本公開涉及衍生自膜聯(lián)蛋白a1的多肽和多肽類似物以及包含所述多肽或多肽類似物的組合物，用于治療炎性和缺血性病況。

背景技術：

0、發(fā)明背景

1、膜聯(lián)蛋白超家族由13種具有顯著生物學和結構同源性的鈣磷脂結合蛋白組成。膜聯(lián)蛋白在結構上分為高度保守的核心結構域和可變的n-末端結構域。膜聯(lián)蛋白a1(anxa1，37kda–seq?id?no:1)是一種抑制血源性多形核白細胞(pmn)向周圍組織外滲的抗炎蛋白。所述蛋白與n-甲酰肽受體(fpr)2或fpr-l1受體結合，并由此啟動一系列信號傳導事件。在炎性刺激后，血源性多形核白細胞(pmn)遷移到周圍組織中。pmn的遷移或外滲受介體如粘附分子、細胞因子和蛋白酶的調(diào)節(jié)，這些介體控制促炎和抗炎過程。pmn的破壞性潛力很高，并且可能會損害自身。因此，控制pmn外滲和炎性應答很重要。

2、對于作為抗炎劑的治療目的，完整的膜聯(lián)蛋白a1蛋白相對于其功能片段或修飾形式具有許多缺點。所述蛋白的大尺寸使其更難通過可用于較小多肽的技術進行遞送(例如透皮或透粘膜)。對于用于治療眼部炎癥，預期較小的分子能夠更好地穿透角膜上皮。此外，對蛋白水解降解的敏感性是對于所有肽藥物來說特別關注的問題，尤其是大的肽，并且尤其是在考慮(許多患者優(yōu)選的)口服遞送的情況下。

3、一些在多肽n-末端側(cè)缺乏重要區(qū)域的膜聯(lián)蛋白a1衍生物已被證明在一些炎性和介體釋放測定中缺乏顯著活性，而全長的n-末端n-乙酰基膜聯(lián)蛋白a1(2-26)在多種系統(tǒng)下都被認為具有生物活性。許多主要衍生自膜聯(lián)蛋白a1蛋白的獨特n-末端部分的肽已被證明具有抗炎特性。研究最廣泛的膜聯(lián)蛋白a1肽之一是肽ac2-26，它模擬54個氨基酸的n-末端區(qū)域的第2至第26個氨基酸。與ac?1-188片段(和天然蛋白)一樣，它具有n-末端乙?；栽黾悠浞€(wěn)定性，并可能增加其半衰期。已經(jīng)表明，膜聯(lián)蛋白a1及其n-末端肽(ac2-26)通過fpr2/脂氧素a4(fpr2/alx)受體而發(fā)揮其大部分抗炎作用。在體內(nèi)，已表明ac2-26肽在心肌缺血再灌注(i/r)、腸系膜i/r、糖原腹膜炎和il1氣囊模型中發(fā)揮抗炎作用，據(jù)報道可顯著減少中性粒細胞向損傷/炎性部位的募集。這種肽的抗炎特性并不局限于急性炎癥模型。在關節(jié)炎模型中，關節(jié)內(nèi)施用ac2-26肽顯示可通過減少中性粒細胞募集來減輕疾病嚴重程度。

4、ac2-26肽的較短版本，如肽ac2-12和ac2-6，也已顯示在急性炎性模型中發(fā)揮一定程度的抗炎作用。已經(jīng)公開了具有抗炎作用的較長多肽，例如對應于氨基酸殘基2-48和11-48的多肽(wo?2012/174397)。許多實驗室開展的工作表明，衍生自完全獨立于膜聯(lián)蛋白a1蛋白n-末端的區(qū)域的肽，更具體地說是氨基酸247-253(位于蛋白核心區(qū)域的第三重復中，稱為抗炎素-2(af2))，也具有抗炎特性。

技術實現(xiàn)思路

0、發(fā)明概述

1、本公開涉及膜聯(lián)蛋白a1多肽類似物、包含膜聯(lián)蛋白a1多肽和分支氨基酸探針(bap)的綴合物、以及包含膜聯(lián)蛋白a1多肽類似物或其綴合物的組合物，用于治療缺血性和/或炎性病況。

2、本公開的一個方面涉及至少包含序列amvseflkqawfieneeqeyvqtvks(seq?id?no:2)的多肽或多肽類似物，或其功能變體，其中所述多肽由選自seq?id?no:2至seq?id?no:24的多肽或其功能變體組成。

3、本公開的另一個方面涉及包含所述多肽或多肽類似物和一個或多個分支氨基酸探針的多肽綴合物。

4、本公開的另一個方面涉及包含所述多肽或多肽類似物的藥物組合物。

5、本公開的另一方面涉及多肽或多肽類似物用于治療缺血性病況和/或炎性病況。

技術特征：

1.一種多肽或多肽類似物，至少包含序列amvseflkqawfieneeqeyvqtvks(seq?id?no:2)或其功能變體，其中所述多肽由選自下列的多肽或其功能變體組成：

2.根據(jù)權利要求1所述的多肽或多肽類似物，其中所述功能變體與seq?id?no:2至seqid?no:24中的任一個具有至少75％序列同一性，例如與seq?id?no:2至seq?id?no:24中的任一個具有至少80％序列同一性，例如至少85％序列同一性，例如至少90％序列同一性，例如至少95％序列同一性。

3.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中所述功能變體是選自seq?id?no:2至seq?id?no:24中任一個且具有一個或多個氨基酸取代的多肽，例如一個氨基酸取代、兩個氨基酸取代、三個氨基酸取代、四個氨基酸取代或五個氨基酸取代。

4.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中所述功能變體是選自seq?id?no：2至seq?id?no：24中任一個且具有一個氨基酸取代的多肽。

5.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中所述功能變體是選自seq?id?no：2至seq?id?no：24中任一個且具有兩個氨基酸取代的多肽。

6.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中所述功能變體是選自seq?id?no：2至seq?id?no：24中任一個且具有三個氨基酸取代的多肽。

7.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中所述功能變體是選自seq?id?no：2至seq?id?no：24中任一個且具有四個氨基酸取代的多肽。

8.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中所述一個或多個氨基酸取代是保守氨基酸取代。

9.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中seq?id?no:2至seq?idno:24中任一個的位置10處的丙氨酸殘基被任意其他標準或非標準氨基酸取代；例如被獨立地選自亮氨酸、天冬氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸、異亮氨酸和精氨酸的氨基酸殘基取代。

10.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中seq?id?no:2至seq?idno:24中任一個的位置21處的纈氨酸殘基被任意其他標準或非標準氨基酸取代；例如被獨立地選自亮氨酸、天冬氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸、異亮氨酸和賴氨酸的氨基酸殘基取代。

11.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中seq?id?no:2至seq?idno:24中任一個的位置24處的纈氨酸殘基被任意其他標準或非標準氨基酸取代；例如被獨立地選自亮氨酸、天冬氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸、異亮氨酸、精氨酸和賴氨酸的氨基酸殘基取代。

12.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中seq?id?no:2至seq?idno:24中任一個的位置24處的纈氨酸殘基被獨立地選自亮氨酸、天冬氨酸和甲硫氨酸的氨基酸殘基取代。

13.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中seq?id?no:2至seq?idno:24中任一個的位置24處的纈氨酸殘基被亮氨酸取代。

14.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中seq?id?no:2至seq?idno:24中任一個的位置35處的纈氨酸殘基被任意其它標準或非標準氨基酸取代；例如被獨立地選自甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、組氨酸、賴氨酸和精氨酸的氨基酸殘基取代；例如被賴氨酸取代。

15.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中seq?id?no:23至seqid?no:24中任一個的位置50處的亮氨酸殘基被任意其它標準或非標準氨基酸取代，例如被獨立地選自甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、組氨酸、賴氨酸和精氨酸的氨基酸殘基取代。

16.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，選自以下：

17.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，選自以下：

18.根據(jù)權利要求17所述的多肽或多肽類似物，其中所述功能變體是選自seq?id?no：48至seq?id?no：70中任一個且具有一個或多個氨基酸取代，例如具有1、2、3、4或5個氨基酸取代的多肽。

19.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，選自以下：

20.根據(jù)權利要求19所述的多肽或多肽類似物，其中所述功能變體是選自seq?id?no：50至seq?id?no：60中任一個且具有一個或多個氨基酸取代，例如具有1、2、3、4或5個氨基酸取代的多肽。

21.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，選自以下：

22.根據(jù)權利要求21所述的多肽或多肽類似物，其中所述功能變體是選自seq?id?no：50、seq?id?no：55和seq?id?no：60中任一個且具有一個或多個氨基酸取代，例如具有1、2、3、4或5個氨基酸取代的多肽。

23.根據(jù)權利要求17-22中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中所述功能變體是選自seq?id?no:48至seq?id?no:70中任一個且具有一個氨基酸取代的多肽，例如選自seq?idno:50至seq?id?no:60中任一個且具有一個氨基酸取代的多肽，例如選自seq?id?no:50、seq?id?no:55和seq?id?no:60中任一個且具有一個氨基酸取代的多肽。

24.根據(jù)權利要求17-22中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中所述功能變體是選自seq?id?no:48至seq?id?no:70中任一個且具有兩個氨基酸取代的多肽，例如選自seq?idno:50至seq?id?no:60中任一個且具有兩個氨基酸取代的多肽，例如選自seq?id?no:50、seq?id?no:55和seq?id?no:60中任一個且具有兩個氨基酸取代的多肽。

25.根據(jù)權利要求17-22中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中所述功能變體是選自seq?id?no:48至seq?id?no:70中任一個且具有三個氨基酸取代的多肽，例如選自seq?idno:50至seq?id?no:60中任一個且具有三個氨基酸取代的多肽，例如選自seq?id?no:50、seq?id?no:55和seq?id?no:60中任一個且具有三個氨基酸取代的多肽。

26.根據(jù)權利要求17-22中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中所述功能變體是選自seq?id?no:48至seq?id?no:70中任一個且具有四個氨基酸取代的多肽，例如選自seq?idno:50至seq?id?no:60中任一個且具有四個氨基酸取代的多肽，例如選自seq?id?no:50、seq?id?no:55和seq?id?no:60中任一個且具有四個氨基酸取代的多肽。

27.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中所述一個或多個氨基酸取代是保守氨基酸取代。

28.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中所述多肽或多肽類似物被乙酰化。

29.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中n端氨基酸殘基被乙酰化(coch3或ac-)。

30.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中c端氨基酸殘基被酰胺化(-nh2)。

31.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中所述多肽或其功能變體

32.一種多肽綴合物，其包含前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物以及一個或多個分支氨基酸探針，其中所述分支氨基酸探針包含第一氨基烷基氨基酸殘基，

33.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽綴合物，其中所述氨基烷基氨基酸殘基單獨地選自賴氨酸和鳥氨酸。

34.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽綴合物，其中所述多肽或多肽類似物的n端氨基酸殘基在α氨基處被乙?；?/p>

35.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽綴合物，其中與所述側(cè)鏈氨基共價連接的分子獨立地選自以下：lysq-lys、(aa3)p-lysq、lysq-(aa3)p、[(aa3)-lys]p、[lys-(aa3)]p、ornq-orn、(aa3)p-ornq、ornq-(aa3)p、[(aa3)-orn]p和[orn-(aa3)]p、ornp-lysp、lysp-ornp、[orn-lys]p和[lys-orn]p，其中q是選自0、1、2和3的數(shù)字，p是選自1、2和3的數(shù)字，(aa3)是獨立地選自arg、his、gly和ala的氨基酸殘基，并且n端lys、orn或(aa)3氨基酸殘基任選地在α氨基處被乙酰化。

36.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽綴合物，其中與所述側(cè)鏈氨基共價連接的分子獨立地選自lysq-lys、ornq-orn、ornp-lysp、lysp-ornp、[orn-lys]p和[lys-orn]p，其中q是選自0、1、2和3的數(shù)字，p是選自1、2和3的數(shù)字，并且n端lys或orn氨基酸殘基任選地在α氨基處被乙?；?/p>

37.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽綴合物，其中所述氨基烷基氨基酸殘基是賴氨酸殘基。

38.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽綴合物，其中與所述側(cè)鏈氨基共價連接的分子獨立地選自lysq-lys、(aa3)p-lysq、lysq-(aa3)p、[(aa3)-lys]p和[lys-(aa3)]p，并且n端lys或(aa)3殘基任選地在α氨基處被乙?；?。

39.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物，其中與所述側(cè)鏈氨基共價連接的分子是lysq-lys，其中q是選自0、1、2和3的數(shù)字，并且n端lys殘基任選地在α氨基處被乙?；?。

40.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽綴合物，其中所述分支氨基酸探針由2個氨基酸殘基、3個氨基酸殘基、4個氨基酸殘基、5個氨基酸殘基或6個氨基酸殘基組成。

41.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽綴合物，其中所述分支氨基酸探針由3個氨基酸殘基組成。

42.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽綴合物，其中與所述側(cè)鏈氨基共價連接的分子獨立地選自以下：lys、ac-lys、lys-lys、ac-lys-lys、lys-lys-lys、ac-lys-lys-lys、lys-lys-lys-lys、ac-lys-lys-lys-lys、lys-gly-lys、ac-lys-gly-lys、lys-lys-gly、ac-lys-lys-gly、lys-gly、ac-lys-gly、lys-ala-lys、ac-lys-ala-lys、lys-lys-ala、ac-lys-lys-ala、lys-ala、ac-lys-ala、lys-his-lys、ac-lys-his-lys、lys-lys-his、ac-lys-lys-his、lys-his、ac-lys-his、lys-arg-lys、ac-lys-arg-lys、lys-lys-arg、ac-lys-lys-arg、lys-arg和ac-lys-arg。

43.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽綴合物，其中所述分支氨基酸探針選自以下：

44.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽綴合物，其中所述分支氨基酸探針選自ac-(ac-lys)lys-、ac-(lys)lys-、(ac-lys)lys-nh2、(lys)lys-nh2和(lys)lys-。

45.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽綴合物，其中所述第一氨基烷基氨基酸殘基與所述多肽或多肽類似物的n端共價連接。

46.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽綴合物，其中所述第一氨基烷基氨基酸殘基與所述多肽或多肽類似物內(nèi)的賴氨酸或鳥氨酸殘基的側(cè)鏈氨基共價連接。

47.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽綴合物，其中所述第一氨基烷基氨基酸殘基與所述多肽或多肽類似物的c端共價連接。

48.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽綴合物，其包含1個分支氨基酸探針。

49.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽綴合物，其包含2個分支氨基酸探針。

50.一種藥物組合物，其包含前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物或多肽綴合物。

51.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物或多肽綴合物，用作藥物。

52.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的多肽或多肽類似物或多肽綴合物，用于治療缺血性病況和/或炎性病況。

53.根據(jù)前述權利要求中任一項所述用途的多肽或多肽類似物或多肽綴合物，其中所述治療是預防性的、改善性的或治愈性的。

54.根據(jù)前述權利要求中任一項所述用途的多肽或多肽類似物或多肽綴合物，其中所述病況是急性、亞急性或慢性的。

55.根據(jù)前述權利要求中任一項所述用途的多肽或多肽類似物或多肽綴合物，其中所述缺血性和/或炎性病況在哺乳動物例如人的一個或多個器官的組織中。

56.根據(jù)前述權利要求中任一項所述用途的多肽或多肽類似物或多肽綴合物，其中所述器官選自腎、肝、腦、心臟、肌肉、骨髓、皮膚、骨骼、肺、呼吸道、脾、外分泌腺、膀胱、內(nèi)分泌腺、生殖器官包括陰莖管、眼睛、耳朵、血管系統(tǒng)、胃腸道包括小腸、結腸、直腸、肛管和前列腺。

57.根據(jù)前述權利要求中任一項所述用途的多肽或多肽類似物或多肽綴合物，其中所述缺血性病況是繼發(fā)性缺血。

58.根據(jù)前述權利要求中任一項所述用途的多肽或多肽類似物或多肽綴合物，其中所述缺血是由于卒中、損傷、膿毒性休克、全身性低血壓、心臟病發(fā)作導致的心臟驟停、心律失常、動脈粥樣硬化疾病伴隨血栓形成、心臟或任意器官血管的栓塞、血管痙攣、主動脈瘤或其他器官的動脈瘤、冠狀動脈狹窄、心肌梗塞、心絞痛、心包炎、心肌炎、粘液血癥或心內(nèi)膜炎引起的。

59.根據(jù)前述權利要求中任一項所述用途的多肽或多肽類似物或多肽綴合物，其中所述缺血性和/或炎性病況與手術例如大型手術相關；或與器官移植例如實體器官移植相關。

60.根據(jù)前述權利要求中任一項所述用途的多肽或多肽類似物或多肽綴合物，其中所述缺血性和/或炎性病況選自術后全身炎癥反應綜合征(sirs)和術后器官功能障礙；例如術后腎衰竭，包括急性腎損傷(aki)、腎毒性和/或慢性腎衰竭(crf)。

61.根據(jù)前述權利要求中任一項所述用途的多肽或多肽類似物或多肽綴合物，其中所述缺血性和/或炎性病況是再灌注損傷。

62.根據(jù)前述權利要求中任一項所述用途的多肽或多肽類似物或多肽綴合物，其中所述炎性疾病選自關節(jié)病(關節(jié)疾病)、類風濕性關節(jié)炎(ra)、痛風、胃腸系統(tǒng)炎性疾病和多發(fā)性硬化癥。

63.根據(jù)前述權利要求中任一項所述用途的多肽或多肽類似物或多肽綴合物，其中所述炎性病況或疾病是肝臟炎癥，例如非酒精性脂肪性肝炎(nash)。

技術總結
本公開涉及衍生自膜聯(lián)蛋白A1的多肽和多肽類似物以及包含所述多肽或多肽類似物的組合物，用于治療炎性和缺血性病況。

技術研發(fā)人員：托馬斯·恩格爾布雷希特·諾克爾德·約納森
受保護的技術使用者：雷索特制藥股份有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/11/4