖外泌體樣囊泡的粒徑為180-220nm。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白頭翁根莖外泌體樣囊泡在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用中的腫瘤指的是非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白頭翁根莖外泌體樣囊泡在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括：白頭翁根莖外泌體樣囊泡作為腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖抑制劑、腫瘤細(xì)胞遷移抑制劑以及腫瘤細(xì)胞凋亡促進(jìn)劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白頭翁根莖外泌體樣囊泡在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，當(dāng)白頭翁根莖外泌體樣囊泡作為生長(zhǎng)增殖抑制劑/腫瘤細(xì)胞遷移抑制劑/腫瘤細(xì)胞凋亡促進(jìn)劑時(shí)，濃度為100～500μg/ml。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及白頭翁根莖外泌體樣囊泡及其制備方法與應(yīng)用，包括如下制備方法：將白頭翁榨汁，過(guò)濾后收集濾液；將濾液離心，收集沉淀，重懸后過(guò)濾得到包含有白頭翁根莖外泌體樣囊泡的溶液。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提取得到的白頭翁根莖外泌體樣囊泡能夠抑制肺癌惡性進(jìn)展，包括增殖和遷移，同時(shí)細(xì)胞攝取和動(dòng)物活體成像證實(shí)白頭翁根莖外泌體樣囊泡可被細(xì)胞攝取，同時(shí)可在腫瘤組織中富集。

技術(shù)研發(fā)人員：靳明明,劉姣,黃青清,武悅,黃于山,黃鋼
受保護(hù)的技術(shù)使用者：上海健康醫(yī)學(xué)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8