本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥大健康，具體涉及一種美洲大蠊葡聚糖pan及其藥學(xué)上可接受的藥物組合物、其制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、美洲大蠊(periplaneta?americana)屬于蜚蠊目，蜚蠊科，作為傳統(tǒng)中藥，收載于許多中藥典籍中。《神農(nóng)本草經(jīng)》將美洲大蠊列為中品，記載其“味咸，寒。主血瘀、癥堅(jiān)、寒熱，破積聚，喉咽痹、內(nèi)寒無子”?！侗静菥V目》記載為“行夜，蛗螽三種，西南夷皆食之”。《名醫(yī)別錄》也記載蜚蠊的藥用價(jià)值?！吨袊?guó)藥用動(dòng)物志》收載美洲大蠊，以干燥或新鮮成蟲入藥，將其研成粉末進(jìn)行內(nèi)服或外敷的方法使用，具有活血通脈，利水消腫，斂瘡生肌，治療外傷以及久治不愈的潰瘍創(chuàng)面的功效。

2、美洲大蠊的化學(xué)物質(zhì)主要包括蛋白質(zhì)與氨基酸類、核苷類、肽類、糖類、脂肪酸等?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，美洲大蠊具有促進(jìn)組織修復(fù)、抑菌、抗氧化等活性，但其活性成分不明確。其中，美洲大蠊多糖至今尚未被報(bào)道，生物活性更不明確。迄今為止，未見有美洲大蠊葡聚糖pan及其活性的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足之處，提供一種美洲大蠊葡聚糖pan、其藥物組合物、其制備方法及其在制備免疫調(diào)節(jié)藥物中的應(yīng)用。

2、基于此，本發(fā)明從美洲大蠊中分離純化了一種結(jié)構(gòu)新穎的美洲大蠊葡聚糖pan，該美洲大蠊多糖的結(jié)構(gòu)和功能均為首次報(bào)道。藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，所述美蠊大蠊葡聚糖pan具有顯著地增強(qiáng)免疫活性的生理功能。

3、為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

4、本發(fā)明首先提供一種美洲大蠊葡聚糖，其結(jié)構(gòu)為α(1→6)連接的葡聚糖，縮寫為pan，具有如下通式i所示的結(jié)構(gòu)式：

5、

6、?????????????????

7、化學(xué)式i中，n表示重復(fù)單元數(shù)，且為自然數(shù)，6≦n≦8。

8、所述美洲大蠊葡聚糖的重均分子量(mw)為3000da～4000da，多分散系數(shù)(pdi)為1.43。

9、本發(fā)明提供所述美洲大蠊葡聚糖pan的制備方法，包括如下步驟：

10、步驟(一)：將美洲大蠊全蟲干燥粉碎，脫脂后酶解提取，得到粗美洲大蠊葡聚糖；

11、步驟(一)：將步驟(一)所得粗美洲大蠊葡聚糖進(jìn)行進(jìn)分離純化，精制所述美洲大蠊葡聚糖中重均分子量為3000da～4000da的組分，得到美洲大蠊葡聚糖pan。

12、所述美洲大蠊葡聚糖的制備方法，其中脫脂步驟中，乙醇濃度為95％，脫脂時(shí)間為0.5h～3h。

13、所述美洲大蠊葡聚糖的制備方法，其中所述堿性蛋白酶的用量為美洲大蠊重量的1％～5％，酶解條件為ph＝9，酶解溫度為50～65℃，酶解時(shí)間為9～24h。

14、所述美洲大蠊葡聚糖的制備方法，其中所述分級(jí)醇沉包括：取上清液分級(jí)醇沉，使醇濃度分別達(dá)到35％～45％和55％～65％，收集55％～65％醇沉沉淀。

15、所述美洲大蠊葡聚糖的制備方法，其中所述精制的方法包括：分級(jí)醇沉法、陰離子交換層析法、凝膠排阻色譜法、透析法和超濾法中的一種或多種。

16、所述美洲大蠊葡聚糖具有顯著地增強(qiáng)免疫活性的生理功能。

17、本發(fā)明同時(shí)還提供了包括有效量的所述的美洲大蠊葡聚糖pan和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。

18、所述的美洲大蠊葡聚糖在制備增強(qiáng)免疫功能的藥物中的應(yīng)用，或/和在制備治療免疫缺陷類疾病的藥物中的應(yīng)用。

19、所述的美洲大蠊葡聚糖pa1-b在制備提高免疫功能的食品中的應(yīng)用。

20、所述的藥物組合物在制備增強(qiáng)免疫功能的藥物中的應(yīng)用，或/和在制備治療免疫缺陷類疾病的藥物中的應(yīng)用。

21、所述的藥物組合物的制備方法，該方法包括以下步驟：

22、(1)將美洲大蠊全蟲干燥粉碎，脫脂后酶解提取，得到粗美洲大蠊葡聚糖，所述脫脂包括用乙醇進(jìn)行脫脂，脫脂時(shí)間為0.5h～3h；所述酶解包括用堿性蛋白酶酶解，堿性蛋白酶的用量為美洲大蠊的質(zhì)量的1％～5％，酶解條件為ph＝9，酶解溫度為50℃～65℃，酶解時(shí)間為2h～24h；

23、(2)精制美洲大蠊葡聚糖中重均分子量為3000da～4000da的組分，得到美洲大蠊葡聚糖，所述精制包括分級(jí)醇沉法、陰離子交換層析法、凝膠排阻色譜法中的一種或多種；其中所述分級(jí)醇沉法包括取上清液分級(jí)醇沉，使醇濃度分別達(dá)到35％～45％和55％～65％，收集55％～65％沉淀；

24、(3)取上述步驟得到的美洲大蠊葡聚糖，加入藥學(xué)上可接受的載體。

25、本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，結(jié)構(gòu)新穎的美洲大蠊葡聚糖pan，能顯著增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力，并促進(jìn)巨噬細(xì)胞釋放tnf-α和il-6細(xì)胞因子。巨噬細(xì)胞吞噬能力的增強(qiáng)可有效地吞噬和消化細(xì)菌、病毒等病原體，阻止其在體內(nèi)的擴(kuò)散和感染。tnf-α和il-6的上調(diào)在炎癥和免疫反應(yīng)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，它們促進(jìn)炎癥細(xì)胞的募集和活化、誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生、調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞功能以及參與炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)等多種機(jī)制，共同協(xié)調(diào)機(jī)體對(duì)感染和損傷的防御反應(yīng)。因此，美洲大蠊葡聚糖pan在增強(qiáng)機(jī)體免疫功能中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

26、本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下技術(shù)效果：

27、本發(fā)明的美洲大蠊多糖pan的結(jié)構(gòu)與功能均為首次報(bào)道，填補(bǔ)了現(xiàn)有技術(shù)的空白。所述美洲大蠊多糖pan是以α(1→6)糖苷鍵連接的葡聚糖，重均分子量為3000da～4000da。所述美洲大蠊葡聚糖pan可顯著增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力，促進(jìn)raw264.7巨噬細(xì)胞對(duì)no的釋放，顯著促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌il-6和tnf-α，具有刺激巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的能力。因此，本發(fā)明所述美洲大蠊葡聚糖pan具有增強(qiáng)免疫作用，可用于制備治療免疫缺陷類疾病的藥物，也可用于制備提高免疫功能的食品。

技術(shù)特征：

1.一種美洲大蠊葡聚糖pan，其特征在于，所述美洲大蠊葡聚糖pan為α(1→6)連接的葡聚糖，具有如下通式i所示的結(jié)構(gòu)：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美洲大蠊葡聚糖pan，其特征在于，所述美洲大蠊葡聚糖的重均分子量為3000da～4000da。

3.權(quán)利要求1所述的美洲大蠊多糖pan的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的美洲大蠊葡聚糖pan的制備方法，其特征在于：

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美洲大蠊葡聚糖pan，其特征在于，所述美洲大蠊葡聚糖具有顯著地增強(qiáng)免疫活性的生理功能。

6.包括有效量的權(quán)利要求1所述的美洲大蠊葡聚糖pan和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。

7.權(quán)利要求1或2所述的美洲大蠊葡聚糖在制備增強(qiáng)免疫功能的藥物中的應(yīng)用，或/和在制備治療免疫缺陷類疾病的藥物中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求1或2所述的美洲大蠊葡聚糖pa1-b在制備提高免疫功能的食品中的應(yīng)用。

9.權(quán)利要求6所述的藥物組合物在制備增強(qiáng)免疫功能的藥物中的應(yīng)用，或/和在制備治療免疫缺陷類疾病的藥物中的應(yīng)用。

10.權(quán)利要求6所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種美洲大蠊葡聚糖PaN、其藥物組合物、其制備方法及其在增強(qiáng)機(jī)體免疫功能中的應(yīng)用。屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的美洲大蠊葡聚糖PaN為α(1→6)連接的葡聚糖，重均分子量為3000?Da~4000?Da。其制備方法包括美洲大蠊全蟲粉碎經(jīng)乙醇脫脂后，采用酶解法提取，經(jīng)分級(jí)醇沉、離子交換柱層析法和/或凝膠柱層析法分離純化獲得。本發(fā)明的美洲大蠊葡聚糖PaN能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞RAW264.7的吞噬能力，且劑量依賴性地促進(jìn)巨噬細(xì)胞釋放NO和分泌細(xì)胞因子(IL?6、TNF?α)。因此，本發(fā)明所述的美洲大蠊葡聚糖PaN及其組合物能用在制備免疫調(diào)節(jié)藥物或食品中。

技術(shù)研發(fā)人員：吳明一,何智承,查倫貴,羅蘭,林麗莎,董旭東
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8