本發(fā)屬于天然植物成分提取領(lǐng)域，尤其涉及一種用曼地亞紅豆杉高產(chǎn)10-DABⅢ的方法。

背景技術(shù)：

曼地亞紅豆杉(Taxus X media)是一種天然雜交品種，其母本為日本紅豆杉(T.cuspidata)，父本為歐洲紅豆杉(T.baccata)，是國內(nèi)紅豆杉的7-8倍的生長量。

紫杉烷類化合物是提取于高等裸子植物紅豆杉的樹皮、根和葉等部位的一類化合物，主要含有紫杉醇、三尖杉寧堿、10-DABⅢ(即10-去乙酰基巴卡?、?、7-木糖基紫杉醇等，有許多已被證明具有細(xì)胞毒性和抗腫瘤活性，而用來提取紫杉醇等的天然紅豆杉資源有限，因而天然紫杉醇原料藥的生產(chǎn)和供應(yīng)受到限制，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足紫杉醇臨床的應(yīng)用。

10-DABⅢ是合成紫杉醇、多西他賽、卡巴他賽的原料，故其屬于抗腫瘤藥物研發(fā)中十分重要的成分。凡是含有10-DABⅢ結(jié)構(gòu)的物質(zhì)都可以水解制備成10-去乙?；涂ǘ、?，如三尖杉寧堿、紫杉醇C、紫杉醇D、巴卡亭Ⅲ、7-木糖基紫杉醇、10-去乙?；仙即肌?0-去乙?；馍紝帀A、7-木糖基-10-去乙酰基紫杉醇、7-木糖基-10-去乙酰基三尖杉寧堿等，這些物質(zhì)都可以水解制成10-去乙酰基巴卡?、?。

現(xiàn)有制備10-DABⅢ的方法存在提取率不高且溶劑用量大且操作步驟復(fù)雜等缺陷，不利于對(duì)其進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。例如授權(quán)公告號(hào)為CN101798294B的“一種抗腫瘤藥物中間體10-去乙?；涂ㄍあ蟮闹苽浞椒ā睂＠_的提取紫杉烷類有效成分的方法是：先將三尖杉寧堿的醇溶液與水合肼接觸，將其轉(zhuǎn)化成10-DABⅢ，將產(chǎn)物用硅膠柱層析分離，以石油醚-丙酮(3∶1)為洗脫劑，得到10-DABⅢ主段，再將該主段進(jìn)行二次重結(jié)晶，得到高純度的10-DABⅢ。該方法的主要缺點(diǎn)是：①所用原料單一，為三尖杉寧堿；②10-去乙?；涂ㄍあ蟮募兓に嚥捎昧酥鶎游龅姆绞剑軇┯昧看?。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了提供一種制備工藝、生產(chǎn)設(shè)備及操作步驟簡單，10-DABⅢ產(chǎn)率高、實(shí)用性強(qiáng)的用曼地亞紅豆杉高產(chǎn)10-DABⅢ的方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種用曼地亞紅豆杉高產(chǎn)10-DABⅢ的方法包括步驟：

A.溶液提取：采用甲醇或乙醇水溶液對(duì)曼地亞紅豆杉進(jìn)行攪拌提取2-8h得提取液，提取液減壓濃縮得到浸膏；

B.溶解酸化：在所得浸膏中加入有機(jī)溶劑進(jìn)行攪拌溶解得到溶解液，向溶解液中加入酸，在0-40℃下攪拌酸化1-24h，得酸化溶液；

C.水解：向酸化溶液中加入堿中和至中性后，再向溶液中加入水合肼，在0-60℃下攪拌水解2-72h后，加入終止反應(yīng)劑至溶液呈中性即得水解液；

D.純化：將水解液減壓濃縮至粘稠狀，萃取后對(duì)有機(jī)相濃縮再經(jīng)重結(jié)晶提純得產(chǎn)品。

進(jìn)一步的，所述步驟A中所用的甲醇或乙醇水溶液的體積/mL為紅豆杉質(zhì)量/g的5-30倍。也就是說1g曼地亞紅豆杉所使用的甲醇或乙醇水溶液的體積為5-30mL。

進(jìn)一步優(yōu)選的，甲醇或乙醇水溶液的體積/mL為紅豆杉質(zhì)量/g的5-20倍。

進(jìn)一步的，所述步驟B中甲醇或乙醇水溶液的體積分?jǐn)?shù)為40-99.5％。

進(jìn)一步的，所述步驟B中用于中和水解液的酸為甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸的一種或多種混合。

進(jìn)一步的，所述步驟B中所述酸的重量為浸膏重量的0.1-1倍，所述水合肼的重量為浸膏重量的1-5倍。

進(jìn)一步的，所述步驟B中所述有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇、四氫呋喃、二氯甲烷、乙酸乙酯的一種或多種混合，所述有機(jī)溶劑的體積用量/mL為浸膏重量/g的5-20倍。也即1g浸膏需要用5-20mL的有機(jī)溶劑來溶解。

進(jìn)一步的，所述步驟C中所述終止反應(yīng)劑為含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5-20％氫氧化鈉/氫氧化鉀和5-20％氯化銨/硫酸銨/碳酸銨/硝酸銨的水溶液。也就是說終止反應(yīng)劑為含有兩種物質(zhì)的水溶液，一種物質(zhì)為氫氧化鈉或氫氧化鉀，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5-20％，另一種物質(zhì)為氯化銨、硫酸銨、碳酸銨、硝酸銨中的一種，期智聯(lián)股份數(shù)為5-20％。

進(jìn)一步的，所述步驟C中所述堿為氫氧化鈉和/或氫氧化鉀。

進(jìn)一步的，所述步驟D中所述萃取步驟為：加入萃取劑進(jìn)行1-4h萃取，然后加入水分層，取有機(jī)層減壓濃縮回收萃取劑后得10-DABⅢ粗品，10-DABⅢ粗品進(jìn)行重結(jié)晶提純；所述萃取劑的體積/mL為浸膏重量/g的10-30倍，水的體積/mL為浸膏重量/g的10-30倍。

進(jìn)一步的，所述步驟D中所述萃取劑為乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷的一種或多種混合。

采用本發(fā)明提供的方法制備10-DABⅢ具有如下有益效果：

1.本發(fā)明方法以曼地亞紅豆杉為原料，采用先提取獲得浸膏、再酸化和水解浸膏溶液從而獲得10-DABⅢ，10-DABⅢ粗品收率高達(dá)0.065％～0.163％，10-DABⅢ粗品中10-DABⅢ含量高達(dá)5.5％～8.6％。

2.本發(fā)明方法充分利用了紅豆杉資源中含有10-DABⅢ結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，使其變廢為寶。

3.本發(fā)明方法所用生產(chǎn)設(shè)備為常規(guī)設(shè)備，所用溶劑為常規(guī)溶劑，生產(chǎn)條件易實(shí)施，操作方便適合工業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明可廣泛應(yīng)用于從紅豆杉中獲得10-去乙酰基巴卡?、蟮姆椒ǎ捎帽景l(fā)明方法生產(chǎn)的10-去乙?；涂ǘ、罂捎糜谧仙即肌⒍辔魉惖暮铣稍?，應(yīng)用于醫(yī)藥領(lǐng)用中。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明。所述實(shí)施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

實(shí)施例一

采用體積分?jǐn)?shù)為40％、體積/mL為曼地亞紅豆杉質(zhì)量/g的5倍的甲醇水溶液對(duì)曼地亞紅豆杉進(jìn)行攪拌提取2小時(shí)，過濾獲得提取液，對(duì)提取液減壓濃縮后得到浸膏，向浸膏中加入體積/mL為浸膏重量/g 5倍的甲醇進(jìn)行攪拌溶解得到溶解液，向溶解液中加入浸膏重量的0.1倍甲酸，在0℃下攪拌酸化1小時(shí)，得到酸化后的溶液，向酸化后的溶液中加入氫氧化鈉中和至中性后加入浸膏重量的1倍的水合肼，在0℃下攪拌水解2小時(shí)，得到水解后的溶液，向水解后的溶液中加入含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％氫氧化鈉和5％氯化銨水溶液至pH為中性，然后減壓濃縮至濃縮液為粘稠狀，加入體積/mL為浸膏重量/g 10倍的乙酸乙酯作為萃取劑進(jìn)行攪拌萃取1小時(shí)，再加入體積/mL為浸膏重量/g 10倍的水進(jìn)行攪拌處理后分層，取出有機(jī)層，減壓濃縮回收萃取劑后得到10-DABⅢ粗品，10-DABⅢ粗品收率為0.065％，10-DABⅢ粗品中10-DABⅢ含量為達(dá)5.5％，對(duì)10-DABⅢ粗品采用常規(guī)的重結(jié)晶方法進(jìn)行處理后即可獲得含量為98％以上的10-DABⅢ產(chǎn)品。

實(shí)施例二

采用體積分?jǐn)?shù)為99.5％、體積/mL為曼地亞紅豆杉質(zhì)量/g的30倍的乙醇溶液對(duì)曼地亞紅豆杉進(jìn)行攪拌提取8小時(shí)，過濾獲得提取液，對(duì)提取液減壓濃縮后得到浸膏，向浸膏中加入體積/mL為浸膏重量/g 20倍的乙酸乙酯進(jìn)行攪拌溶解得到溶解液，向溶解液中加入浸膏重量1倍的三氟乙酸，在40℃下攪拌酸化24小時(shí)，得到酸化后的溶液，向酸化后的溶液中加入氫氧化鈉中和至中性后加入浸膏重量5倍的水合肼，在60℃下攪拌水解72小時(shí)，得到水解后的溶液，向水解后的溶液中加入含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20％氫氧化鉀和20％硝酸銨的水溶液至pH為中性，然后減壓濃縮至濃縮液為粘稠狀，加入體積/mL為浸膏重量/g 30倍的三氯甲烷作為萃取劑攪拌萃取4小時(shí)，再加入體積/mL為浸膏重量/g 30倍的水進(jìn)行攪拌處理后分層，取出有機(jī)層，減壓濃縮回收萃取劑后得到10-DABⅢ粗品，10-DABⅢ粗品收率為0.163％，10-DABⅢ粗品中10-DABⅢ含量為8.6％，對(duì)10-DABⅢ粗品采用常規(guī)的重結(jié)晶方法進(jìn)行處理后即可獲得含量為98％以上的10-DABⅢ產(chǎn)品。

實(shí)施例三

采用體積分?jǐn)?shù)為80％、體積/mL為曼地亞紅豆杉質(zhì)量/g的20倍的甲醇溶液對(duì)曼地亞紅豆杉進(jìn)行攪拌提取4小時(shí)，過濾獲得提取液，對(duì)提取液減壓濃縮后得到浸膏，向浸膏中加入浸膏重量12倍的四氫呋喃進(jìn)行攪拌溶解得到溶解液，向溶解液中加入浸膏重量0.5倍的乙酸，在20℃下攪拌酸化12小時(shí)，得到酸化后的溶液，向酸化后的溶液中加入氫氧化鈉中和至中性后加入浸膏重量3倍的水合肼，在40℃下攪拌水解30小時(shí)，得到水解后的溶液，向水解后的溶液中加入含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％氫氧化鈉和10％硫酸銨的水溶液至pH為中性，然后減壓濃縮至濃縮液為粘稠狀，加入體積/mL為浸膏重量/g 20倍的二氯甲烷作為萃取劑攪拌萃取2小時(shí)，再加入體積/mL為浸膏重量/g 20倍的水進(jìn)行攪拌處理后分層，取出有機(jī)層，減壓濃縮回收萃取劑后得到10-DABⅢ粗品，10-DABⅢ粗品收率為0.138％，10-DABⅢ粗品中10-DABⅢ含量為7.9％，對(duì)10-DABⅢ粗品采用常規(guī)的重結(jié)晶方法進(jìn)行處理后即可獲得含量為98％以上的10-DABⅢ產(chǎn)品。