本發(fā)明涉及犬il-31受體α的抗體，其對犬il-31受體α具有高結(jié)合親和力，并且能夠阻斷犬il-31與犬il-31受體α的結(jié)合。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的抗體在治療狗的特應(yīng)性皮炎中的用途。

背景技術(shù)：

1、免疫系統(tǒng)包括常駐和再循環(huán)特化細胞的網(wǎng)絡(luò)，其協(xié)同作用以保護宿主抵抗感染性疾病和癌癥。免疫系統(tǒng)執(zhí)行這種功能的能力在很大程度上取決于由白細胞分泌的一組蛋白質(zhì)的生物活性，這些蛋白質(zhì)統(tǒng)稱為白細胞介素。在充分研究的白介素中，有四種重要的分子被鑒定為白介素-31(il-31)、白介素-4(il-4)、白介素-13(il-13)和白介素-22(il-22)。盡管il4、il-13、il-22和il-31是產(chǎn)生針對細胞外病原體(例如，組織或腔居留寄生蟲)的保護所需的免疫應(yīng)答的關(guān)鍵細胞因子，但這些細胞因子也涉及人和動物中的過敏性疾病(包括特應(yīng)性皮炎)的發(fā)病機理。

2、特應(yīng)性皮炎(ad)是復(fù)發(fā)性瘙癢和慢性炎性皮膚病，其特征在于人的免疫系統(tǒng)失調(diào)和表皮屏障異常。特應(yīng)性皮炎的病理學(xué)和免疫學(xué)屬性已經(jīng)成為廣泛研究的主題[綜述于rahman?et?al.inflammation&allergy-drug?target?10:486-496(2011)和harskamp?etal.,seminar?in?cutaneous?medicine?and?surgery?32:132-139(2013)]。特應(yīng)性皮炎也是伴侶動物(尤其是狗，其中估計其患病率為犬科動物群體的約10-15％)的常見病癥。狗和貓的特應(yīng)性皮炎的發(fā)病機理[綜述于nuttall?et?al.,veterinary?records?172(8):201-207(2013)]顯示與人的特應(yīng)性皮炎的顯著相似性，包括多種免疫細胞的皮膚浸潤和cd4+th2極化的包括il-31、il-4和il-13占優(yōu)勢的細胞因子環(huán)境。此外，il-22涉及過度上皮增殖，導(dǎo)致特應(yīng)性皮炎特有的表皮增生。

3、例如，針對犬il-31的抗體已顯示對犬的與特應(yīng)性皮炎相關(guān)的瘙癢具有作用[us8，790，651b2；us10，093，731b2]。此外，已經(jīng)測試了針對人il-31受體α(il-31ra)的抗體，并且發(fā)現(xiàn)其對人的與特應(yīng)性皮炎相關(guān)的瘙癢具有作用[ruzicka,et?al.,new?england?journalof?medicine,376(9),826–835(2017)]。

4、已經(jīng)證明有助于治療特應(yīng)性皮炎和/或已經(jīng)顯示出這樣做的前景的藥物包括：janus激酶(jak)抑制劑[參見例如u.s.8，133，899；u.s.8，987，283；wo?2018/108969]，脾酪氨酸激酶(syk)抑制劑[參見例如u.s.8，759，366]和th2細胞上表達的趨化性受體同源分子的拮抗劑[參見例如u.s.7，696，222、u.s.8，546，422、u.s.8，637，541和u.s.8，546，422]。

5、然而，盡管最近在治療特應(yīng)性皮炎方面取得了一些成功，但仍需要設(shè)計可解決犬特應(yīng)性皮炎的一種或多種癥狀的替代性和/或更好的療法。

6、本文中任何參考文獻的引用不應(yīng)被解釋為承認此類參考文獻可作為本技術(shù)的“現(xiàn)有技術(shù)”獲得。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了針對來自犬的il-31受體α(il-31ra)的新的哺乳動物抗體，包括犬源化的鼠抗體。在某些實施方案中，針對犬il-31受體α(cil-31ra)的哺乳動物抗體是分離的抗體。在優(yōu)選的實施方案中，哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合犬il-31ra。在更具體的實施方案中，哺乳動物抗體或抗原結(jié)合片段還阻斷犬il-31ra與犬白介素-31的結(jié)合。在某些實施方案中，哺乳動物抗體是針對犬il-31ra的抗體。在更具體的實施方案中，哺乳動物抗體是犬源化抗體。在甚至更具體的實施方案中，犬源化抗體是針對犬il-31ra的犬源化鼠抗體。

2、因此，本發(fā)明提供了結(jié)合犬白介素-31受體α并且包含重鏈的哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段，所述重鏈包含三個重鏈互補決定區(qū)(hcdr)的集合，cdr重鏈1(hcdr1)、cdr重鏈2(hcdr2)和cdr重鏈3(hcdr3)，其中所述hcdr1包含seq?id?no：3的氨基酸序列；所述hcdr2包含seq?id?no：10、seq?id?no：11、seq?id?no：12或seq?id?no：13的氨基酸序列；且所述hcdr3包含seq?id?no：20、seq?id?no：21、seq?id?no：22或seq?id?no：23的氨基酸序列。

3、在某些實施方案中，所述哺乳動物抗體或抗原結(jié)合片段還包含輕鏈，所述輕鏈包含三個輕鏈互補決定區(qū)(lcdr)的集合，cdr輕鏈1(lcdr1)、cdr輕鏈2(lcdr2)和cdr輕鏈3(lcdr3)，其中所述lcdr1包含seq?id?no：30或seq?id?no：31的氨基酸序列；所述lcdr2包含seq?id?no：38、seq?id?no：39或seq?id?no：40的氨基酸序列；且所述lcdr3包含seq?id?no：45的氨基酸序列。

4、在特定的實施方案中，當與犬il-31ra結(jié)合時，哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段與seq?id?no：97、seq?id?no：103、seq?id?no：99或seq?id?no：102的氨基酸序列所包含的一個或多個表位結(jié)合。在更具體的實施方案中，當與犬il-31ra結(jié)合時，哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段與兩個表位結(jié)合，其中一個表位由seq?id?no：97的氨基酸序列包含，另一個表位由seq?id?no：103的氨基酸序列包含。在其它實施方案中，當與犬il-31ra結(jié)合時，哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段與兩個表位結(jié)合，其中一個表位由seq?id?no：99的氨基酸序列包含，另一個表位由seq?id?no：102的氨基酸序列包含。

5、在特定的實施方案中，當與犬il-31ra結(jié)合時，哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段與seq?id?no：97的氨基酸序列所包含的表位結(jié)合。在其它實施方案中，當與犬il-31ra結(jié)合時，哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段與seq?id?no：103的氨基酸序列所包含的表位結(jié)合。在其它實施方案中，當與犬il-31ra結(jié)合時，哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段與seq?id?no：99的氨基酸序列所包含的表位結(jié)合。在其它實施方案中，當與犬il-31ra結(jié)合時，哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段與seq?id?no：102的氨基酸序列所包含的表位結(jié)合。

6、在相關(guān)實施方案中，當與犬il-31ra結(jié)合時，抗體結(jié)合seq?id?no：97或seq?id?no：103，或seq?id?no：97和seq?id?no：103兩者，和/或seq?id?no：99或seq?id?no：102，或seqid?no：99和seq?id?no：102兩者的氨基酸序列內(nèi)的至少一個氨基酸殘基，優(yōu)選1至3個氨基酸殘基，更優(yōu)選2至5個氨基酸殘基，和/或更優(yōu)選3至8個氨基酸殘基或更多。

7、在特定的實施方案中，哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段包含含有seq?id?no：3的氨基酸序列的hcdr1，含有seq?id?no：10的氨基酸序列的hcdr2和含有seq?id?no：20的氨基酸序列的hcdr3。在這種類型的更具體的實施方案中，哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段還包含含有seq?id?no：30的氨基酸序列的lcdr1，含有seq?id?no：40的氨基酸序列的lcdr2和含有seq?id?no：45的氨基酸序列的lcdr3。

8、在其它實施方案中，哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段包含含有seq?id?no：3的氨基酸序列的hcdr1，含有seq?id?no：11的氨基酸序列的hcdr2和含有seq?id?no：21的氨基酸序列的hcdr3。在這種類型的更具體的實施方案中，哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段還包含含有seq?id?no：30的氨基酸序列的lcdr1，含有seq?id?no：40的氨基酸序列的lcdr2和含有seq?id?no：45的氨基酸序列的lcdr3。

9、在其它實施方案中，哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段包含含有seq?id?no：3的氨基酸序列的hcdr1，含有seq?id?no：12的氨基酸序列的hcdr2和含有seq?id?no：22的氨基酸序列的hcdr3。在這種類型的更具體的實施方案中，哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段還包含含有seq?id?no：30的氨基酸序列的lcdr1，含有seq?id?no：38的氨基酸序列的lcdr2和含有seq?id?no：45的氨基酸序列的lcdr3。

10、在其它實施方案中，哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段包含含有seq?id?no：3的氨基酸序列的hcdr1，含有seq?id?no：13的氨基酸序列的hcdr2和含有seq?id?no：23的氨基酸序列的hcdr3。在這種類型的更具體的實施方案中，哺乳動物抗體或其抗原結(jié)合片段還包含含有seq?id?no：31的氨基酸序列的lcdr1，含有seq?id?no：39的氨基酸序列的lcdr2和含有seq?id?no：45的氨基酸序列的lcdr3。

11、在優(yōu)選的實施方案中，抗體及其抗原結(jié)合片段結(jié)合犬il-31ra并阻斷犬il-31ra與犬白介素-31的結(jié)合。在具體的實施方案中，針對犬il-31ra的哺乳動物抗體是鼠抗體。在特定實施方案中，針對犬il-31ra的哺乳動物抗體是犬源化抗體。在更具體的實施方案中，針對犬il-31ra的犬源化抗體是犬源化鼠抗體。

12、本發(fā)明的犬源化抗體包含犬片段可結(jié)晶區(qū)(cfc區(qū))。本發(fā)明的犬源化抗體還包含犬輕鏈恒定區(qū)。在特定的實施方案中，犬輕鏈恒定區(qū)是κ犬輕鏈恒定區(qū)。在更具體的實施方案中，κ犬輕鏈恒定區(qū)包含seq?id?no：127的氨基酸序列。

13、此外，犬源化抗體或其抗原結(jié)合片段可包含含有cfc區(qū)和鉸鏈區(qū)的重鏈。鉸鏈區(qū)優(yōu)選為犬鉸鏈區(qū)。犬鉸鏈區(qū)可包含天然存在的：igg-a鉸鏈區(qū)，igg-b鉸鏈區(qū)，igg-c鉸鏈區(qū)，或igg-d鉸鏈區(qū)?；蛘撸q鏈區(qū)是相應(yīng)的修飾的犬鉸鏈區(qū)。在特定的實施方案中，鉸鏈區(qū)是包含含有與seq?id?no：112的氨基酸序列至少90％，95％或100％同一性的氨基酸序列的igg-a鉸鏈區(qū)。在其它實施方案中，鉸鏈區(qū)是包含含有與seq?id?no：113的氨基酸序列至少90％，95％或100％同一性的氨基酸序列的igg-b鉸鏈區(qū)。在其它實施方案中，鉸鏈區(qū)是包含含有與seq?id?no：114的氨基酸序列至少90％，95％或100％同一性的氨基酸序列的igg-c鉸鏈區(qū)。在其它實施方案中，鉸鏈區(qū)是包含seq?id?no：115的氨基酸序列的修飾的igg-d鉸鏈區(qū)。

14、類似地，犬fc區(qū)可以是igg-a，igg-b，igg-c，igg-d或其修飾物。在特定的實施方案中，犬源化抗體或其抗原結(jié)合片段包含igg-bm。在某些實施方案中，犬源化抗體或其抗原結(jié)合片段包含igg-a，所述igg-a包含含有與seq?id?no：116的氨基酸序列具有至少90％，95％，98％，99％或100％同一性的氨基酸序列。在其它實施方案中，犬源化抗體或其抗原結(jié)合片段包含igg-b，所述igg-b包含含有與seq?id?no：110的氨基酸序列具有至少90％，95％，98％，99％或100％同一性的氨基酸序列。在其它實施方案中，犬源化抗體或其抗原結(jié)合片段包含含有與seq?id?no：117的氨基酸序列具有至少90％，95％，98％，99％或100％同一性的氨基酸序列的igg-c。在其它實施方案中，犬源化抗體或其抗原結(jié)合片段包含含有與seq?id?no：118的氨基酸序列具有至少90％，95％，98％，99％或100％同一性的氨基酸序列的igg-d。在其它實施方案中，犬源化抗體或其抗原結(jié)合片段包含含有與seq?id?no：111的氨基酸序列具有至少90％，95％，98％，99％或100％同一性的氨基酸序列的igg-bm，其中seq?id?no：110的位置31處的天冬氨酸殘基(d)和seq?id?no：110的位置63處的天冬酰胺殘基(n)兩者均保持被igg-bm序列中的丙氨酸殘基(a)置換。

15、在特定的實施方案中，犬源化抗體或其抗原結(jié)合片段包含犬igg-d，但天然存在的igg-d鉸鏈區(qū)被包含含有與seq?id?no：112的氨基酸序列至少90％，95％或100％同一性的氨基酸序列的鉸鏈區(qū)取代。在其它實施方案中，犬源化抗體包含含有igg-d的重鏈，但天然存在的igg-d鉸鏈區(qū)被含有與seq?id?no：113的氨基酸序列具有至少90％，95％或100％同一性的氨基酸序列的鉸鏈區(qū)取代。在其它實施方案中，犬源化抗體包含含有igg-d的重鏈，但天然存在的igg-d鉸鏈區(qū)被含有與seq?id?no：114的氨基酸序列具有至少90％，95％或100％同一性的氨基酸序列的鉸鏈區(qū)取代。在其它實施方案中，犬源化抗體包含含有igg-d的重鏈，但天然存在的igg-d鉸鏈區(qū)被含有seq?id?no：115的氨基酸序列的鉸鏈區(qū)取代。

16、在組合物的某些實施方案中，針對犬il-31ra的犬源化抗體包含重鏈和輕鏈，所述重鏈包含seq?id?no：79，seq?id?no：80或seq?id?no：81的氨基酸序列，所述輕鏈包含seqid?no：82，seq?id?no：83，seq?id?no：84或seq?id?no：85的氨基酸序列。本發(fā)明進一步提供了這些犬源化抗體的抗原結(jié)合片段。

17、在特定實施方案中，犬源化抗體包含含有seq?id?no：84的氨基酸序列的輕鏈和含有seq?id?no：80的氨基酸序列的重鏈。在其它實施方案中，犬源化抗體包含含有seq?idno：84的氨基酸序列的輕鏈和含有seq?id?no：81的氨基酸序列的重鏈。在其它實施方案中，犬源化抗體包含含有seq?id?no：84的氨基酸序列的輕鏈和含有seq?id?no：79的氨基酸序列的重鏈。

18、在其它實施方案中，犬源化抗體包含含有seq?id?no：85的氨基酸序列的輕鏈和含有seq?id?no：80的氨基酸序列的重鏈。在其它實施方案中，犬源化抗體包含含有seq?idno：85的氨基酸序列的輕鏈和含有seq?id?no：81的氨基酸序列的重鏈。在其它實施方案中，犬源化抗體包含含有seq?id?no：85的氨基酸序列的輕鏈和含有seq?id?no：79的氨基酸序列的重鏈。

19、在其它實施方案中，犬源化抗體包含含有seq?id?no：83的氨基酸序列的輕鏈和含有seq?id?no：80的氨基酸序列的重鏈。在其它實施方案中，犬源化抗體包含含有seq?idno：83的氨基酸序列的輕鏈和含有seq?id?no：81的氨基酸序列的重鏈。在其它實施方案中，犬源化抗體包含含有seq?id?no：83的氨基酸序列的輕鏈和含有seq?idno：79的氨基酸序列的重鏈。

20、在其它實施方案中，犬源化抗體包含含有seq?id?no：82的氨基酸序列的輕鏈和含有seq?id?no：80的氨基酸序列的重鏈。在其它實施方案中，犬源化抗體包含含有seq?idno：82的氨基酸序列的輕鏈和含有seq?id?no：81的氨基酸序列的重鏈。在其它實施方案中，犬源化抗體包含含有seq?id?no：82的氨基酸序列的輕鏈和含有seq?id?no：79的氨基酸序列的重鏈。

21、在具體的實施方案中，當與犬il-31ra結(jié)合時，哺乳動物抗體(例如犬源化抗體)結(jié)合seq?id?no：97或seq?id?no：103的氨基酸所包含的表位，或結(jié)合seq?id?no：97和seq?idno：103兩者所包含的表位。在特定的實施方案中，表位的鑒定基于化學(xué)交聯(lián)和質(zhì)譜檢測。在相關(guān)的實施方案中，當與犬il-31ra結(jié)合時，哺乳動物抗體結(jié)合seq?id?no：97或seq?id?no：103的氨基酸序列內(nèi)，或seq?id?no：97和seq?id?no：103二者內(nèi)的至少一個氨基酸殘基，優(yōu)選1-3個氨基酸殘基，更優(yōu)選2-5個氨基酸殘基，和/或更優(yōu)選3-8個氨基酸殘基或更多。

22、在特定的實施方案中，結(jié)合seq?id?no：97的哺乳動物抗體結(jié)合seq?id?no.2的94位的酪氨酸殘基，即y94。在其它實施方案中，哺乳動物抗體結(jié)合seq?id?no.2的102位賴氨酸殘基，即k102。在其它實施方案中，哺乳動物抗體結(jié)合seq?id?no.2的112位賴氨酸殘基，即k112。在其它實施方案中，哺乳動物抗體結(jié)合seq?id?no.2的94位的酪氨酸殘基和seq?idno.2的102位的賴氨酸殘基。在其它實施方案中，哺乳動物抗體結(jié)合seq?id?no.2的102位的賴氨酸殘基和seq?id?no.2的112位的賴氨酸殘基。在其它實施方案中，哺乳動物抗體結(jié)合seq?id?no.2的94位的酪氨酸殘基和seq?id?no.2的112位的賴氨酸殘基。在其它實施方案中，哺乳動物抗體結(jié)合94位的酪氨酸殘基，結(jié)合seq?id?no.2的102位的賴氨酸殘基和seqid?no.2的112位的賴氨酸殘基。

23、在相關(guān)的實施方案中，結(jié)合seq?id?no：103的哺乳動物抗體結(jié)合seq?id?no.2的183位的精氨酸殘基，即r183。在其它實施方案中，哺乳動物抗體結(jié)合seq?id?no.2的193位的絲氨酸殘基，即s193。在其它實施方案中，哺乳動物抗體結(jié)合seq?id?no.2的202位蘇氨酸殘基，即t202。在其它實施方案中，哺乳動物抗體結(jié)合seq?id?no.2的183位的精氨酸殘基和seqid?no.2的193位的絲氨酸殘基。在其它實施方案中，哺乳動物抗體結(jié)合seq?id?no.2的193位的絲氨酸殘基和seq?id?no.2的202位的蘇氨酸殘基。在其它實施方案中，哺乳動物抗體結(jié)合seq?id?no.2的183位的精氨酸殘基和seq?id?no.2的202位的蘇氨酸殘基。在其它實施方案中，哺乳動物抗體結(jié)合seq?id?no.2的183位的精氨酸殘基，結(jié)合seq?id?no.2的193位的絲氨酸殘基和seq?id?no.2的202位的蘇氨酸殘基。本發(fā)明進一步提供這些哺乳動物抗體的抗原結(jié)合片段。

24、本發(fā)明還提供了編碼以下任何的核酸，包括分離的核酸：3個hcdrs或3個lcdrs的集合；犬源化抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈可變區(qū)；犬源化抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈，犬源化抗體或其抗原結(jié)合片段的輕鏈可變區(qū)，和/或犬源化抗體或其抗原結(jié)合片段的輕鏈。本發(fā)明還提供了一對核酸，其中該對核酸中的一個包含編碼本發(fā)明的任一種抗體的特異性犬源化抗體的輕鏈的核苷酸序列，且該對核酸中的另一個包含編碼該(所述)特異性犬源化抗體的重鏈的核苷酸序列。本發(fā)明還提供了包含這樣的核酸對或本發(fā)明的單個核酸的表達載體。此外，本發(fā)明提供了表達載體對，其中所述表達載體對中的一個包含含有編碼本發(fā)明抗體中的任一種的特異性犬源化抗體的輕鏈的核苷酸序列的核酸，并且所述表達載體對中的另一個包含含有編碼該(所述)特異性犬源化抗體的重鏈的核苷酸序列的核酸。

25、因此，本發(fā)明進一步提供了編碼本發(fā)明的哺乳動物抗體(包括犬源化抗體)的三個重鏈互補決定區(qū)(cdr)cdr重鏈1(hcdr1)、cdr重鏈2(hcdr2)和cdr重鏈3(hcdr3)的集合的核酸。在更具體的實施方案中，所述核酸編碼包含seq?id?no：3的氨基酸序列的hcdr1；包含seq?id?no：10，seq?id?no：11，seq?id?no：12，或seq?id?no：13的氨基酸序列的hcdr2；以及包含seq?id?no：20，seq?id?no：21，seq?id?no：22，或seq?id?no：23的氨基酸序列的hcdr3；或其任何組合。

26、本發(fā)明還提供了編碼本發(fā)明的哺乳動物抗體(包括犬源化抗體)或其抗原結(jié)合片段的三個輕鏈互補決定區(qū)(cdr)、cdr輕鏈1(lcdr1)、cdr輕鏈2(lcdr2)和cdr輕鏈3(lcdr3)的集合的核酸。在此類型的更具體實施方案中，所述核酸編碼包含seq?id?no：30或seq?idno：31的氨基酸序列的lcdr1；包含seq?id?no：38，seq?id?no：39或seq?id?no：40的氨基酸序列的lcdr2；以及包含seq?id?no：45的氨基酸序列的lcdr3；或其任何組合。

27、本發(fā)明還提供了編碼本發(fā)明的哺乳動物抗體(包括犬源化抗體)或其抗原結(jié)合片段的任何重鏈的核酸。本發(fā)明還提供了編碼本發(fā)明的哺乳動物抗體(包括犬源化抗體)或其抗原結(jié)合片段的任何輕鏈的核酸。此外，本發(fā)明提供了包含并能夠表達本發(fā)明的一種或多種核酸的表達載體，以及包含一種或多種這樣的表達載體的宿主細胞。

28、本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明的犬源化抗體及其抗原結(jié)合片段以及藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑的藥物組合物。本發(fā)明還提供了藥物組合物，其包含本發(fā)明的核酸以及藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑，和/或包含一種或多種本發(fā)明的核酸以及藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑的表達載體。

29、本發(fā)明還提供了治療特應(yīng)性皮炎的方法，其包括向患有特應(yīng)性皮炎的動物受試者施用上述藥物組合物中的一種。在特定實施方案中，動物對象是犬科動物。本發(fā)明還提供了在動物受試者中幫助阻斷與特應(yīng)性皮炎相關(guān)的瘙癢的方法，包括向有此需要的動物受試者施用治療有效量的本發(fā)明的藥物組合物。在特定實施方案中，動物對象是犬科動物。

30、此外，本發(fā)明提供了產(chǎn)生結(jié)合犬il-31ra的犬源化抗體或其抗原結(jié)合片段的方法。在特定實施方案中，該方法包括在表達核酸的條件下在培養(yǎng)基中培養(yǎng)包含編碼和表達本發(fā)明的犬源化抗體的輕鏈和該犬源化抗體的重鏈的一種或多種表達載體的宿主細胞，從而產(chǎn)生包含本發(fā)明的犬源化抗體的輕鏈和/或該犬源化抗體的重鏈的多肽。然后從宿主細胞或培養(yǎng)基中回收多肽。在某些實施方案中，包含本發(fā)明的犬源化抗體的輕鏈的多肽和包含該犬源化抗體的重鏈的多肽各自在有益于形成犬源化抗體的條件下組合。

31、通過參考以下附圖的簡要描述和詳細描述，將更好地理解本發(fā)明的這些和其它方面。