本發(fā)明涉及分子生物學實驗，具體為一種快速提取植物樣本總dna的方法。
背景技術：
1、現(xiàn)代生物技術為進一步認識生命活動的本質，更好地利用其規(guī)律為人類服務提供了重要手段，但dna分離是成功利用這些技術的第一步，也是非常重要的一步，dna的質量直接決定后續(xù)實驗的成敗，目前能夠提取植物樣本dna的方法有很多，但是易受到提取液和其余雜質的污染，提取的純度、濃度和產(chǎn)量都較低，使得后續(xù)測序實驗結果不穩(wěn)定。
2、而現(xiàn)如今，隨著分子生物學的高速發(fā)展，個體分子鑒定已經(jīng)應用植物組織培養(yǎng)的植株鑒定等領域，一種快速簡單實用的植物dna的提取方法有助于上述實驗的順利展開，傳統(tǒng)的植物dna的提取方法需要用到有毒試劑β-巰基乙醇，實驗的安全性較為低下，傳統(tǒng)的植物dna的提取方法步驟復雜且用時較長，在進行大量樣本處理時需要耗費較多的時間和人力成本，為了有效提高實驗過程的安全性、時效性以及規(guī)避采購風險，需要一種新型可用的提取植物dna的方法來取代原有的方法，為此，我們提出一種快速提取植物樣本總dna的方法。
技術實現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的目的在于提供一種快速提取植物樣本總dna的方法。
2、以解決上述背景技術中提出的問題，本發(fā)明提供如下技術方案：一種快速提取植物樣本總dna的方法，所述一種快速提取植物樣本總dna的方法的具體操作步驟如下：
3、步驟一、剪切植物葉片，將其置入液氮中冷卻脆化，冷卻脆化后再將其放入研磨皿中研磨成粉末，制得植物樣本粉末，并將其轉入離心管中備用；
4、步驟二、將植物樣本粉末置入離心管中并加入溶液a，將其振蕩混合后，放進渦旋儀中振蕩，將離心管中的粉末振蕩均勻，使其與溶液a混合，振蕩完成后，將離心管在恒溫條件下置入離心機中離心5min，將離心管中的上清液取出并移至新的離心管中；
5、步驟三、向新的離心管中加入和上清液等體積的異丙醇溶液，在室溫下將其沉降5min后，將其在常溫下放入離心機中離心10min，離心完成后靜置5min，再將離心管取下并取出其中的上清液，離心管底部剩余物質為dna沉淀，將其置入-20℃以下的環(huán)境中保存；
6、步驟四、取干燥潔凈的離心管，將dna沉淀移入離心管中并加入75%的乙醇溶液，再輕彈離心管底部，使dna的沉淀重懸，于常溫下將其置入離心機中進行離心操作10min，離心完成后取出離心管中的上清液，制得第一次dna沉淀；
7、步驟五、取干燥潔凈的離心管，第一次dna沉淀移入離心管中并加入75%的乙醇溶液，再輕彈離心管底部，使dna的沉淀重懸，于常溫下將其置入離心機中進行離心操作10min，離心完成后倒盡離心管中的上清液，再將離心管置于烘干箱中干燥15min，制得干燥后的dna；
8、步驟六、在干燥后的dna中加入ddh2o，可將所得的dna在室溫下短期保存，也可將其放置在-20℃的環(huán)境下長期保存。
9、作為本發(fā)明的進一步方案：所述步驟一中，取用的植物葉片質量為200g，將其研磨成100μm～200μm的粉末。
10、作為本發(fā)明的進一步方案：所述步驟二中，在研磨完成后的植物樣本粉末中加入700μl的溶液a，使用渦旋儀振蕩10s使植物樣本粉末能夠均勻分散。
11、作為本發(fā)明的進一步方案：所述步驟二中，溶液a的組分為2%ctab、1.4?m?nacl、20mm?edta和100?mm?tris-hcl。
12、作為本發(fā)明的進一步方案：所述步驟三中，將離心管置入離心機中以13000r/min的離心速度離心10min。
13、作為本發(fā)明的進一步方案：所述步驟四中，在dna的沉淀重懸后，需要在常溫下將其置入離心機中以12000r/min的離心速度離心10min。
14、作為本發(fā)明的進一步方案：所述步驟五中，在第一次dna沉淀重懸后，需要在常溫下將其置入離心機中以12000r/min的離心速度離心10min，離心完成后將其放入烘箱中在37℃的溫度下烘干15min。
15、作為本發(fā)明的進一步方案：所述步驟六中，在加入ddh2o重新溶解dna后，dna會由干燥的固體形式變?yōu)槿芤籂顟B(tài)，在保存前可進行dna的測序和酶切。
16、作為本發(fā)明的進一步方案：將制得的dna提取液放置在1%的瓊脂糖凝膠上進行電泳檢測，電泳條件：1×tbe緩沖液，電壓3v·cm-1～5v·cm-1，電泳時間1h～1.5h，使用凝膠成像系統(tǒng)進行拍照記錄。
17、采用上述技術方案，與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果在于：
18、1、本發(fā)明通過在提取植物樣本dna的方法中棄用有毒試劑β-巰基乙醇，不僅提高了實驗的安全性，也減輕了實驗廢棄物對環(huán)境造成的污染，在具體提取植物樣本dna的方法中，使用單一溶液萃取植物樣本中的dna，既簡化了提取dna的操作步驟，也提高了整體實驗的效率，使提取植物樣本中的dna的過程更加簡單快捷，最終所獲得的dna可用于各種的分子生物學實驗；
19、2、本發(fā)明通過在提取植物樣本dna的方法中加入edta，能夠有效地抑制核酸酶的活性，并促進細胞的溶解，能夠防止dna在提取和儲存過程中發(fā)生降解和損傷，通過在提取植物樣本dna的方法中加入tris-hcl，能夠確保dna在適宜的ph條件下進行提取反應，且tris-hcl具有良好的緩沖性能，能夠在提取過程中保護dna不受酶降解的影響。
1.一種快速提取植物樣本總dna的方法，其特征在于，所述一種快速提取植物樣本總dna的方法的具體操作步驟如下：
2.根據(jù)權利要求1所述的一種快速提取植物樣本總dna的方法，其特征在于：所述步驟一中，取用的植物葉片質量為200g，將其研磨成100μm～200μm的粉末。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種快速提取植物樣本總dna的方法，其特征在于：所述步驟二中，在研磨完成后的植物樣本粉末中加入700μl的溶液a，使用渦旋儀振蕩10s使植物樣本粉末能夠均勻分散。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種快速提取植物樣本總dna的方法，其特征在于：所述步驟二中，溶液a的組分為2%ctab、1.4?m?nacl、20?mm?edta和100?mm?tris-hcl。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種快速提取植物樣本總dna的方法，其特征在于：所述步驟三中，將離心管置入離心機中以13000r/min的離心速度離心10min。
6.根據(jù)權利要求1所述的一種快速提取植物樣本總dna的方法，其特征在于：所述步驟四中，在dna的沉淀重懸后，需要在常溫下將其置入離心機中以12000r/min的離心速度離心10min。
7.根據(jù)權利要求1所述的一種快速提取植物樣本總dna的方法，其特征在于：所述步驟五中，在第一次dna沉淀重懸后，需要在常溫下將其置入離心機中以12000r/min的離心速度離心10min，離心完成后將其放入烘箱中在37℃的溫度下烘干15min。
8.根據(jù)權利要求1所述的一種快速提取植物樣本總dna的方法，其特征在于：所述步驟六中，在加入ddh2o重新溶解dna后，dna會由干燥的固體形式變?yōu)槿芤籂顟B(tài)，在保存前可進行dna的測序和酶切。
9.根據(jù)權利要求1所述的一種快速提取植物樣本總dna的方法，其特征在于：將制得的dna提取液放置在1%的瓊脂糖凝膠上進行電泳檢測，電泳條件：1×tbe緩沖液，電壓3v·cm-1～5v·cm-1，電泳時間1h～1.5h，使用凝膠成像系統(tǒng)進行拍照記錄。