本發(fā)明涉及外顯子跳讀用反義低聚物，其包含與在目標外顯子內(nèi)不同的2個以上的序列互補的核苷酸序列。更具體而言，本發(fā)明涉及能夠跳讀人抗肌萎縮蛋白基因第44號外顯子的反義低聚物及包含該低聚物的醫(yī)藥組合物。
背景技術(shù)：
：假肥大(Duchenne)型肌肉萎縮癥(DMD)是約3,500人新生男孩中1人發(fā)病的頻率最高的遺傳性進行性肌病。雖然在嬰幼兒期顯示出與正常人基本上沒有差別的運動能力，但從4～5歲時起可觀察到肌力降低。然后肌力降低發(fā)展至12歲時變得無法行走，在20多歲時因心力衰竭或呼吸衰竭導致死亡，是嚴重疾病。目前，沒有針對DMD的有效治療方法，迫切需要開發(fā)新型治療藥。已知DMD的原因是抗肌萎縮蛋白基因的變異?？辜∥s蛋白基因是存在于X染色體的、由220萬堿基的DNA形成的巨大基因。由DNA轉(zhuǎn)錄至mRNA前體，再通過剪接去除內(nèi)含子，79個外顯子接合而成的mRNA為13,993個堿基。由該mRNA翻譯成3,685個氨基酸，生成抗肌萎縮蛋白。抗肌萎縮蛋白與肌細胞的膜穩(wěn)定性的保持有關(guān)，為了使肌細胞不容易破壞，抗肌萎縮蛋白是必需的。DMD患者的抗肌萎縮蛋白基因存在變異，因此在肌細胞中基本上無法表達保持功能的抗肌萎縮蛋白。因此，在DMD患者體內(nèi)，無法保持肌細胞的結(jié)構(gòu)，大量的鈣離子流入肌細胞內(nèi)。其結(jié)果是發(fā)生類似炎癥的反應(yīng)，發(fā)生纖維化，從而使肌細胞變得難以再生。BECKER型肌肉萎縮癥(BMD)的原因也是抗肌萎縮蛋白基因的變異，其癥狀雖然表現(xiàn)出肌力降低，但通常比DMD輕，肌力降低的發(fā)展慢，在多數(shù)情況下在成年期發(fā)病?？梢哉J為DMD與BMD的臨床癥狀的不同在于，由于變異，在抗肌萎縮蛋白的mRNA翻譯為抗肌萎縮蛋白時，氨基酸可讀框被破壞或保持(非專利文獻1)。即，對于DMD而言，由于存在氨基酸可讀框錯位的變異，因此基本上不表達保持功能的抗肌萎縮蛋白，但對于BMD而言，由于變異而使外顯子的一部分缺失，但保持了氨基酸可讀框，因此可以產(chǎn)生雖然不完全但是有功能的抗肌萎縮蛋白。期待著外顯子跳讀法作為DMD的治療方法。該方法是通過改變剪接而修復抗肌萎縮蛋白的mRNA的氨基酸可讀框，從而誘導表達部分恢復了功能的抗肌萎縮蛋白的方法(非專利文獻2)。成為外顯子跳讀的對象的氨基酸序列部分被丟失。因此，在該治療中表達的抗肌萎縮蛋白比正常的抗肌萎縮蛋白短，但由于保持了氨基酸可讀框，因此部分保持了使肌細胞穩(wěn)定的功能。由此期待通過外顯子跳讀能使DMD表現(xiàn)出與更輕癥狀的BMD相同的癥狀。外顯子跳讀法經(jīng)過利用小鼠、狗進行的動物實驗，已經(jīng)在進行對人DMD患者的臨床試驗?？梢酝ㄟ^以5’或3’剪接點中任一者或兩者、或者外顯子的內(nèi)部為目標的反義核酸的結(jié)合來誘導外顯子跳讀。外顯子僅在兩個剪接點通過剪接體復合體進行識別的情況下包含在mRNA中。因此，通過利用反義核酸以剪接點為靶向可以誘導外顯子跳讀。另外可以認為，由于外顯子被剪接機構(gòu)所識別，因此需要將絲氨酸和精氨酸豐富的SR蛋白質(zhì)結(jié)合于外顯子剪接增強子(ESE)，以ESE為靶向也能夠誘導外顯子跳讀?？辜∥s蛋白基因的變異根據(jù)DMD患者而有所不同，因此需要與基因變異的部位、種類相對應(yīng)的反義核酸。對于抗肌萎縮蛋白基因的單一外顯子，以一個連續(xù)的序列作為目標來誘導外顯子跳讀的反義核酸已有多個報告(專利文獻1～6及非專利文獻1和2)。另外，將以抗肌萎縮蛋白基因的同一外顯子作為目標的兩種反義核酸進行混合而使其發(fā)揮作用(二重靶向)時，跳讀活性比各反義核酸單獨使用的情況有所增強，對于這種情況也已有報告(專利文獻7)。但是，以同一外顯子內(nèi)的2個以上部位為目標的連接的單鏈反義核酸(連接型)顯示出跳讀活性的情況尚未報告(專利文獻1)。現(xiàn)有技術(shù)文獻專利文獻專利文獻1：國際公開公報第2004/048570號專利文獻2：國際公開公報第2009/139630號專利文獻3：國際公開公報第2010/048586號專利文獻4：美國專利公開公報第2010/0168212號專利文獻5：國際公開公報第2011/057350號專利文獻6：國際公開公報第2006/000057號專利文獻7：國際公開公報第2007/135105號非專利文獻非專利文獻1：AnnemiekeAartsma-Rusetal.,(2002)NeuromuscularDisorders12：S71-S77非專利文獻2：WiltonS.D.,etal.,MolecularTherapy2007：15：p.1288-96技術(shù)實現(xiàn)要素：發(fā)明要解決的課題鑒于上述情況，本發(fā)明的主要目的在于提供一種以抗肌萎縮蛋白基因的同一外顯子內(nèi)2個不同部位的堿基序列為目標來誘導外顯子跳讀的新型連接型反義低聚物及包含該低聚物的肌肉萎縮癥治療藥。解決課題的方法本發(fā)明人等對上述文獻中記載的技術(shù)內(nèi)容和抗肌萎縮蛋白基因的結(jié)構(gòu)等進行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)將以人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44中不同的2個部位作為目標的低聚物進行連接而得到的反義低聚物能夠誘導該外顯子的跳讀。本發(fā)明人等基于該見解而完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明如下所述。[1]一種反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其誘導目標外顯子的跳讀，是由下述(a)和(b)連接而成的15～30堿基長度的反義低聚物：(a)第1單元低聚物，其包含與目標外顯子內(nèi)連續(xù)的7～15堿基的第1核苷酸序列互補的堿基序列，(b)第2單元低聚物，其包含與所述目標外顯子內(nèi)連續(xù)的7～15堿基的第2核苷酸序列互補的堿基序列，其中，所述第1核苷酸序列和第2核苷酸序列不連續(xù)或不相互重復。[2]根據(jù)上述[1]所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其中，所述第1和/或第2單元低聚物包含與跟所述目標外顯子鄰接的內(nèi)含子的部分核苷酸序列互補的堿基序列。[3]根據(jù)上述[1]或[2]所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其中，所述目標外顯子為人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子。[4]根據(jù)上述[1]或[2]所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其中，所述第1核苷酸序列為選自序列號1所示的核苷酸序列的連續(xù)7～15堿基的核苷酸序列。[5]根據(jù)上述[1]～[3]中任一項所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其中，所述第2核苷酸序列為選自序列號2所示的核苷酸序列的連續(xù)7～15堿基的核苷酸序列。[6]根據(jù)上述[1]或[2]所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其中，所述反義低聚物由選自以下(c)～(e)中的2個單元低聚物連接而成：(c)由與選自序列號3所示的核苷酸序列的連續(xù)7～15堿基的核苷酸序列互補的堿基序列構(gòu)成的單元低聚物，(d)由與選自序列號4所示的核苷酸序列的連續(xù)7～15堿基的核苷酸序列互補的堿基序列構(gòu)成的單元低聚物，以及(e)由與選自序列號5所示的核苷酸序列的連續(xù)7～15堿基的核苷酸序列互補的堿基序列構(gòu)成的單元低聚物，或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物。[7]根據(jù)上述[1]或[2]所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其由選自序列號6～9中的任一個堿基序列構(gòu)成。[8]根據(jù)上述[1]～[7]中任一項所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其是寡核苷酸。[9]根據(jù)上述[8]所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其中，構(gòu)成所述寡核苷酸的至少1個核苷酸的糖部分和/或磷酸鍵部分經(jīng)過修飾。[10]根據(jù)上述[8]或[9]所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其中，構(gòu)成所述寡核苷酸的至少1個核苷酸的糖部分是2’位的-OH基被選自O(shè)R、R、R’OR、SH、SR、NH2、NHR、NR2、N3、CN、F、Cl、Br及I中的任一基團取代而得到的核糖。(所述R表示烷基或芳基，所述R’表示亞烷基。)[11]根據(jù)上述[8]～[10]中任一項所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其中，構(gòu)成所述寡核苷酸的至少1個核苷酸的磷酸鍵部分為選自硫代磷酸酯鍵、二硫代磷酸酯鍵、膦酸烷基酯鍵、氨基磷酸酯鍵及硼磷酸酯鍵中的1種。[12]根據(jù)上述[1]～[7]中任一項所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其是嗎啉基低聚物。[13]根據(jù)上述[12]所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其是二氨基磷酸酯嗎啉基低聚物。[14]根據(jù)上述[12]或[13]所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其中，5’末端為下述化學式(1)～(3)中任一基團。[化學式1][15]一種肌肉萎縮癥治療用醫(yī)藥組合物，其以所述[1]～[14]中任一項所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物作為有效成分。[16]根據(jù)上述[15]所述的醫(yī)藥組合物，其還包含醫(yī)藥上能夠允許的載體。[17]一種肌肉萎縮癥的治療方法，該方法包括下述工序：對肌肉萎縮癥患者給藥所述[1]～[12]中任一項所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物、或者所述[1]或[16]所述的所述醫(yī)藥組合物。[18]根據(jù)上述[17]所述的治療方法，其中，所述肌肉萎縮癥患者是在抗肌萎縮蛋白基因中具有成為外顯子44跳讀對象的變異的患者。[19]根據(jù)上述[17]或[18]所述的治療方法，其中，所述患者是人。[20]上述[1]～[14]中任一項所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物在制造肌肉萎縮癥治療用醫(yī)藥組合物中的用途。[21]根據(jù)上述[1]～[14]中任一項所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其用于肌肉萎縮癥治療。[22]根據(jù)上述[21]所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其中，在所述治療中，肌肉萎縮癥患者是在抗肌萎縮蛋白基因中具有成為外顯子44跳讀對象的變異的患者。[23]根據(jù)上述[21]或[22]所述的反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其中，所述患者是人。[24]一種反義低聚物的制造方法，所述反義低聚物是上述[1]所述的反義低聚物，該方法包括：通過將下述(a)和(b)連接來制造15～30堿基長度的反義低聚物的工序，(a)第1單元低聚物，其包含與目標外顯子內(nèi)連續(xù)的7～15堿基的第1核苷酸序列互補的堿基序列，(b)第2單元低聚物，其包含與所述目標外顯子內(nèi)連續(xù)的7～15堿基的第2核苷酸序列互補的堿基序列，其中，所述第1核苷酸序列和第2核苷酸序列不連續(xù)或不相互重復。[25]根據(jù)上述[24]所述的方法，該方法還包括：對所述工序中得到的反義低聚物的跳讀效率進行測定的工序、以及對具有超過基準值的跳讀效率的反義低聚物進行選擇的工序。[26]一種反義低聚物的篩選方法，該方法包括：(a)對下述(i)和(ii)進行選擇的工序；(i)第1單元低聚物，其包含與目標外顯子內(nèi)連續(xù)的7～15堿基的第1核苷酸序列互補的堿基序列，(ii)第2單元低聚物，其包含與所述目標外顯子內(nèi)連續(xù)的7～15堿基的第2核苷酸序列互補的堿基序列，其中，第1核苷酸序列和第2核苷酸序列不連續(xù)或不相互重復，(b)通過連接所述第1和第2單元低聚物來制作15～30堿基長度的反義低聚物的工序；(c)對所述工序(b)中得到的反義低聚物的跳讀效率進行測定的工序；以及(d)對具有超過基準值的跳讀效率的反義低聚物進行選擇的工序。發(fā)明的效果利用本發(fā)明的反義低聚物能夠高效率地誘導人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀。另外，通過給藥本發(fā)明的醫(yī)藥組合物，能夠有效地減輕假肥大型肌肉萎縮癥的癥狀。附圖說明圖1是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率的圖。圖2是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖3是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖4是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖5是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖6是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖7是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖8是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖9是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖10是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖11是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖12是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖13是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖14是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖15是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖16是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖17是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖18是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖19是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖20是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖21是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖22是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖23是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖24是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖25是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖26是示出人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率(按照低聚物濃度)的圖。圖27是對以不同部位作為目標的2種單元低聚物連接而成的低聚物與混合后的低聚物比較人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率的圖。圖28是對以不同部位作為目標的2種單元低聚物連接而成的低聚物與混合后的低聚物比較人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率的圖。圖29是對以不同部位作為目標的2種單元低聚物連接而成的低聚物與混合后的低聚物比較人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率的圖。圖30是對以不同部位作為目標的2種單元低聚物連接而成的低聚物、其混合后的低聚物及其各自單獨的低聚物比較人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率的圖。圖31是對以不同部位作為目標的2種單元低聚物連接而成的低聚物、其混合后的低聚物及其各自單獨的低聚物比較人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率的圖。圖32是示出源自外顯子45缺失的人DMD患者的成纖維細胞中人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀效率的圖。具體實施方式以下，對本發(fā)明詳細地進行說明。以下的實施方式是用于說明本發(fā)明的例子，并不是將本發(fā)明僅限定于該實施方式。本發(fā)明只要不脫離其主旨即可，可以以各種方式實施。需要說明的是，在本說明書中以參考的方式將引用的全部文獻、及公開公報、專利公報等其它專利文獻引用到本說明書中。而且，本說明書包括作為本申請所要求的優(yōu)先權(quán)的基礎(chǔ)的2014年6月17日申請的日本國專利申請(特愿2014-124157號)的說明書及附圖中記載的內(nèi)容。1.反義低聚物本發(fā)明提供一種反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物，其誘導目標外顯子跳讀，是由下述(a)和(b)連接而成的15～30堿基長度的反義低聚物：(a)第1單元低聚物，其包含與目標外顯子內(nèi)連續(xù)的7～15堿基的第1核苷酸序列互補的堿基序列，(b)第2單元低聚物，其包含與所述目標外顯子內(nèi)連續(xù)的7～15堿基的第2核苷酸序列互補的堿基序列，其中，所述第1核苷酸序列和第2核苷酸序列不連續(xù)或不相互重復。以下，有時將“反義低聚物或者其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物”總稱為“反義低聚物”。上述反義低聚物可以通過下述制造方法來制造，所述方法包括制造由下述(a)和(b)連接而成的15～30堿基長度的反義低聚物的工序，(a)第1單元低聚物，其包含與目標外顯子內(nèi)連續(xù)的7～15堿基的第1核苷酸序列互補的堿基序列，(b)第2單元低聚物，其包含與所述目標外顯子內(nèi)連續(xù)的7～15堿基的第2核苷酸序列互補的堿基序列，其中，所述第1核苷酸序列和第2核苷酸序列不連續(xù)或不相互重復。上述制造方法還可以包括：對所述工序中得到的反義低聚物的跳讀效率進行測定的工序、以及對具有超過基準值的跳讀效率的反義低聚物進行選擇的第2工序。在上述制造方法的第2工序中，跳讀效率可以通過下述方式進行計算：從受試細胞中回收包含目標外顯子的基因的mRNA，對該mRNA中跳讀了目標外顯子的條帶的多核苷酸量“A”和未跳讀目標外顯子的條帶的多核苷酸量“B”進行測定，基于上述“A”和“B”的測定值，按照下式進行計算。跳讀效率(％)＝A/(A+B)×100或者，跳讀效率的計算也可以參考國際公開公報第2012/029986號。在第2工序中，作為基準值的跳讀效率為10％以上、20％以上、30％以上、40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上。通過這樣地連接多個單元低聚物，即使在單元低聚物各自的跳讀活性低(或無該活性)的情況下，也能夠得到提高了跳讀活性的反義低聚物。本發(fā)明還提供一種反義低聚物的篩選方法，該方法同樣地包括：(a)對下述(i)和(ii)進行選擇的工序；(i)第1單元低聚物，其包含與目標外顯子內(nèi)連續(xù)的7～15堿基的第1核苷酸序列互補的堿基序列，(ii)第2單元低聚物，其包含與所述目標外顯子內(nèi)連續(xù)的7～15堿基的第2核苷酸序列互補的堿基序列，其中，所述第1核苷酸序列和第2核苷酸序列不連續(xù)或不相互重復，(b)通過連接所述第1和第2單元低聚物制作15～30堿基長度的反義低聚物的工序；(c)對所述工序(b)中得到的反義低聚物的跳讀效率進行測定的工序；以及(d)對具有超過基準值的跳讀效率的反義低聚物進行選擇的工序。在上述反義低聚物中，上述第1和第2單元低聚物中任一個可以位于5’側(cè)或3’側(cè)而連接，在某個實施方式中，第1單元低聚物位于5’側(cè)、第2單元低聚物位于3’側(cè)而連接。另外，上述反義低聚物可以含有第3單元低聚物，所述第3單元低聚物包含與上述目標外顯子內(nèi)連續(xù)的7～15堿基的第3核苷酸序列互補的堿基序列。這里，“連接”是指2個單元低聚物直接連接、或者經(jīng)由接頭接合。在2個單元低聚物直接連接的情況下，位于5’末端側(cè)的單元低聚物的3’末端與位于3’末端側(cè)的單元低聚物的5’末端形成磷酸鍵或以下基團。作為接頭的例子，除了1～5殘基的核酸(鏈)以外，還可以使用通常用于連接核酸、嗎啉基核酸衍生物的公知的接頭，可以列舉例如：3-氨基丙基、丁二?；?、2,2’-二乙醇磺酰基、長鏈烷基氨基(LCAA)。[化學式2](式中，X表示-OH、-CH2R1、-O-CH2R1、-S-CH2R1、-NR2R3或F；R1表示H、烷基；R2及R3相同或不同，表示H、烷基、環(huán)烷基或芳基；Y1表示O、S、CH2或NR1；Y2表示O、S或NR1；Z表示O或S。)上述第1和/或第2單元低聚物可以含有與跟上述目標外顯子鄰接的內(nèi)含子的部分核苷酸序列互補的堿基序列。例如，在第1單元低聚物位于5’側(cè)、第2單元低聚物位于3’側(cè)而連接的實施方式中，可以在第1單元低聚物的5’側(cè)含有與跟目標外顯子的5’側(cè)鄰接的內(nèi)含子3’末端附近部核苷酸序列互補的堿基序列，和/或可以在第2單元低聚物3’側(cè)含有與跟目標外顯子3’側(cè)鄰接的內(nèi)含子5’末端附近部核苷酸序列互補的堿基序列。上述第1和/或第2單元低聚物可以含有與上述目標外顯子的外顯子剪接增強子(ESE：ExonicSplicingEnhancer)的部分核苷酸序列互補的堿基序列。上述目標外顯子沒有特別限定，在某個實施方式中是人基因的外顯子，而且是人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子。更具體而言，是人抗肌萎縮蛋白基因的第44號外顯子。由此，本發(fā)明在某個實施方式中提供能夠跳讀人抗肌萎縮蛋白基因的第44號外顯子的反義低聚物(以下稱為“本發(fā)明的低聚物”)。以下，對本發(fā)明的反義低聚物的結(jié)構(gòu)詳細地進行說明。[人抗肌萎縮蛋白基因的第44號外顯子]在本發(fā)明中，“基因”除了基因組基因以外，還包括cDNA、mRNA前體及mRNA。優(yōu)選基因為mRNA前體，即pre-mRNA。在人基因組中，人抗肌萎縮蛋白基因存在于基因座Xp21.2。人抗肌萎縮蛋白基因具有3.0Mbp的大小，作為已知的人基因是最大的基因。但是，人抗肌萎縮蛋白基因的編碼區(qū)域僅有14kb，該編碼區(qū)域作為79個外顯子分散于抗肌萎縮蛋白基因內(nèi)(Roberts,RG.,etal.,Genomics,16：536-538(1993))。作為人抗肌萎縮蛋白基因的轉(zhuǎn)錄物的pre-mRNA經(jīng)過剪接而生成14kb的成熟mRNA。人的野生型抗肌萎縮蛋白基因的堿基序列是公知的(GenBank登記號：NM_004006)。將人的野生型抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的堿基序列示于序列號10。在某個實施方式中，本發(fā)明的低聚物是以通過將人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的跳讀將由DMD型抗肌萎縮蛋白基因編碼的蛋白質(zhì)改變?yōu)锽MD型抗肌萎縮蛋白作為目的而制作的。因此，作為本發(fā)明的低聚物的外顯子跳讀的對象，抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44不僅包括野生型，也包括變異型。具體而言，變異型的人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44是以下(I)或(II)所述的多核苷酸。(I)多核苷酸，其在嚴格條件下與由與序列號10的堿基序列互補的堿基序列構(gòu)成的多核苷酸雜交；(II)由相對于序列號10的堿基序列具有90％以上同源性(同一性)的堿基序列構(gòu)成的多核苷酸在本說明書中，“多核苷酸”是指DNA或RNA。在本說明書中，“在嚴格條件下雜交的多核苷酸”是例如以由與序列號10的堿基序列互補的堿基序列構(gòu)成的多核苷酸的全部或一部分作為探針，使用菌落雜交法、噬菌斑雜交法或DNA雜交(Southernhybridization)法等得到的多核苷酸。作為雜交的方法，例如可以使用在“Sambrook&Russell,MolecularCloning:ALaboratoryManualVol.3,ColdSpringHarbor,LaboratoryPress2001”及“Ausubel,CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons1987-1997”等記載的方法。在本說明書中，“互補的堿基序列”并不限定于與作為對象的堿基序列形成沃森-克里克配對(Watson-Crickpair)的堿基序列，還包括形成擺動堿基對(Wobblebasepair)的堿基序列。這里，沃森-克里克配對是指在腺嘌呤-胸腺嘧啶、腺嘌呤-尿嘧啶及鳥嘌呤-胞嘧啶之間可形成氫鍵的堿基對，擺動堿基對是指在鳥嘌呤-尿嘧啶、肌苷-尿嘧啶、肌苷-腺嘌呤及肌苷-胞嘧啶之間可形成氫鍵的堿基對。另外，“互補的堿基序列”可以與作為對的堿基序列不具有100％的互補性，例如，相對于作為對象的堿基序列，可以含有1～3個、1～2個或1個非互補的堿基。在本說明書中，“嚴格條件”可以是低嚴格條件、中嚴格條件及高嚴格條件中的任一種?！暗蛧栏駰l件”為例如5×SSC、5×鄧哈特溶液(Denhardt'ssolution)、0.5％SDS、50％甲酰胺、32℃的條件。另外“中嚴格條件”為例如5×SSC、5×鄧哈特溶液、0.5％SDS、50％甲酰胺、42℃或5×SSC、1％SDS、50mMTris-HCl(pH7.5)、50％甲酰胺、42℃的條件?！案邍栏駰l件”為例如5×SSC、5×鄧哈特溶液、0.5％SDS、50％甲酰胺、50℃或0.2×SSC、0.1％SDS、65℃的條件。在這些條件中，可以期待具有較高同源性的多核苷酸能夠在較高溫度高效地得到。但是，作為影響雜交的嚴格性的因素，可以考慮溫度、探針濃度、探針長度、離子強度、時間、鹽濃度等多種因素，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過對這些因素進行適當選擇來實現(xiàn)相同的嚴格性。需要說明的是，在將市售的試劑盒用于雜交時，可以使用例如AlkphosDirectLabellingandDetectionSystem(GEHealthcare)。在該情況下，按照試劑盒附帶的實驗方案，與標記的探針進行過夜的保溫培養(yǎng)，然后在55℃的條件下用含0.1％(w/v)SDS的1次清洗緩沖液對膜進行清洗，然后可以對雜交后的多核苷酸進行檢測?；蛘撸诨谂c序列號10的堿基序列互補的堿基序列的全部或一部分制作探針時，在使用市售的試劑(例如，PCRLabelingMix(RocheDiagnostics公司)等)將該探針標記異羥洋地黃毒苷配基(DIG)的情況下，可以使用DIG核酸檢測試劑盒(RocheDiagnostics公司)對雜交進行檢測。作為上述能夠雜交的多核苷酸以外的多核苷酸，可以列舉在通過同源性檢索軟件BLAST使用默認的參數(shù)進行計算時，與由序列號10的多核苷酸構(gòu)成的序列具有90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上、99.1％以上、99.2％以上、99.3％以上、99.4％以上、99.5％以上、99.6％以上、99.7％以上、99.8％以上或99.9％以上同源性的多核苷酸。需要說明的是，堿基序列的同源性可以使用Karlin和Altschul的算法BLAST(BasicLocalAlignmentSearchTool)(Proc.Natl.Acad.Sci.USA872264-2268,1990；ProcNatlAcadSciUSA90:5873,1993)來確定。開發(fā)了基于BLAST的算法的被稱為BLASTN、BLASTX的程序(AltschulSF,etal:JMolBiol215:403,1990)。在使用BLASTN分析堿基序列時，參數(shù)可以設(shè)為例如得分＝100、字長＝12。在使用BLAST和GappedBLAST程序時，使用各程序的默認參數(shù)。具體而言，本發(fā)明的低聚物是選自下述(a)和(b)的2個單元低聚物連接而成的15～30堿基長度的反義低聚物。(a)由與選自序列號1所示的核苷酸序列的連續(xù)7～15堿基的核苷酸序列互補的堿基序列構(gòu)成的單元低聚物(b)由與選自序列號2所示的核苷酸序列的連續(xù)7～15堿基的核苷酸序列互補的堿基序列構(gòu)成的單元低聚物例如，上述第1核苷酸序列可以是選自序列號1所示的核苷酸序列的連續(xù)7～15堿基的核苷酸序列，和/或上述第2核苷酸序列可以是選自序列號2所示的核苷酸序列的連續(xù)7～15堿基的核苷酸序列。優(yōu)選本發(fā)明的低聚物是選自下述(c)～(e)的2個單元低聚物連接而形成的15～30堿基長度的反義低聚物：(c)由與選自序列號3所示的核苷酸序列的連續(xù)7～15堿基的核苷酸序列互補的堿基序列構(gòu)成的單元低聚物(d)由與選自序列號4所示的核苷酸序列的連續(xù)7～15堿基的核苷酸序列互補的堿基序列構(gòu)成的單元低聚物(e)由與選自序列號5所示的核苷酸序列的連續(xù)7～15堿基的核苷酸序列互補的堿基序列構(gòu)成的單元低聚物。這里，序列號1和2所示的核苷酸序列是人的野生型抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的核苷酸序列(序列號10)中從5’末端起計數(shù)，分別由第-1～44號堿基構(gòu)成的序列及由第58～115號堿基構(gòu)成的序列。序列號3所示的核苷酸序列是人的野生型抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的核苷酸序列(序列號10)中從5’末端起計數(shù)，由第18～34號堿基構(gòu)成的序列。同樣地，序列號4和5所示的核苷酸序列是分別由第61～77號堿基構(gòu)成的序列及由第88～104號堿基構(gòu)成的序列。上述(a)～(e)的各單元低聚物(以下也簡稱為“單元”)的大小為7～15堿基長度，優(yōu)選為8～15堿基長度、9～15堿基長度、10～15堿基長度、10～14堿基長度、10～13堿基長度、11～13堿基長度。(a)～(e)各單元的大小可以相同，也可以不同。在從(a)和(b)中選擇2個單元低聚物時，2個單元低聚物可以是相同的單元低聚物的組合，或者也可以是不同的單元低聚物的組合。即，2個單元低聚物可以是(a)與(a)的組合或(b)與(b)的組合，或者也可以是(a)與(b)的組合。另外，在從(c)～(e)中選擇2個單元低聚物時，2個單元低聚物可以是相同的單元低聚物的組合，或者也可以是不同的單元低聚物的組合，優(yōu)選選擇不同種類的單元各1個。例如，在選擇(c)作為1個單元時，另一個的單元優(yōu)選為(d)或(e)。同樣地，在選擇(d)作為1個單元時，另一個的單元優(yōu)選為(c)或(e)，另外，在選擇(e)作為1個單元時，另一個的單元優(yōu)選為(c)或(d)。在選擇了(a)和(b)單元時，可以將選擇的2個單元中任一個設(shè)置于5’末端側(cè)，但在選擇了(a)和(b)時，優(yōu)選單元(a)連接于3’末端側(cè)。在從(c)～(e)中選擇了2個單元時，可以將選擇的2個單元中任一個設(shè)置于5’末端側(cè)，但在選擇了(c)和(d)的情況下，優(yōu)選單元(c)連接于3’末端側(cè)，在選擇了(d)和(e)的情況下，優(yōu)選單元(d)連接于3’末端側(cè)，在選擇了(c)和(e)的情況下，優(yōu)選單元(c)連接于3’末端側(cè)。這里，“連接”是指選自(a)和(b)的2個單元或選自(c)～(e)的2個單元直接連接。即，在2個單元連接的情況下，位于5’末端側(cè)的單元的3’末端與位于3’末端側(cè)的單元的5’末端形成磷酸鍵或以下基團。[化學式3](式中，X表示-OH、-CH2R1、-O-CH2R1、-S-CH2R1、-NR2R3或F；R1表示H、烷基；R2及R3相同或不同，表示H、烷基、環(huán)烷基或芳基；Y1表示O、S、CH2或NR1；Y2表示O、S或NR1；Z表示O或S。)“能夠進行人抗肌萎縮蛋白基因的第44號外顯子的跳讀”是指，通過將本發(fā)明的低聚物結(jié)合于與人抗肌萎縮蛋白基因的轉(zhuǎn)錄物(例如pre-mRNA)的外顯子44相當?shù)牟课?，在該轉(zhuǎn)錄物受到剪接時，例如在具有外顯子45缺失的DMD患者的情況下，相當于外顯子46的5’末端的堿基序列在相當于外顯子43的3’末端的堿基序列處剪接，可以形成未發(fā)生密碼子的移碼的成熟mRNA。這里，上述“結(jié)合”是指在將本發(fā)明的低聚物與人抗肌萎縮蛋白基因的轉(zhuǎn)錄物進行混合時，在生理條件下兩者雜交而形成雙鏈。上述“生理條件下”是指調(diào)節(jié)至與生物體內(nèi)類似的pH、鹽組成、溫度的條件。例如，可以列舉：25～40℃、優(yōu)選為37℃，pH5～8、優(yōu)選為pH7.4，氯化鈉濃度為150mM的條件。人抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44是否發(fā)生跳讀可以通過以下方式來確認：將本發(fā)明的低聚物導入抗肌萎縮蛋白表達細胞(例如人橫紋肌肉瘤細胞)，從上述抗肌萎縮蛋白表達細胞的總RNA中對人抗肌萎縮蛋白基因的mRNA的外顯子44的附近區(qū)域進行RT-PCR擴增，對該PCR擴增產(chǎn)物進行巢式PCR或序列分析。跳讀效率可以通過下述方式進行計算：從受試細胞中回收人抗肌萎縮蛋白基因的mRNA，對該mRNA中跳讀了外顯子44的條帶的多核苷酸量“A”和未跳讀外顯子44的條帶的多核苷酸量“B”進行測定，基于上述“A”和“B”的測定值，按照下式進行計算。跳讀效率(％)＝A/(A+B)×100或者，跳讀效率的計算也可以參考國際公開公報第2012/029986號。本發(fā)明的反義低聚物優(yōu)選以10％以上、20％以上、30％以上、40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上的效率跳讀目標外顯子(例如外顯子44)。作為本發(fā)明的反義低聚物，可以列舉例如：具有15～30堿基長度的寡核苷酸、嗎啉基低聚物或肽核酸(PeptideNucleicAcid：PNA)低聚物。本發(fā)明的反義低聚物優(yōu)選為16～30堿基、17～30堿基、18～30堿基、19～30堿基、20～30堿基、20～29堿基、20～28堿基、20～27堿基、20～26堿基、21～26堿基或22～26堿基的長度，優(yōu)選為嗎啉基低聚物。上述寡核苷酸(以下稱為“本發(fā)明的寡核苷酸”)是以核苷酸為結(jié)構(gòu)單元的本發(fā)明的低聚物，所述核苷酸可以是核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸或修飾核苷酸的任一種。修飾核苷酸是指構(gòu)成核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸的核酸堿基、糖部分及磷酸鍵部分的全部或一部分經(jīng)過修飾的核苷酸。作為核酸堿基，可以列舉例如：腺嘌呤、鳥嘌呤、次黃嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶或它們的修飾堿基。作為所述修飾堿基，可以列舉例如：假尿嘧啶核苷、3-甲基尿嘧啶、二氫尿嘧啶、5-烷基胞嘧啶(例如5-甲基胞嘧啶)、5-烷基尿嘧啶(例如5-乙基尿嘧啶)、5-鹵代尿嘧啶(5-溴尿嘧啶)、6-氮雜嘧啶、6-烷基嘧啶(6-甲基尿嘧啶)、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羥甲基)尿嘧啶、5’-羧基甲基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、5-羧基甲基氨基甲基尿嘧啶、1-甲基腺嘌呤、1-甲基次黃嘌呤、2,2-二甲基鳥嘌呤、3-甲基胞嘧啶、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鳥嘌呤、N6-甲基腺嘌呤、7-甲基鳥嘌呤、5-甲氧基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、5-甲基氨基甲基尿嘧啶、5-甲羰基甲基尿嘧啶、5-甲基氧基尿嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-甲硫基-N6-異戊烯腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸、2-硫胞嘧啶、嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、異鳥嘌呤、吲哚、咪唑、黃嘌呤等，但并不限定于此。作為糖部分的修飾，可以列舉例如：核糖2’位的修飾及糖的其它部分的修飾。作為核糖2’位的修飾，可以列舉例如：將核糖2’位的-OH基取代為OR、R、R’OR、SH、SR、NH2、NHR、NR2、N3、CN、F、Cl、Br、I。這里，R表示烷基或芳基。R’表示亞烷基。作為糖的其它部分的修飾，可以列舉例如：將核糖或脫氧核糖的4’位的O取代為S而得到的糖、將糖的2’位與4’位交聯(lián)而成的糖、例如LNA(鎖定核酸，LockedNucleicAcid)或ENA(2’-O,4’-C-亞乙基橋接的核酸，2’-O,4’-C-Ethylene-bridgedNucleicAcids)等，但并不限定于此。作為磷酸鍵部分的修飾，可以列舉例如：將磷酸二酯鍵替換為硫代磷酸酯鍵、二硫代磷酸酯鍵、膦酸烷基酯鍵、氨基磷酸酯鍵、硼磷酸酯鍵(Enyaetal:Bioorganic&MedicinalChemistry,2008,18,9154-9160)的修飾(例如，參考專利再公表公報第2006/129594號及第2006/038608號)。作為烷基，優(yōu)選直鏈狀或支鏈狀的碳原子數(shù)1～6的烷基。具體而言，可以列舉例如：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丙基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、新戊基、叔戊基、正己基、異己基。該烷基可以被取代，作為所述取代基，可以列舉例如：鹵素、烷氧基、氰基、硝基，可以取代1～3個這些基團。作為環(huán)烷基，優(yōu)選碳原子數(shù)5～12的環(huán)烷基。具體而言，可以列舉例如：環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)癸基、環(huán)十二烷基。作為鹵素，可以列舉：氟、氯、溴、碘。作為烷氧基，可以列舉直鏈狀或支鏈狀的碳原子數(shù)1～6的烷氧基，例如：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、異戊氧基、正己氧基、異己氧基等。特別優(yōu)選碳原子數(shù)1～3的烷氧基。作為芳基，優(yōu)選碳原子數(shù)6～10的芳基。具體而言，可以例舉例如：苯基、α-萘基、β-萘基。特別優(yōu)選苯基。該芳基可以被取代，作為所述取代基，可以列舉例如：烷基、鹵素、烷氧基、氰基、硝基，可以取代1～3個這些基團。作為亞烷基，優(yōu)選直鏈狀或支鏈狀的碳原子數(shù)1～6的亞烷基。具體而言，可以例舉例如：亞甲基、二亞甲基(ethylene)、三亞甲基、四亞甲基、五亞甲基、六亞甲基、2-(乙基)三亞甲基、1-(甲基)四亞甲基。作為酰基，可以列舉直鏈狀或支鏈狀的烷酰基或芳?；?。作為酰基，可以列舉例如：甲酰基、乙?；?、2-甲基乙?；?、2,2-二甲基乙?；?、丙?；?、丁?；?、異丁?；?、戊酰基、2,2-二甲基丙酰基、己酰基等。作為芳?；梢粤信e例如：苯甲?；?、甲苯酰基、萘甲酰基。所述芳?；梢栽谀軌蛉〈奈恢冒l(fā)生取代，可以用烷基取代。本發(fā)明的寡核苷酸優(yōu)選為以下述通式所示的基團作為結(jié)構(gòu)單元的本發(fā)明的低聚物，其中，核糖的2’位-OH基優(yōu)選被甲氧基取代，磷酸鍵部分為硫代磷酸酯鍵。[化學式4](式中，Base表示核酸堿基。)本發(fā)明的寡核苷酸可以用各種自動合成裝置(例如，AKTAoligopilotplus10/100(GEHealthcare))來容易地合成，或者可以委托第三方機構(gòu)(例如Promega公司或Takara公司)等來制作。上述嗎啉基低聚物是以下述通式所示的基團作為結(jié)構(gòu)單元的本發(fā)明的低聚物。[化學式5](式中，Base與上述含義相同；W表示以下任一式所示的基團。[化學式6](式中，X表示-CH2R1、-O-CH2R1、-S-CH2R1、-NR2R3或F；R1表示H、烷基；R2及R3相同或不同，表示H、烷基、環(huán)烷基或芳基；Y1表示O、S、CH2或NR1；Y2表示O、S或NR1；Z表示O或S。))嗎啉基低聚物優(yōu)選為以下式所示的基團作為結(jié)構(gòu)單元的低聚物(二氨基磷酸酯嗎啉基低聚物(以下稱為“PMO”))。[化學式7](式中，Base、R2、R3與上述含義相同。)嗎啉基低聚物可以按照例如國際公開公報第1991/009033號或國際公開公報第2009/064471號來制造。特別是PMO可以按照國際公開公報第2009/064471號中記載的方法來制造，或者按照國際公開公報第2013/100190號中記載的方法來制造。[PMO的制造方法]作為PMO的1個方式，可以列舉例如下述通式(I)所示的化合物(以下稱為PMO(I))。[化學式8][式中、各Base、R2、R3與上述含義相同；N為1～99的范圍內(nèi)的任意整數(shù)，優(yōu)選為18～28的范圍內(nèi)的任意整數(shù)。]PMO(I)可以按照公知的方法來制造，例如，可以通過實施下述工序的操作來制造。對于下述工序所使用的化合物及試劑而言，只要是通常用于PMO的制造的化合物及試劑即可，沒有特別限定。另外，下述所有工序可以通過液相法或固相法(使用手動或市售的固相自動合成機)來實施。在用固相法制造PMO時，從操作步驟的簡化及合成的正確性的觀點考慮，優(yōu)選使用自動合成機的方法。(1)工序A：通過使下述通式(II)所示的化合物(以下稱為化合物(II))與酸作用來制造下述通式(III)所示的化合物(以下稱為化合物(III))的工序。[化學式9][式中，n、R2、R3與上述含義相同；各個BP獨立地表示任選被保護的核酸堿基；T表示三苯甲基、單甲氧基三苯甲基或二甲氧基三苯甲基；L表示氫、酰基或下述通式(IV)所示的基團(以下稱為基團(IV))。][化學式10]作為BP的“核酸堿基”，可以舉出與Base相同的“核酸堿基”。其中，BP的核酸堿基的氨基或羥基可以被保護。作為所述氨基的保護基，只要是能夠作為核酸的保護基使用的基團即可，沒有特別限制，具體而言可以例舉例如：苯甲?；?-甲氧基苯甲?；⒁阴；?、丙?；⒍□；惗□；?、苯乙?；⒈窖跻阴；?-叔丁基苯氧乙?；?-異丙基苯氧乙?；?、(二甲基氨基)亞甲基。作為羥基的保護基，可以列舉例如：2-氰基乙基、4-硝基苯乙基、苯基磺?；一?、甲基磺?；一?、三甲基甲硅烷基乙基、在可取代的任意位置任選被1～5個吸電子基團取代的苯基、二苯基氨基甲?；?、二甲基氨基甲酰基、二乙基氨基甲酰基、甲基苯基氨基甲酰基、1-吡咯烷基氨基甲酰基、嗎啉基氨基甲酰基、4-(叔丁基羧基)芐基、4-[(二甲基氨基)羧基]芐基、4-(苯基羧基)芐基(例如，參考國際公開公報第2009/064471號公報)。作為“固相載體”，只要是能夠用于核酸的固相反應(yīng)的載體即可，沒有特別限制，例如優(yōu)選具有如下性質(zhì)的載體：(i)基本上不溶于能夠用于嗎啉基核酸衍生物的合成的試劑(例如，二氯甲烷、乙腈、四唑、N-甲基咪唑、吡啶、乙酸酐、二甲基吡啶、三氟乙酸)，(ii)對能夠用于嗎啉基核酸衍生物的合成的試劑在化學上穩(wěn)定，(iii)可進行化學修飾，(iv)能夠裝填希望的嗎啉基核酸衍生物，(v)具有能夠耐受處理中高壓的足夠強度，(vi)具有一定的粒徑范圍和分布。具體而言可以例舉：溶脹性聚苯乙烯(例如，氨基甲基聚苯乙烯樹脂1％二芐基苯交聯(lián)(200～400目)(2.4～3.0mmol/g)(東京化成株式會社制造)、氨基甲基化的聚苯乙烯樹脂·HCl(AminomethylatedPolystyreneResin·HCl)[二芐基苯1％，100～200目](株式會社肽研究所制造))、非溶脹性聚苯乙烯(例如PrimerSupport(GEHealthcare公司制造))、PEG鏈鍵合型聚苯乙烯(例如NH2-PEG樹脂(渡邊化學株式會社制造)、TentaGelresin)、可控孔度玻璃(controlledporeglass；CPG)(例如CPG公司制造)、乙二酰化-可控孔度玻璃(例如參考Alul等,NucleicAcidsResearch,Vol.19,1527(1991))、TentaGel支撐體-氨基乙二醇衍生物化支撐體(例如參考Wright等,TetrahedronLetters,Vol.34,3373(1993))、Poros-聚苯乙烯/二乙烯基苯的共聚物。作為“接頭”，可以使用通常用于連接核酸、嗎啉基核酸衍生物的公知的接頭，可以列舉例如：3-氨基丙基、丁二?；?、2,2’-二乙醇磺?；?、長鏈烷基氨基(LCAA)。本工序可以通過使酸與化合物(II)作用來實施。作為能夠用于本工序的“酸”，可以列舉例如：三氟乙酸、二氯乙酸或三氯乙酸。作為酸的用量，例如，相對于化合物(II)1摩爾，在0.1摩爾當量～1000摩爾當量的范圍內(nèi)是適當?shù)?，?yōu)選為1摩爾當量～100摩爾當量的范圍內(nèi)。另外，可以與上述酸同時使用有機胺。作為有機胺，沒有特別限定，可以列舉例如三乙胺。作為有機胺的用量，例如，相對于酸1摩爾，在0.01摩爾當量～10摩爾當量的范圍內(nèi)是適當?shù)模瑑?yōu)選為0.1摩爾當量～2摩爾當量的范圍內(nèi)。在本工序中，使用酸和有機胺的鹽或混合物時，可以舉出例如三氟乙酸與三乙胺的鹽或混合物，更具體而言，可以舉出對三氟乙酸2當量混合三乙胺1當量而得到的物質(zhì)。能夠用于本工序的酸可以用適當?shù)娜軇┫♂屩?.1％～30％的范圍內(nèi)的濃度來使用。作為溶劑，只要與反應(yīng)無關(guān)就沒有特別限定，可以列舉例如：二氯甲烷、乙腈、醇類(乙醇、異丙醇、三氟乙醇等)、水或它們的混合物。上述反應(yīng)中的反應(yīng)溫度優(yōu)選為例如10℃～50℃的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為20℃～40℃的范圍內(nèi)，進一步優(yōu)選為25℃～35℃的范圍內(nèi)。反應(yīng)時間根據(jù)使用的酸的種類、反應(yīng)溫度而不同，通常在0.1分鐘～24小時的范圍內(nèi)是適當?shù)?。?yōu)選為1分鐘～5小時的范圍內(nèi)。另外，在本工序結(jié)束后，可以根據(jù)需要添加用于中和體系中存在的酸的堿。作為“堿”，沒有特別限定，可以列舉例如二異丙胺。堿可以用適當?shù)娜軇┫♂屩?.1％(v/v)～30％(v/v)的范圍內(nèi)的濃度來使用。作為本工序中使用的溶劑，只要與反應(yīng)無關(guān)就沒有特別限定，可以列舉：二氯甲烷、乙腈、醇類(乙醇、異丙醇、三氟乙醇等)、水或它們的混合物。反應(yīng)溫度優(yōu)選為例如10℃～50℃的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為20℃～40℃的范圍內(nèi)，進一步優(yōu)選為25℃～35℃的范圍內(nèi)。反應(yīng)時間根據(jù)使用的堿的種類、反應(yīng)溫度而不同，通常在0.1分鐘～24小時的范圍內(nèi)是適當?shù)?，?yōu)選為1分鐘～5小時的范圍內(nèi)。需要說明的是，在化合物(II)中，n＝1，L為基團(IV)，下述通式(IIa)所示的化合物(以下稱為化合物(IIa))可以按照以下方法來制造。[化學式11][式中，BP、T、接頭、固相載體與上述含義相同。]工序1：通過使?；瘎┡c下述通式(V)所示的化合物作用來制造下述通式(VI)所示的化合物(以下稱為化合物(VI))的工序。[化學式12][式中，BP、T、接頭與上述含義相同；R4表示羥基、鹵素或氨基。]本工序可以將化合物(V)作為起始原料，通過公知的接頭導入反應(yīng)來實施。特別是下述通式(VIa)所示的化合物，可以通過實施使用化合物(V)和丁二酸酐進行酯化反應(yīng)的已知方法來制造。[化學式13][式中，BP、T與上述含義相同。]工序2：通過使縮合劑等與化合物(VI)作用而與固相載體發(fā)生反應(yīng)，制造化合物(IIa)的工序。[化學式14][式中、BP、R4、T、接頭、固相載體與上述含義相同。]本工序可以通過使用化合物(VI)和固相載體進行縮合反應(yīng)的已知方法來進行制造。在化合物(II)中，n＝2～99，L為基團(IV)，下述通式(IIa2)所示的化合物可以將化合物(IIa)作為起始原料，通過重復實施希望次數(shù)的本說明書中記載的PMO制造方法中的工序A和工序B來制造。[化學式15][式中，BP、R2、R3、T、接頭、固相載體與上述含義相同；n’表示1～98。]另外，在化合物(II)中，n＝1，L為氫，下述通式(IIb)所示的化合物可以通過例如國際公開公報第1991/009033號中記載的方法來制造。[化學式16][式中、BP、T與上述含義相同。]在化合物(II)中，n＝2～99，L為氫，下述通式(IIb2)所示的化合物可以將化合物(IIb)作為起始原料，通過重復實施希望次數(shù)的本說明書中記載的PMO制造方法中的工序A和工序B來制造。[化學式17][式中，BP、n’、R2、R3、T與上述含義相同。]另外，在化合物(II)中，n＝1，L為?；?，下述通式(IIc)所示的化合物可以通過實施對化合物(IIb)進行?；磻?yīng)的已知方法來制造。[化學式18][式中，BP、T與上述含義相同；R5表示?；?。]在化合物(II)中，n＝2～99，L為酰基，下述通式(IIc2)所示的化合物可以將化合物(IIc)作為起始原料，通過重復實施希望次數(shù)的本說明書中記載的PMO制造方法中的工序A和工序B來制造。[化學式19][式中、BP、n’、R2、R3、R5、T與上述含義相同。](2)工序B：通過在堿存在下使嗎啉基單體化合物與化合物(III)作用來制造下述通式(VII)所示的化合物(以下稱為化合物(VII))的工序。[化學式20][式中，各BP、L、n、R2、R3、T與上述含義相同。]本工序可以通過在堿存在下使嗎啉基單體化合物與化合物(III)作用來實施。作為嗎啉基單體化合物，可以列舉例如下述通式(VIII)所示的化合物。[化學式21][式中，BP、R2、R3、T與上述含義相同。]作為能夠在本工序中使用的“堿”，可以列舉例如：二異丙胺、三乙胺或N-乙基嗎啉。作為堿的用量，例如，相對于化合物(III)1摩爾，在1摩爾當量～1000摩爾當量的范圍內(nèi)是適當?shù)?，?yōu)選為10摩爾當量～100摩爾當量的范圍內(nèi)。能夠用于本工序的嗎啉基單體化合物及堿基可以使用適當?shù)娜軇┫♂屩?.1％～30％的濃度來使用。作為溶劑，只要與反應(yīng)無關(guān)就沒有特別限定，可以列舉例如：N,N-二甲基咪唑啉酮、N-甲基哌啶酮、DMF、二氯甲烷、乙腈、四氫呋喃或它們的混合物。反應(yīng)溫度優(yōu)選為例如0℃～100℃的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為10℃～50℃的范圍內(nèi)。反應(yīng)時間根據(jù)使用的堿的種類、反應(yīng)溫度而不同，通常在1分鐘～48小時的范圍內(nèi)是適當?shù)?，?yōu)選為30分鐘～24小時的范圍內(nèi)。另外，在本工序結(jié)束后可以根據(jù)需要添加?；瘎Ｗ鳛椤磅；瘎?，可以列舉例如：乙酸酐、乙酰氯、苯氧乙酸酐。?；瘎├缈梢允褂眠m當?shù)娜軇┫♂屩?.1％～30％的范圍內(nèi)的濃度來使用。作為溶劑，只要與反應(yīng)無關(guān)就沒有特別限定，可以列舉例如：二氯甲烷、乙腈、醇類(乙醇、異丙醇、三氟乙醇等)、水或它們的混合物。另外，如果需要，可以與酰化劑一起使用例如吡啶、二甲基吡啶、三甲基吡啶、三乙胺、二異丙基乙基胺、N-乙基嗎啉等堿。作為?；瘎┑挠昧浚瑑?yōu)選為0.1摩爾當量～10000摩爾當量的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為1摩爾當量～1000摩爾當量的范圍內(nèi)。作為堿的用量，例如，相對于?；瘎?摩爾，0.1摩爾當量～100摩爾當量的范圍內(nèi)是適當?shù)?，?yōu)選為1摩爾當量～10摩爾當量的范圍內(nèi)。本反應(yīng)的反應(yīng)溫度優(yōu)選為10℃～50℃的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為10℃～50℃的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為20℃～40℃的范圍內(nèi)，進一步優(yōu)選為25℃～35℃的范圍內(nèi)。反應(yīng)時間根據(jù)例如使用的?；瘎┑姆N類、反應(yīng)溫度而不同，通常在0.1分鐘～24小時的范圍內(nèi)是適當?shù)?，?yōu)選為1分鐘～5小時的范圍內(nèi)。(3)工序C：對于在工序B中制造的化合物(VII)，使用脫保護劑脫去保護基，從而制造通式(IX)所示的化合物的工序。[化學式22][式中，Base、BP、L、n、R2、R3、T與上述含義相同。]本工序可以通過使脫保護劑與化合物(VII)作用來實施。作為“脫保護劑”，可以列舉例如：濃氨水、甲胺。能夠用于本工序的“脫保護劑”可以用例如水、甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、四氫呋喃、DMF、N,N-二甲基咪唑啉酮、N-甲基哌啶酮或它們的混合溶劑進行稀釋來使用。其中，優(yōu)選乙醇。作為脫保護劑的用量，例如，相對于化合物(VII)1摩爾，例如1摩爾當量～100000摩爾當量的范圍內(nèi)是適當?shù)模瑑?yōu)選為10摩爾當量～1000摩爾當量的范圍內(nèi)。反應(yīng)溫度在例如15℃～75℃的范圍內(nèi)是適當?shù)?，?yōu)選為40℃～70℃的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為50℃～60℃的范圍內(nèi)。脫保護反應(yīng)時間根據(jù)化合物(VII)的種類、反應(yīng)溫度等而不同，在10分鐘～30小時的范圍內(nèi)是適當?shù)?，?yōu)選為30分鐘～24小時的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為5小時～20小時的范圍內(nèi)。(4)工序D：通過使酸與工序C中制造的化合物(IX)作用來制造PMO(I)的工序。[化學式23][式中，Base、n、R2、R3、T與上述含義相同。]本工序可以通過向化合物(IX)中加入酸來實施。作為在本工序中可以使用的“酸”，可以列舉例如：三氯乙酸、二氯乙酸、乙酸、磷酸及鹽酸等。作為酸的用量，例如在溶液的pH為0.1～4.0的范圍內(nèi)使用是適當?shù)?，更?yōu)選在1.0～3.0的范圍內(nèi)使用。作為溶劑，只要與反應(yīng)無關(guān)就沒有特別限定，可以列舉例如：乙腈、水或它們的混合溶劑。反應(yīng)溫度優(yōu)選為10℃～50℃的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為20℃～40℃的范圍內(nèi)，進一步優(yōu)選為25℃～35℃的范圍內(nèi)。脫保護反應(yīng)時間根據(jù)化合物(IX)的種類、反應(yīng)溫度等而不同，在0.1分鐘～5小時的范圍內(nèi)是適當?shù)?，?yōu)選為1分鐘～1小時的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為1分鐘～30分鐘的范圍內(nèi)。PMO(I)可以通過單獨使用或組合使用通常的分離純化方法從本工序中得到的反應(yīng)混合物中得到，所述通常的分離純化方法例有提取、濃縮、中和、過濾、離心分離、重結(jié)晶、C8～C18的反相柱色譜、陽離子交換柱色譜、陰陽離子交換柱色譜、凝膠過濾柱色譜、高效液相色譜、透析、超濾等方法，可以對希望的PMO(I)進行分離純化(例如，參考國際公開公報WO1991/09033)。在使用反相色譜法對PMO(I)進行純化時，作為洗脫溶劑，可以使用例如20mM的三乙胺/乙酸緩沖液與乙腈的混合溶液。另外，在使用離子交換色譜法對PMO(I)進行純化時，可以使用例如1M的食鹽水與10mM的氫氧化鈉水溶液的混合溶液。上述肽核酸低聚物是以下述通式所示的基團作為結(jié)構(gòu)單元的本發(fā)明的低聚物。[化學式24](式中，Base與上述含義相同。)肽核酸例如可以按照以下文獻來進行制造。1)P.E.Nielsen,M.Egholm,R.H.Berg,O.Buchardt,Science,254,1497(1991)2)M.Egholm,O.Buchardt,P.E.Nielsen,R.H.Berg,Jacs.,114,1895(1992)3)K.L.Dueholm,M.Egholm,C.Behrens,L.Christensen,H.F.Hansen,T.Vulpius,K.H.Petersen,R.H.Berg,P.E.Nielsen,O.Buchardt,J.Org.Chem.,59,5767(1994)4)L.Christensen,R.Fitzpatrick,B.Gildea,K.H.Petersen,H.F.Hansen,T.Koch,M.Egholm,O.Buchardt,P.E.Nielsen,J.Coull,R.H.Berg,J.Pept.Sci.,1,175(1995)5)T.Koch,H.F.Hansen,P.Andersen,T.Larsen,H.G.Batz,K.Otteson,H.Orum,J.Pept.Res.,49,80(1997)另外，本發(fā)明的低聚物的5’末端可以是下述化學式(1)～(3)中任一種基團。優(yōu)選為(3)-OH。[化學式25]以下，將上述(1)、(2)及(3)所示的基團分別稱為“基團(1)”、“基團(2)”及“基團(3)”。2.醫(yī)藥組合物本發(fā)明的低聚物能夠跳讀抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44。因此可以預測，通過對DMD患者給藥含有本發(fā)明的低聚物的醫(yī)藥組合物，能夠緩解肌肉萎縮癥的癥狀，所述DMD患者在抗肌萎縮蛋白基因中具有成為外顯子44跳讀的對象的變異(通過外顯子44跳讀而轉(zhuǎn)化為符合讀碼框的變異)。另外，由短鏈長構(gòu)成的本發(fā)明的低聚物具有制造工序簡便，而且可降低制造成本的優(yōu)點。下面，作為其它實施方式，提供一種以本發(fā)明的低聚物、其醫(yī)藥上能夠允許的鹽或水合物作為有效成分的肌肉萎縮癥治療用醫(yī)藥組合物(以下稱為“本發(fā)明的組合物”)。作為本發(fā)明的組合物中含有的本發(fā)明低聚物的醫(yī)藥上能夠允許的鹽的例子，可以列舉：鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽這樣的堿金屬鹽、鈣鹽、鎂鹽這樣的堿土金屬鹽；鋁鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、鎳鹽、鈷鹽等金屬鹽；銨鹽；叔辛胺鹽、二芐胺鹽、嗎啉鹽、葡糖胺鹽、苯基甘氨酸烷基酯鹽、乙二胺鹽、N-甲基葡糖胺鹽、胍鹽、二乙胺鹽、三乙胺鹽、二環(huán)己胺鹽、N,N’-二芐基乙二胺鹽、氯普魯卡因鹽、普魯卡因鹽、二乙醇胺鹽、N-芐基-苯乙胺鹽、哌嗪鹽、四甲基銨鹽、三(羥甲基)氨基甲烷鹽這樣的有機胺鹽；氫氟酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽這樣的氫鹵酸鹽；硝酸鹽、高氯酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽等無機酸鹽；甲磺酸鹽、三氟甲磺酸鹽、乙磺酸鹽這樣的低級烷基磺酸鹽；苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽這樣的芳基磺酸鹽；乙酸鹽、蘋果酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、草酸鹽、馬來酸鹽等有機酸鹽；甘氨酸鹽、賴氨酸鹽、精氨酸鹽、鳥氨酸鹽、谷氨酸鹽、天冬氨酸鹽這樣的氨基酸鹽等。這些鹽可以用公知的方法來制造?；蛘撸景l(fā)明的組合物中含有的本發(fā)明的低聚物可以為其水和物的形態(tài)。本發(fā)明的組合物的給藥方式只要是醫(yī)藥上能夠允許的給藥方式即可，沒有特別限制，可以根據(jù)治療方法來選擇，從傳遞至肌組織的容易性的觀點考慮，優(yōu)選靜脈內(nèi)給藥、動脈內(nèi)給藥、肌肉內(nèi)給藥、皮下給藥、口服給藥、組織內(nèi)給藥、經(jīng)皮給藥等。另外，作為可能的劑型，本發(fā)明的組合物沒有特別限制，可以列舉例如：各種注射劑、口服劑、輸液劑、吸入劑、軟膏劑、洗劑等。在對肌肉萎縮癥患者給藥本發(fā)明的低聚物時，優(yōu)選本發(fā)明的組合物包含促進將該低聚物傳遞至肌組織的載體。這樣的載體只要在醫(yī)藥上能夠允許即可，沒有特別限制，作為其例子，可以列舉：陽離子性脂質(zhì)體、陽離子性聚合物等陽離子性載體、或者利用了病毒包膜的載體。作為陽離子性脂質(zhì)體，可以列舉例如：以2-O-(2-二乙基氨基乙基)氨基甲?；?1,3-O-二油酸甘油酯和磷脂作為必需結(jié)構(gòu)成分而形成的脂質(zhì)體(以下稱為“脂質(zhì)體A”)、Oligofectamine(注冊商標)(Invitrogen公司制造)、Lipofectin(注冊商標)(Invitrogen公司制造)、Lipofectamine(注冊商標)(Invitrogen公司制造)、Lipofectamine2000(注冊商標)(Invitrogen公司制造)、DMRIE-C(注冊商標)(Invitrogen公司制造)、GeneSilencer(注冊商標)(GeneTherapySystems公司制造)、TransMessenger(注冊商標)(QIAGEN公司制造)、TransITTKO(注冊商標)(Mirus公司制造)、NucleofectorII(Lonza)。其中，優(yōu)選脂質(zhì)體A。作為陽離子性聚合物，可以列舉例如：JetSI(注冊商標)(Qbiogene公司制造)、Jet-PEI(注冊商標)(聚乙烯亞胺、Qbiogene公司制造)。作為利用了病毒包膜的載體，可以列舉例如：GenomeOne(注冊商標)(HVJ-E脂質(zhì)體、石原產(chǎn)業(yè)株式會社制造)?；蛘呖梢允褂脤＠?924179號中記載的醫(yī)藥器件、專利再公表公報第2006/129594號及專利再公表公報第2008/096690號中記載的陽離子性載體。本發(fā)明的組合物中含有的本發(fā)明低聚物的濃度根據(jù)載體的種類等而不同，在0.1nM～100μM的范圍內(nèi)是適當?shù)模瑑?yōu)選為1nM～10μM的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為10nM～1μM的范圍內(nèi)。另外，本發(fā)明的組合物中含有的本發(fā)明的低聚物與載體的重量比(載體/本發(fā)明的低聚物)根據(jù)該低聚物的性質(zhì)及該載體的種類等而不同，在0.1～100的范圍內(nèi)是適當?shù)?，?yōu)選為1～50的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為10～20的范圍內(nèi)。除了本發(fā)明的低聚物和上述載體以外，本發(fā)明的組合物中可以任意配合醫(yī)藥上能夠允許的添加劑。作為所述添加劑，可以列舉例如：乳化助劑(例如，碳原子數(shù)6～22的脂肪酸、其在醫(yī)藥上能夠允許的鹽、白蛋白、右旋糖酐)、穩(wěn)定劑(例如，膽固醇、磷脂酸)、等滲劑(例如，氯化鈉、葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖)、pH調(diào)節(jié)劑(例如，鹽酸、硫酸、磷酸、乙酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀、三乙醇胺)。這些添加劑可以使用一種或兩種以上。本發(fā)明的組合物中該添加劑的含量為90重量％以下是適當?shù)?，?yōu)選為70重量％以下，更優(yōu)選為50重量％以下。本發(fā)明的組合物可以通過在載體的分散液中加入本發(fā)明的低聚物并適當攪拌來制備。另外，添加劑可以在本發(fā)明的低聚物添加前的適當?shù)墓ば蛑刑砑?，也可以在添加后的適當?shù)墓ば蛑刑砑?。作為添加本發(fā)明的低聚物時可以使用的水性溶劑，只要是醫(yī)藥上能夠允許的溶劑即可，沒有特別限制，可以列舉例如：注射用水、注射用蒸餾水、生理鹽水等電解質(zhì)液、葡萄糖液、麥芽糖液等糖液。另外，對于上述情況下的pH及溫度等條件而言，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以適當選擇。本發(fā)明的組合物可以制成例如液體制劑、其冷凍干燥制劑。該冷凍干燥制劑可以按照通常方法對具有液體制劑形態(tài)的本發(fā)明的組合物進行冷凍干燥處理來制備。例如，可以在對具有液體制劑形態(tài)的本發(fā)明的組合物進行適當滅菌之后，將給定量分配于管型瓶中，在約-40～-20℃的條件下進行2小時左右的預冷凍，在約0～10℃、減壓下進行一次干燥，接著在約15～25℃、減壓下進行二次干燥，進行冷凍干燥。然后，通常將管型瓶內(nèi)部置換為氮氣并壓蓋，可以得到本發(fā)明的組合物的冷凍干燥制劑。本發(fā)明的組合物的冷凍干燥制劑通?？梢酝ㄟ^添加任意適當?shù)娜芤?再溶解液)而再溶解來使用。作為這樣的再溶解液，可以列舉：注射用水、生理鹽水、其它普通輸液。該再溶解液的液量根據(jù)用途等而不同，沒有特別限制，為冷凍干燥前的液量的0.5～2倍量或500mL以下是適當?shù)?。作為給藥本發(fā)明的組合物是的用量，優(yōu)選在考慮了所含有的本發(fā)明低聚物的種類、劑型、年齡、體重等患者的狀態(tài)、給藥途徑、疾病性質(zhì)與程度的基礎(chǔ)上進行制備，作為對成人的本發(fā)明的低聚物的量，通常為每1天0.1mg～10g/人的范圍內(nèi)，優(yōu)選為1mg～1g/人的范圍內(nèi)。該數(shù)值有時根據(jù)作為目標的疾病種類、給藥方式、靶分子而有所不同。因此，根據(jù)情況，有時在此以下就足夠了，反之，有時需要在此以上的用量。另外，可以1天1次至數(shù)次給藥或以1天～數(shù)天的間隔進行給藥。作為本發(fā)明的組合物的其它方式，可以列舉：包含能夠表達本發(fā)明的寡核苷酸的載體和上述載體的醫(yī)藥組合物。所述表達載體可以是能夠表達多個本發(fā)明的寡核苷酸的載體?？梢耘c含有本發(fā)明低聚物的本發(fā)明的組合物同樣地在該組合物中添加醫(yī)藥上能夠允許的添加劑。該組合物中含有的表達載體的濃度根據(jù)載體的種類等而不同，在0.1nM～100μM的范圍內(nèi)是適當?shù)?，由?nM～10μM的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為10nM～1μM的范圍內(nèi)。該組合物中含有的表達載體與載體的重量比(載體/表達載體)根據(jù)表達載體的性質(zhì)、載體的種類等而不同，在0.1～100的范圍內(nèi)是適當?shù)?，?yōu)選為1～50的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為10～20的范圍內(nèi)。另外，該組合物中含有的載體的含量與含有本發(fā)明低聚物的本發(fā)明的組合物的情況相同，關(guān)于其制備方法等也與本發(fā)明的組合物的情況相同。以下，列舉實施例及試驗例對本發(fā)明進一步詳細地進行說明，但本發(fā)明并不限定于實施例所示的范圍。實施例[參考例1]擔載于氨基聚苯乙烯樹脂的4-{[(2S,6R)-6-(4-苯甲酰胺-2-氧代嘧啶-1-基)-4-三苯甲基嗎啉-2-基]甲氧基}-4-氧代丁酸工序1：4-{[(2S,6R)-6-(4-苯甲酰胺-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-4-三苯甲基嗎啉-2-基]甲氧基}-4-氧代丁酸的制造在氬氣氛圍中將N-{1-[(2R,6S)-6-(羥甲基)-4-三苯甲基嗎啉-2-基]-2-氧代-1,2-二氫嘧啶-4-基}苯甲酰胺3.44g和4-二甲氨基吡啶(4-DMAP)1.1g懸浮于二氯甲烷50mL中，加入琥珀酸酐0.90g，在室溫下攪拌3小時。向反應(yīng)液中加入甲醇10mL，進行減壓濃縮。使用乙酸乙酯和0.5M磷酸二氫鉀水溶液對殘渣進行提取操作。按照0.5M磷酸二氫鉀水溶液、水、飽和食鹽水的順序?qū)Φ玫降挠袡C層進行清洗。用硫酸鈉干燥得到的有機層，進行減壓濃縮，得到了4.0g目標產(chǎn)物。工序2：擔載于氨基聚苯乙烯樹脂的4-{[(2S,6R)-6-(4-苯甲酰胺-2-氧代嘧啶-1-基)-4-三苯甲基嗎啉-2-基]甲氧基}-4-氧代丁酸的制造將4-{[(2S，6R)-6-(4-苯甲酰胺-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-4-三苯甲基嗎啉-2-基]甲氧基}-4-氧代丁酸4.0g溶解于吡啶(脫水)200mL，加入4-DMAP0.73g、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽11.5g。接著，加入氨基聚苯乙烯樹脂Primersupport200amino(GEHealthcareJapan公司制造、17-5214-97)25.0g、三乙胺8.5mL，在室溫下振蕩4天。反應(yīng)后，濾取樹脂。按照吡啶、甲醇、二氯甲烷的順序清洗得到的樹脂并進行減壓干燥。向得到的樹脂中加入四氫呋喃(脫水)200mL、乙酸酐15mL、2,6-二甲基吡啶15mL，在室溫下振蕩2小時。濾取樹脂，并按照吡啶、甲醇、二氯甲烷的順序清洗，并進行減壓干燥，得到了26.7g的目標產(chǎn)物。對于該目標產(chǎn)物的裝載量而言，通過使用公知的方法對409nm的UV吸光度進行測定來確定每1g樹脂的三苯甲基摩爾量。樹脂的裝載量為129.2μmol/g。UV測定條件機器：U-2910(株式會社日立制作所)溶劑：甲磺酸波長：409nmε值：45000[參考例2]擔載于聚苯乙烯樹脂的4-{[(2S,6R)-6-(5-甲基-2,4-二氧代嘧啶-1-基)-4-三苯甲基嗎啉-2-基]甲氧基}-4-氧代丁酸按照與參考例1相同的方法制造了標題化合物。其中，在本工序中使用1-[(2R,6S)-6-(羥甲基)-4-三苯甲基嗎啉-2-基]-5-甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮來代替參考例1的工序1中使用的N-{1-[(2R,6S)-6-(羥甲基)-4-三苯甲基嗎啉-2-基]-2-氧代-1,2-二氫嘧啶-4-基}苯甲酰胺。對于該目標產(chǎn)物的裝載量而言，通過使用公知的方法對409nm的UV吸光度進行測定來確定每1g樹脂的三苯甲基摩爾量。樹脂的裝載量為164.0μmol/g。[參考例3]擔載于氨基聚苯乙烯樹脂的4-{[(2S,6R)-6-(6-苯甲酰胺嘌呤-9-基)-4-三苯甲基嗎啉-2-基]甲氧基}-4-氧代丁酸按照與參考例1相同的方法制造了標題化合物。其中，在本工序中使用N-{9-[(2R,6S)-6-(羥甲基)-4-三苯甲基嗎啉-2-基]嘌呤-6-基}苯甲酰胺來代替參考例1的工序1中使用的N-{1-[(2R,6S)-6-(羥甲基)-4-三苯甲基嗎啉-2-基]-2-氧代-1,2-二氫嘧啶-4-基}苯甲酰胺。對于該目標產(chǎn)物的裝載量而言，通過使用公知的方法對409nm的UV吸光度進行測定來確定每1g樹脂的三苯甲基摩爾量。樹脂的裝載量為185.7μmol/g。[參考例4]擔載于氨基聚苯乙烯樹脂的4-{{(2S,6R)-6-{6-(2-氰基乙氧基)-2-[(2-苯氧乙酰基)氨基]嘌呤-9-基}-4-三苯甲基嗎啉-2-基}甲氧基}-4-氧代丁酸按照與參考例1相同的方法制造了標題化合物。其中，在本工序中使用N-{6-(2-氰基乙氧基)-9-[(2R,6S)-6-(羥甲基)-4-三苯甲基嗎啉-2-基]嘌呤-2-基}-2-苯氧基乙酰胺來代替參考例1的工序1中使用的N-{1-[(2R,6S)-6-(羥甲基)-4-三苯甲基嗎啉-2-基]-2-氧代-1,2-二氫嘧啶-4-基}苯甲酰胺。對于該目標產(chǎn)物的裝載量而言，通過使用公知的方法對409nm的UV吸光度進行測定來確定每1g樹脂的三苯甲基摩爾量。樹脂的裝載量為164.8μmol/g。按照以下實施例1的記載，合成了表1的PMONo.1～118所示的PMO。PMONo.119及120由GeneTools公司購入。用注射用水(株式會社大冢制藥工場制造)溶解合成的PMO。表1[實施例1]將與5’末端堿基對應(yīng)的擔載于氨基聚苯乙烯樹脂的4-{[(2S，6R)-6-(4-苯甲酰胺-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-4-三苯甲基嗎啉-2-基]甲氧基}-4-氧代丁酸(參考例1)、或擔載于氨基聚苯乙烯樹脂的4-{[(2S，6R)-6-(5-甲基-2,4-二氧代嘧啶-1-基)-4-三苯甲基嗎啉-2-基]甲氧基}-4-氧代丁酸(參考例2)、或擔載于氨基聚苯乙烯樹脂的4-{[(2S，6R)-6-(6-苯甲酰胺嘌呤-9-基)-4-三苯甲基嗎啉-2-基]甲氧基}-4-氧代丁酸(參考例3)、或擔載于氨基聚苯乙烯樹脂的4-{{(2S，6R)-6-{6-(2-氰基乙氧基)-2-[(2-苯氧乙?；?氨基]嘌呤-9-基}-4-三苯甲基嗎啉-2-基}甲氧基}-4-氧代丁酸(參考例4)0.2g填充于帶過濾器的柱中，使用核酸合成儀器(AKTAOligopilot10plus)開始下述合成循環(huán)。在各偶聯(lián)循環(huán)添加希望的嗎啉基單體化合物，使其為表1所述的各化合物的堿基序列(參考下述表2)。表2注：僅在3’末端乙酰化的情況下，在最終循環(huán)之后再次實施步驟1、2、7、8。需要說明的是，作為解封閉溶液，使用了含有3％(w/v)三氟乙酸的二氯甲烷溶液。作為中和/清洗溶液，使用在含有35％(v/v)乙腈的二氯甲烷溶液中溶解了N,N-二異丙基乙基胺10％(v/v)且溶解了四氫呋喃5％(v/v)而得到的溶液。作為偶聯(lián)溶液A，使用用四氫呋喃溶解嗎啉基單體化合物0.10M而得到的溶液。作為偶聯(lián)溶液B，使用在乙腈中溶解了N,N-二異丙基乙基胺20％(v/v)且溶解了四氫呋喃10％(v/v)而得到溶液。作為封端溶液，使用對于乙腈溶解了20％(v/v)的乙酸酐和30％(v/v)的2,6-二甲基吡啶而得到的溶液。從反應(yīng)容器中回收擔載有上述合成的PMO的氨基聚苯乙烯樹脂，在室溫下減壓干燥2小時以上。將擔載于氨基聚苯乙烯樹脂的干燥的PMO加入反應(yīng)容器，加入28％氨水-乙醇(1/4)5mL，在55℃下攪拌15小時。對氨基聚苯乙烯樹脂進行過濾，并用水-乙醇(1/4)1mL清洗。對得到的濾液進行減壓濃縮。將得到的殘渣溶解于20mM乙酸-三乙胺緩沖液(TEAA緩沖液)與乙腈的混合溶劑(4/1)10mL，用膜濾器進行過濾。用反相HPLC純化得到的濾液。使用的條件如以下表3所示。表3柱Xbridge5μmC18(Waters,φ19×50mm,1CV＝14mL)流速10mL/分柱溫室溫A液20mMTEAA緩沖液B液CH3CN梯度(B)濃度10→70％/15CVCV：柱體積對各級分進行分析，回收目標物，并進行減壓濃縮。向濃縮殘渣中加入2M的磷酸水溶液0.5mL，攪拌15分鐘。再加入2M的氫氧化鈉水溶液2mL，使其呈堿性，用膜濾器(0.45μm)進行過濾。用陰離子交換樹脂柱對含有得到的目標物的水溶液進行純化。使用的條件如下述表4所示。表4柱Source1(GEHealthcare,φ10×108mm,1CV＝8.5mL)流速8.5mL/分柱溫室溫A液10mM的氫氧化鈉水溶液B液10mM的氫氧化鈉水溶液，1M的氯化鈉水溶液梯度(B)濃度1→50％/40CV對各級分進行分析(HPLC)，以水溶液的形式得到了目標物。向得到的水溶液中添加0.1M的磷酸緩沖液(pH6.0)進行中和。接著，在下述表5所示的條件下用反相HPLC進行脫鹽。表5回收目標物并進行減壓濃縮。將得到的殘渣溶于水，進行冷凍干燥，以白色棉狀固體的形式得到了目標化合物。將ESI-TOF-MS的計算值、測定值示于下述表6。表6[試驗例1]體外測定使用AmaxaCellLineNucleofectorKitL通過NucleofectorII(Lonza)對3.5×105個RD細胞(人橫紋肌肉瘤細胞株)導入了表1的反義低聚物0.1～30μM。程序使用T-030。導入后，在含有10％胎牛血清(FCS)(Invitrogen公司制造)的Eagle最小基本培養(yǎng)基(minimalessentialmedium)(EMEM)培養(yǎng)基(Sigma-Aldrich公司制造，以下相同)2mL中、37℃、5％CO2的條件下對細胞培養(yǎng)三天。用PBS(Nissui公司制造，以下相同)清洗1次細胞，然后向細胞添加350μL含有1％的2-巰基乙醇(Nacalaitesque公司制造)的緩沖液RLT(Qiagen公司制造)，在室溫下靜置數(shù)分鐘，使細胞溶解，回收于QIAshredde勻漿器(Qiagen公司制造)中。以15,000rpm離心2分鐘，制作勻漿。按照RNeasyMiniKit(Qiagen公司制造)所附帶的方案提取總RNA。使用NanoDropND-1000(LMS公司制造)測定了提取出的總RNA的濃度。使用QIAGENOneStepRT-PCRKit(Qiagen公司制造)對提取出的總RNA400ng進行了One-StepRT-PCR。按照試劑盒所附帶的方案制備了反應(yīng)液。熱循環(huán)儀使用PTC-100(MJResearch公司制造)或TaKaRaPCRThermalCyclerDiceTouch(TakaraBio公司制造)。使用的RT-PCR程序如下所述。50℃、30分鐘：逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)95℃、15分鐘：聚合酶活性化、逆轉(zhuǎn)錄酶滅活、cDNA熱變性[94℃、30秒鐘；60℃、30秒鐘；72℃、1分鐘]×35循環(huán)：PCR擴增72℃、10分鐘：最終延長反應(yīng)RT-PCR中使用的正向引物和反向引物的堿基序列如下所述。正向引物：5’-GCTCAGGTCGGATTGACATT-3’(序列號125)反向引物：5’-GGGCAACTCTTCCACCAGTA-3’(序列號126)使用Bioanalyzer(Agilent公司制造)對上述PCR的反應(yīng)產(chǎn)物1μL進行分析。對跳讀了外顯子44的條帶的多核苷酸量“A”和未跳讀外顯子44的條帶的多核苷酸量“B”進行了測定?；谶@些“A”及“B”的測定值(單位：nmol/L)按照下述式求出了跳讀效率。跳讀效率(％)＝A/(A+B)×100實驗結(jié)果將結(jié)果示于圖1～26。通過本實驗可知，在人的野生型抗肌萎縮蛋白基因的外顯子44的核苷酸序列(序列號10)中，從5’末端起計數(shù)，由選自第-1～44號(序列號1)及第58～115號(序列號2)的短單元低聚物連接而得到的本發(fā)明的低聚物可有效地跳讀外顯子44。[試驗例2]體外測定用與試驗例1相同的方法進行了實驗。其中，使用AmaxaCellLineNucleofectorKitL通過NucleofectorII(Lonza)對3.5×105個RD細胞(人橫紋肌肉瘤細胞株)分別以1、3或10μM的濃度單獨地導入了PMONo.34、100、45、73、49、47的本發(fā)明低聚物，或者將構(gòu)成上述本發(fā)明低聚物的2個單元低聚物單獨地導入或使其混合后導入。程序使用T-030。導入的序列的組合如下所述。表7序列組合導入濃度(μM)1單獨PMONo.341μM2單獨PMONo.115、PMONo.114或其混合物各1μM3單獨PMONo.1001μM4PMONo.109、PMONo.114的混合物各1μM5單獨PMONo.451μM6單獨PMONo.111、PMONo.110或其混合物各1μM7單獨PMONo.731μM8單獨PMONo.113、PMONo.112或其混合物各1μM9單獨PMONo.491μM10單獨PMONo.117、PMONo.118或其混合物各1μM11單獨PMONo.473、10μM12PMONo.119、PMONo.120的混合物各3、10μM實驗結(jié)果將結(jié)果示于圖27～31。通過本實驗可知，以外顯子44內(nèi)作為目標的PMONo.110～115、PMONo.117及PMONo.118在各自單獨的情況下不跳讀外顯子44。另外，將以外顯子44內(nèi)不同部位作為目標的2個反義核酸的混合物(PMONo.114與PMONo.115、PMONo.109與PMONo.114、PMONo.110與PMONo.111、PMONo.112與PMONo.113、PMONo.117與PMONo.118、以及PMONo.119與PMONo.120)進行比較可知，將其分別連接而成的PMONo.34、PMONo.100、PMONo.45、PMONo.73、PMONo.49、PMONo.47的本發(fā)明低聚物高效率地跳讀外顯子44。[試驗例3]使用人成纖維細胞的體外測定使用GM05112細胞(源自外顯子45缺失的人DMD患者的成纖維細胞、CoriellInstituteforMedicalResearch)對本發(fā)明的低聚物的外顯子44跳讀活性進行了研究。增殖培養(yǎng)基使用含有10％FCS(HyCloneLaboratories)和1％青霉素/鏈霉素(P/S)(Sigma-Aldrich公司)的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基：NutrientMixtureF-12(DMEM/F-12)(LifeTechnologies公司)，在5％CO2存在下于37℃進行培養(yǎng)。細胞使用T225燒瓶進行培養(yǎng)，相對于增殖培養(yǎng)基30mL添加2.5mL表達源自人的myoD(序列號127)的逆轉(zhuǎn)錄病毒(ZsGreen1共表達)并以最終濃度8μg/mL添加聚凝胺(Sigma-Aldrich公司)。在32℃下培養(yǎng)2天后，用新鮮的增殖培養(yǎng)基進行培養(yǎng)基更換，再在37℃下培養(yǎng)3天。通過用BDFACSAriaCellSorter(BDBioscience公司)挑選ZsGreen1陽性細胞，回收了MyoD轉(zhuǎn)換成纖維細胞?；厥盏募毎麘腋∮诜只囵B(yǎng)基(含有2％馬血清(LifeTechnologies公司)、1％P/S及ITSLiquidMediaSupplement(Sigma-Aldrich公司)的DMEM/F-12)中，以9.4×104個細胞/孔接種于涂布了膠原的24孔板。每2～3天進行培養(yǎng)基更換，進行培養(yǎng)，分化誘導為肌管。在接種于24孔板起第7天更換為添加有低聚物PMONo.34、45、49及73且使其最終濃度為10μM的分化培養(yǎng)基。在2天的培養(yǎng)后，更換為不含PMO的分化培養(yǎng)基，再進行5天的培養(yǎng)?；厥占毎?，使用RNeasyMiniKit(Qiagen公司)提取總RNA。使用QIAGENOneStepRT-PCRKit對提取出的總RNA50ng進行RT-PCR。按照附帶的方案制備了反應(yīng)液。熱循環(huán)儀使用iCycler(Bio-RadLaboratories)。使用的RT-PCR的程序如下所述。50℃、30分鐘：逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)95℃、15分鐘：聚合酶活性化、逆轉(zhuǎn)錄酶的失活、cDNA熱變性[94℃、1分鐘；60℃、1分鐘；72℃、1分鐘]×35循環(huán)：PCR擴增72℃、7分鐘：最終延長反應(yīng)RT-PCR中使用的正向引物和反向引物的堿基序列如下所述。正向引物：5’-GCTCAGGTCGGATTGACATT-3’(序列號125)反向引物：5’-GGGCAACTCTTCCACCAGTA-3’(序列號126)使用ExperionDNA1KAnalysisKits(Bio-RadLaboratories)，利用ExperionElectrophoresisStation(Bio-RadLaboratories)對PCR產(chǎn)物1μL進行分析。在ExperionSoftwareversion3.2(Bio-RadLaboratories)上選擇DNA1K測定法進行測定。用ExperionSoftware對317bp附近的條帶(A)及465bp附近的條帶(B)進行了定量(單位：nmol/L)。使用Excel2007SP3(Microsoft)通過下式求出跳讀效率(％)。跳讀效率(％)＝A/(A+B)×100實驗結(jié)果將結(jié)果示于圖32。通過本實驗可知，PMONo.34、45、49及73的本發(fā)明低聚物在具有外顯子45缺失的DMD患者的細胞中高效率地跳讀外顯子44。工業(yè)實用性根據(jù)試驗例所示的實驗結(jié)果表明，連接短低聚物而得到的本發(fā)明低聚物在RD細胞中引起外顯子44跳讀。因此，本發(fā)明的低聚物在DMD的治療中非常有用。序列表<110>日本新藥株式會社國立研究開發(fā)法人國立精神·神經(jīng)醫(yī)療研究中心<120>反義核酸<130>G1076WO<150>JP2014-124157<151>2014-06-17<160>128<170>PatentInversion3.5<210>1<211>45<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>1ggcgatttgacagatctgttgagaaatggcggcgttttcattatg45<210>2<211>58<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>2taatcagtggctaacagaagctgaacagtttctcagaaagacacaaattcctgagaat58<210>3<211>17<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>3ttgagaaatggcggcgt17<210>4<211>17<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>4tcagtggctaacagaag17<210>5<211>17<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>5tctcagaaagacacaaa17<210>6<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>6gtgtctttctgagccgccatttctca26<210>7<211>22<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>7tctgttagccacgccgccattt22<210>8<211>24<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>8ctgttagccactcgccgccatttc24<210>9<211>24<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>9ttgtgtctttcttctgttagccac24<210>10<211>148<212>DNA<213>人類<400>10gcgatttgacagatctgttgagaaatggcggcgttttcattatgatataaagatatttaa60tcagtggctaacagaagctgaacagtttctcagaaagacacaaattcctgagaattggga120acatgctaaatacaaatggtatcttaag148<210>11<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>11ttgtgtctttctgtctcaacagatct26<210>12<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>12tgttagccactgatctcaacagatct26<210>13<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>13gttcagcttctgttctcaacagatct26<210>14<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>14ttgtgtctttctgcgccgccatttct26<210>15<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>15ctgagaaactgttcgccgccatttct26<210>16<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>16tctcaggaatttgcgccgccatttct26<210>17<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>17tgttagccactgacgccgccatttct26<210>18<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>18gttcagcttctgtcgccgccatttct26<210>19<211>30<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>19attctcaggaatttgaacgccgccatttct30<210>20<211>30<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>20atttgtgtctttctgtttctcaacagatct30<210>21<211>25<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>21attctcaggaatttgtttctcaaca25<210>22<211>30<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>22atttgtgtctttctgaacgccgccatttct30<210>23<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>23tctcaggaatttgtctcaacagatct26<210>24<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>24ttgtgtctttctgaacgccgccattt26<210>25<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>25ttgtgtctttctgccgccatttctca26<210>26<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>26gtgtctttctgagcgccgccatttct26<210>27<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>27ctgagaaactgtttctcaacagatct26<210>28<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>28atttgtgtctttcccgccatttctca26<210>29<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>29gtgtctttctgagaacgccgccattt26<210>30<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>30atttgtgtctttcaacgccgccattt26<210>31<211>24<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>31ttgtgtctttctcgccgccatttc24<210>32<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>32cgccgccatttctttgtgtctttctg26<210>33<211>22<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>33tgtgtctttctgccgccatttc22<210>34<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>34tgtgtctttcccgccatttc20<210>35<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>35ttagccactgattccgccatttctca26<210>36<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>36atttgtgtctttccgccgccatttct26<210>37<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>37tctgttagccactcgccgccatttct26<210>38<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>38tgttagccactgaccgccatttctca26<210>39<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>39tctgttagccactccgccatttctca26<210>40<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>40ttagccactgattcgccgccatttct26<210>41<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>41tgttagccactgaaacgccgccattt26<210>42<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>42tctgttagccactaacgccgccattt26<210>43<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>43ttagccactgattaacgccgccattt26<210>44<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>44ttgtgtctttctgtgttagccactga26<210>45<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>45tgttcagcttctgtgttagccactga26<210>46<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>46ttagccactgcgccgccatt20<210>47<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>47ctgttagccacgccgccatt20<210>48<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>48tgttcagctttagccactga20<210>49<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>49ctgttagccaccgccatttc20<210>50<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>50ttgtgtctttctggccatttctcaac26<210>51<211>25<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>51ctgttagccactgcataatgaaaac25<210>52<211>24<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>52ttctgttagccaaaaacgccgcca24<210>53<211>22<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>53ttagccactgacgccgccattt22<210>54<211>22<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>54ctgttagccacgccgccatttc22<210>55<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>55actgttcagcgccactgatt20<210>56<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>56aactgttcagctttagccactgatta26<210>57<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>57ctgagaaactgtttgttagccactga26<210>58<211>22<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>58aacgccgccatttgtgtctttc22<210>59<211>28<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>59tgtgtctttctgttagccatttctcaac28<210>60<211>24<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>60cgccgccatttcttgtgtctttct24<210>61<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>61ccgccatttctcattgtgtctttctg26<210>62<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>62ccgccatttctcatgttagccactga26<210>63<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>63ctttctgagaaactgttagccactga26<210>64<211>25<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>64gccactgacctctcagcttctgtta25<210>65<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>65aacgccgccatttatttgtgtctttc26<210>66<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>66aaacgccgccatttgtgtctttctga26<210>67<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>67ctttctgttagccactgaac20<210>68<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>68cgccgccatttcttttctgagaaact26<210>69<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>69aacgccgccatttctgagaaactgtt26<210>70<211>24<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>70cccagcttctgttagccactgacc24<210>71<211>24<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>71cttgcttctgttagccactgaccc24<210>72<211>21<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>72cgccgccatttctgagaaact21<210>73<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>73ccgccatttctcagtgtctttctgag26<210>74<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>74tgttagccactgattgtgtctttctg26<210>75<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>75atttgtgtctttctgttagccactga26<210>76<211>22<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>76gtctttctgagcgccatttctc22<210>77<211>22<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>77ttgtgtctttcctgttagccac22<210>78<211>24<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>78tgtctttctgagccgccatttctc24<210>79<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>79aaactgttcagcttctgtcaaatcgc26<210>80<211>26<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>80acgccgccatttctcaggaatttgtg26<210>81<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>81ctgttcagctccactgatta20<210>82<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>82actgttcagcccactgatta20<210>83<211>22<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>83tgtgtctttctcgccgccattt22<210>84<211>22<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>84tgtctttctgacgccatttctc22<210>85<211>24<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>85cgccgccatttctttgtgtctttc24<210>86<211>22<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>86cgccgccatttttgtgtctttc22<210>87<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>87ctgttcagcttgttagccac20<210>88<211>21<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>88ttctgagaaactgttagccac21<210>89<211>18<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>89ctgttcagccactgatta18<210>90<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>90ctgagaaacttgttagccac20<210>91<211>22<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>91tgtctttctgaccgccatttct22<210>92<211>22<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>92ctttctgagaacgccatttctc22<210>93<211>19<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>93ctttctgagaaacgccgcc19<210>94<211>23<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>94tgtctttctgttagccatttctc23<210>95<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>95ctttctgttagccatttctc20<210>96<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>96ctttctgagagccatttctc20<210>97<211>22<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>97ctgttagccactccgccatttc22<210>98<211>21<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>98ctgtgtctttctgttagccac21<210>99<211>21<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>99ctgttcagcgccactgattac21<210>100<211>24<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>100ctttctgagaaacgccgccatttc24<210>101<211>25<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>101tgtctttctgagccgccatttctca25<210>102<211>21<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>102ctttctgagaaccgccatttc21<210>103<211>24<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>103tgttagccactgtgtcaaatcgcc24<210>104<211>24<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>104tgtctttctgagtgtcaaatcgcc24<210>105<211>24<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>105ccgccatttctctgtcaaatcgcc24<210>106<211>25<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>106gtgtctttctgagccgccatttctc25<210>107<211>25<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>107gtgtctttctgaccgccatttctca25<210>108<211>24<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>108gtgtctttctgaccgccatttctc24<210>109<211>21<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>109ttcagcttctgtcaaatcgcc21<210>110<211>22<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>110tgttagccactgtcaaatcgcc22<210>111<211>22<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>111tgtctttctgagtcaaatcgcc22<210>112<211>22<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>112cgccatttctcgtcaaatcgcc22<210>113<211>23<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>113gtgtctttctgccgccatttctc23<210>114<211>12<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>114ccgccatttctc12<210>115<211>11<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>115tctgttagcca11<210>116<211>11<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>116cgccgccattt11<210>117<211>12<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>117ttgtgtctttct12<210>118<211>12<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>118tctgttagccac12<210>119<211>13<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>119gtgtctttctgag13<210>120<211>13<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>120ccgccatttctca13<210>121<211>12<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>121ctgttagccact12<210>122<211>12<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>122cgccgccatttc12<210>123<211>10<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>123gccactgatt10<210>124<211>10<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>124actgttcagc10<210>125<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>125gctcaggtcggattgacatt20<210>126<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>合成核酸<400>126gggcaactcttccaccagta20<210>127<211>963<212>DNA<213>人類<220><221>CDS<222>(1)..(963)<400>127atggagctactgtcgccaccgctccgcgacgtagacctgacggccccc48MetGluLeuLeuSerProProLeuArgAspValAspLeuThrAlaPro151015gacggctctctctgctcctttgccacaacggacgacttctatgacgac96AspGlySerLeuCysSerPheAlaThrThrAspAspPheTyrAspAsp202530ccgtgtttcgactccccggacctgcgcttcttcgaagacctggacccg144ProCysPheAspSerProAspLeuArgPhePheGluAspLeuAspPro354045cgcctgatgcacgtgggcgcgctcctgaaacccgaagagcactcgcac192ArgLeuMetHisValGlyAlaLeuLeuLysProGluGluHisSerHis505560ttccccgcggcggtgcacccggccccgggcgcacgtgaggacgagcat240PheProAlaAlaValHisProAlaProGlyAlaArgGluAspGluHis65707580gtgcgcgcgcccagcgggcaccaccaggcgggccgctgcctactgtgg288ValArgAlaProSerGlyHisHisGlnAlaGlyArgCysLeuLeuTrp859095gcctgcaaggcgtgcaagcgcaagaccaccaacgccgaccgccgcaag336AlaCysLysAlaCysLysArgLysThrThrAsnAlaAspArgArgLys100105110gccgccaccatgcgcgagcggcgccgcctgagcaaagtaaatgaggcc384AlaAlaThrMetArgGluArgArgArgLeuSerLysValAsnGluAla115120125tttgagacactcaagcgctgcacgtcgagcaatccaaaccagcggttg432PheGluThrLeuLysArgCysThrSerSerAsnProAsnGlnArgLeu130135140cccaaggtggagatcctgcgcaacgccatccgctatatcgagggcctg480ProLysValGluIleLeuArgAsnAlaIleArgTyrIleGluGlyLeu145150155160caggctctgctgcgcgaccaggacgccgcgccccctggcgccgcagcc528GlnAlaLeuLeuArgAspGlnAspAlaAlaProProGlyAlaAlaAla165170175gccttctatgcgccgggcccgctgcccccgggccgcggcggcgagcac576AlaPheTyrAlaProGlyProLeuProProGlyArgGlyGlyGluHis180185190tacagcggcgactccgacgcgtccagcccgcgctccaactgctccgac624TyrSerGlyAspSerAspAlaSerSerProArgSerAsnCysSerAsp195200205ggcatgatggactacagcggccccccgagcggcgcccggcggcggaac672GlyMetMetAspTyrSerGlyProProSerGlyAlaArgArgArgAsn210215220tgctacgaaggcgcctactacaacgaggcgcccagcgaacccaggccc720CysTyrGluGlyAlaTyrTyrAsnGluAlaProSerGluProArgPro225230235240gggaagagtgcggcggtgtcgagcctagactgcctgtccagcatcgtg768GlyLysSerAlaAlaValSerSerLeuAspCysLeuSerSerIleVal245250255gagcgcatctccaccgagagccctgcggcgcccgccctcctgctggcg816GluArgIleSerThrGluSerProAlaAlaProAlaLeuLeuLeuAla260265270gacgtgccttctgagtcgcctccgcgcaggcaagaggctgccgccccc864AspValProSerGluSerProProArgArgGlnGluAlaAlaAlaPro275280285agcgagggagagagcagcggcgaccccacccagtcaccggacgccgcc912SerGluGlyGluSerSerGlyAspProThrGlnSerProAspAlaAla290295300ccgcagtgccctgcgggtgcgaaccccaacccgatataccaggtgctc960ProGlnCysProAlaGlyAlaAsnProAsnProIleTyrGlnValLeu305310315320tga963<210>128<211>320<212>PRT<213>人類<400>128MetGluLeuLeuSerProProLeuArgAspValAspLeuThrAlaPro151015AspGlySerLeuCysSerPheAlaThrThrAspAspPheTyrAspAsp202530ProCysPheAspSerProAspLeuArgPhePheGluAspLeuAspPro354045ArgLeuMetHisValGlyAlaLeuLeuLysProGluGluHisSerHis505560PheProAlaAlaValHisProAlaProGlyAlaArgGluAspGluHis65707580ValArgAlaProSerGlyHisHisGlnAlaGlyArgCysLeuLeuTrp859095AlaCysLysAlaCysLysArgLysThrThrAsnAlaAspArgArgLys100105110AlaAlaThrMetArgGluArgArgArgLeuSerLysValAsnGluAla115120125PheGluThrLeuLysArgCysThrSerSerAsnProAsnGlnArgLeu130135140ProLysValGluIleLeuArgAsnAlaIleArgTyrIleGluGlyLeu145150155160GlnAlaLeuLeuArgAspGlnAspAlaAlaProProGlyAlaAlaAla165170175AlaPheTyrAlaProGlyProLeuProProGlyArgGlyGlyGluHis180185190TyrSerGlyAspSerAspAlaSerSerProArgSerAsnCysSerAsp195200205GlyMetMetAspTyrSerGlyProProSerGlyAlaArgArgArgAsn210215220CysTyrGluGlyAlaTyrTyrAsnGluAlaProSerGluProArgPro225230235240GlyLysSerAlaAlaValSerSerLeuAspCysLeuSerSerIleVal245250255GluArgIleSerThrGluSerProAlaAlaProAlaLeuLeuLeuAla260265270AspValProSerGluSerProProArgArgGlnGluAlaAlaAlaPro275280285SerGluGlyGluSerSerGlyAspProThrGlnSerProAspAlaAla290295300ProGlnCysProAlaGlyAlaAsnProAsnProIleTyrGlnValLeu305310315320當前第1頁1 2 3