本發(fā)明屬于海洋微生物及其天然產(chǎn)物應(yīng)用，具體涉及一種真菌來源的環(huán)肽類化合物及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、肽類化合物因具有毒性小、靶向性強和分子質(zhì)量小等優(yōu)點，一直以來是新型藥物研發(fā)的重要對象。其中，環(huán)肽類化合物是氨基酸通過肽鍵首尾相連形成的環(huán)狀化合物，由于其構(gòu)象受到了限制和約束，與鏈狀線性肽相比，環(huán)肽類化合物具有更高的靶標(biāo)選擇性、代謝穩(wěn)定性和膜通透性，致使生物利用度大大提高。環(huán)肽類化合物作為抗生素藥物在醫(yī)藥領(lǐng)域發(fā)揮著重要的作用，多種環(huán)肽類化合物如萬古霉素、達托霉素、多粘菌素等作為抗菌藥物已在臨床上廣泛使用。基于天然產(chǎn)物的新活性先導(dǎo)化合物的發(fā)現(xiàn)，一直是新藥研發(fā)的快速有效途徑。目前，已有越來越多的環(huán)肽類化合物從植物、海洋生物和微生物中被發(fā)掘并鑒定。

2、海洋真菌能夠耐受海洋特有的高鹽、高壓、低氧、低光照等極端環(huán)境，與陸地真菌相比，其生存條件的特異性導(dǎo)致了海洋真菌在物種、基因組成和生態(tài)功能上的多樣性。此外，海洋真菌是活性天然產(chǎn)物的重要來源，據(jù)統(tǒng)計，70-80%的海洋真菌次生代謝產(chǎn)物展現(xiàn)出各種藥理活性和生物功能。從海洋真菌的應(yīng)用價值上來說，海洋真菌次生代謝產(chǎn)物對于新型環(huán)肽類抗生素藥物研發(fā)具有重要的意義。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種真菌來源的環(huán)肽類化合物及其制備方法與應(yīng)用。

2、所述的環(huán)肽類化合物的結(jié)構(gòu)式如下所示：

3、。

4、所述的環(huán)肽類化合物的發(fā)酵制備方法為：將海洋動物來源的真菌花斑曲霉aspergillus?versicolor?2-18接種于真菌液體培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，經(jīng)分離純化后即得環(huán)肽類化合物。

5、所述花斑曲霉aspergillus?versicolor?2-18于2024年7月24日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏單位地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏編號為cgmcc?no.41474。

6、所述的環(huán)肽類化合物的發(fā)酵制備方法的具體操作步驟為：

7、1）將花斑曲霉aspergillus?versicolor?2-18接種于真菌液體培養(yǎng)基中靜置發(fā)酵20-50天，得到菌株發(fā)酵產(chǎn)物；過濾，發(fā)酵液經(jīng)乙酸乙酯萃取，減壓濃縮，得到發(fā)酵液提取物；菌絲體經(jīng)乙酸乙酯提取，減壓濃縮，得到菌絲體提取物；發(fā)酵液提取物和菌絲體提取物合并，即得總粗提物；

8、2）將步驟1）中的總粗提物進行正相硅膠柱層析，經(jīng)有機溶劑梯度洗脫，收集洗脫液，洗脫液經(jīng)薄層層析檢測后合并相似組分，所述有機溶劑為石油醚-乙酸乙酯或二氯甲烷-甲醇；

9、3）將步驟2）中洗脫液體積比為20:1-10:1的洗脫組分，依次進行反相硅膠柱層析和正相硅膠柱層析進一步分離純化，并用薄層色譜檢測收集rf為0.4-0.6組分，即得環(huán)肽類化合物。

10、步驟3）中所述的反相硅膠柱層析的洗脫液為甲醇-水或乙醇-水；正相硅膠柱層析的洗脫液為石油醚-乙酸乙酯或二氯甲烷-甲醇。

11、步驟3）中所述的薄層色譜檢測的展開劑為體積比30:1-1:1的石油醚-乙酸乙酯或二氯甲烷-甲醇。

12、上述環(huán)肽類化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。

13、本發(fā)明的環(huán)肽類化合物是通過分離自海洋動物繁茂膜海綿中的花斑曲霉aspergillus?versicolor?2-18經(jīng)發(fā)酵、提取分離獲得的新環(huán)五肽化合物，純度為95%-97%。該化合物結(jié)構(gòu)新穎、來源獨特、制備方法簡單。本發(fā)明制備的環(huán)肽類化合物對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有一定的抑制作用，為研究和開發(fā)新的抗菌藥物提供了新的先導(dǎo)化合物，也為開發(fā)海洋真菌資源提供了科學(xué)依據(jù)。

技術(shù)特征：

1.一種環(huán)肽類化合物，其特征在于，該化合物的結(jié)構(gòu)式如下所示：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)肽類化合物的發(fā)酵制備方法，其特征在于，所述發(fā)酵制備方法為：將海洋動物來源的真菌花斑曲霉aspergillus?versicolor?2-18接種于真菌液體培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，經(jīng)分離純化后即得環(huán)肽類化合物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的環(huán)肽類化合物的發(fā)酵制備方法，其特征在于，所述花斑曲霉aspergillus?versicolor?2-18于2024年7月24日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為cgmcc?no.41474。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的環(huán)肽類化合物的發(fā)酵制備方法，其特征在于，所述制備方法的具體操作步驟為：

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的環(huán)肽類化合物的發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟3）中所述的反相硅膠柱層析的洗脫液為甲醇-水或乙醇-水；正相硅膠柱層析的洗脫液為石油醚-乙酸乙酯或二氯甲烷-甲醇。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的環(huán)肽類化合物的發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟3）中所述的薄層色譜檢測的展開劑為體積比30:1-1:1的石油醚-乙酸乙酯或二氯甲烷-甲醇。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)肽類化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種真菌來源的環(huán)肽類化合物及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明從海洋動物繁茂膜海綿中分離得到花斑曲霉Aspergillus?versicolor?2?18，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)、提取分離獲得新環(huán)五肽化合物cyclo?[N?Me?L?Tyr?L?Val?L?Pro?L?Tyr?L?Phe]，純度為95%?97%。該化合物結(jié)構(gòu)新穎、來源獨特、制備方法簡單。本發(fā)明制備的環(huán)肽類化合物對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有一定的抑制作用，為研究和開發(fā)新的抗菌藥物提供了新的先導(dǎo)化合物，也為開發(fā)海洋真菌資源提供了科學(xué)依據(jù)。

技術(shù)研發(fā)人員：鄭茂坤,黃正,陳嘉欣,楊昇蒲,汪俊
受保護的技術(shù)使用者：山東第一醫(yī)科大學(xué)（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/11/4