本發(fā)明涉及微生物，尤其涉及一種固定化菌劑的制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、多環(huán)芳烴（polycyclic?aromatic?hydrocarbons,?pahs）是一類由兩個或兩個以上苯環(huán)以線性、角狀或簇狀排列組成的有機化合物，其主要來源于有機物質(zhì)的不完全燃燒。pahs在環(huán)境中廣泛存在，可以通過土壤傳播，進而影響人類健康和生態(tài)系統(tǒng)。

2、現(xiàn)有技術(shù)中常采用微生物技術(shù)修復(fù)受到pahs污染的土壤，例如，將游離的微生物固定化在載體（例如生物炭）上，得到固定化菌劑，通過向土壤中施加固定化菌劑去除土壤中的pahs。但是，現(xiàn)有的微生物技術(shù)對于土壤中的pahs的去除效果仍然不佳，且在去除pahs的過程中，不能同時固定土壤中的二氧化碳。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提出一種固定化菌劑的制備方法及其應(yīng)用，通過本發(fā)明制備得到的固定化菌劑能夠較好地去除土壤中的多環(huán)芳烴，于此同時固定土壤中的二氧化碳。

2、為了達到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、第一方面，本發(fā)明提供一種固定化菌劑的制備方法，包括：

4、配制功能菌群的菌液；功能菌群包括考克氏菌（ kocuria?sp.）bj05、葡萄球菌（ staphylococcus?sp.）bj06、惡臭假單胞菌（ pseudomonas?putida.）cicc23685、鞘氨醇菌（ sphingobium?sp.）rs2以及木醋桿菌（ acetobacter?xylinum.）atcc23767；其中，考克氏菌（ kocuria?sp.）bj05于2025年2月27日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為cgmcc?no.33674；葡萄球菌（ staphylococcus?sp.）bj06于2025年2月27日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為cgmcc?no.33675；

5、將功能菌群的菌液以5~50?ml：1?g的比例固定在生物炭上，得到固定化菌劑。

6、本發(fā)明的另一方面，配制功能菌群的菌液，包括：

7、對功能菌群中的每一種菌進行單獨活化和培養(yǎng)，直至功能菌群中的每一種菌達到對數(shù)生長期，收集每一種菌的菌體，再分別用無機鹽培養(yǎng)基調(diào)整每一種菌的菌體od600=1.0，分別得到考克氏菌bj05的菌液、葡萄球菌bj06的菌液、惡臭假單胞菌cicc23685的菌液、鞘氨醇菌rs2的菌液以及木醋桿菌atcc23767的菌液；

8、按照0.95~1.05：0.95~1.05：0.95~1.05：0.95~1.05：0.95~1.05的體積比例，將考克氏菌bj05的菌液、葡萄球菌bj06的菌液、惡臭假單胞菌cicc23685的菌液、鞘氨醇菌rs2的菌液以及木醋桿菌atcc23767的菌液進行混合，得到功能菌群的菌液。

9、本發(fā)明的另一方面，固定方法為：

10、將功能菌群的菌液與生物炭按照5~50?ml：1?g的比例混合，得到混合物，將混合物在20~45?℃、140~160?rpm的條件下恒溫培養(yǎng)0.5~4天，得到培養(yǎng)液，再將培養(yǎng)液以11000~13000?rpm的轉(zhuǎn)速離心10~22?min并棄去上清液，置于25~30?℃的烘箱內(nèi)干燥6~10?h，得到固定化菌劑。

11、本發(fā)明還提供了上述制備方法所制備得到的固定化菌劑在同時去除土壤中多環(huán)芳烴和固定土壤中二氧化碳的應(yīng)用。

12、本發(fā)明的另一方面，多環(huán)芳烴包括萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、熒蒽、芘、苯并蒽、?和苯并芘中的任意一種或多種。

13、本發(fā)明所提供的制備方法通過兩株新菌考克氏菌（ kocuria?sp.）bj05和葡萄球菌（ staphylococcus?sp.）bj06結(jié)合其他三種菌制備得到的固定化菌劑，該固定化菌劑可以比較高效地降低土壤中pahs的含量，還可以通過固定co2增加土壤有機碳（soc）含量，安全有效且處理成本較低，適合廣泛推廣。

技術(shù)特征：

1.一種固定化菌劑的制備方法，其特征在于，包括：

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述配制功能菌群的菌液，包括：

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述固定方法為：

4.權(quán)利要求1~3中任一所述的方法制備得到的固定化菌劑在同時去除土壤中多環(huán)芳烴和固定土壤中二氧化碳的應(yīng)用。

5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述多環(huán)芳烴包括萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、熒蒽、芘、苯并蒽、?和苯并芘中的任意一種或多種。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種固定化菌劑的制備方法及其應(yīng)用，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，可以比較高效地降低土壤中PAHs的含量，還可以通過固定CO<subgt;2</subgt;增加土壤有機碳含量，安全有效且處理成本較低。該方法包括：配制功能菌群的菌液。功能菌群里含有兩株新菌考克氏菌（Kocuria?sp.）BJ05和葡萄球菌（Staphylococcus?sp.）BJ06。將功能菌群的菌液固定在生物炭上，得到固定化菌劑。

技術(shù)研發(fā)人員：高彥征,張友愛,許淋,凌婉婷
受保護的技術(shù)使用者：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8