一種用于治療腎癌的貝殼杉烷類二萜化合物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術領域，具體涉及從粘毛鼠尾草干燥全草中分離得到的一種具 有治療腎癌作用的貝殼杉烷類二萜化合物及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 粘毛鼠尾草roAororiii Maxim.系唇形科一年生或二年生草本，又名野 芝麻、黃花鼠尾草，生長于海拔2500~3700m的山坡草地、溝邊陰處、山腳山腰，分布于西 藏、青海、甘肅西南部、四川西部等地，植物資源非常豐富，目前已有人工引種栽培。
[0003] 粘毛鼠尾草味微苦、微甘，性涼，具有清肝、明目、止痛之功效。粘毛鼠尾草藏藥名 吉子嘎保，在藏民族地區(qū)廣泛應用，《青藏藥鑒》記載全草治肝炎、牙痛，《藏本草》記載全草 治肝炎、肺炎、肺結核、咯血、風火牙痛。《藏藥志》記載其味辛，性寒，可治療黃疸性發(fā)燒、肝 熱、熱性病頭痛、眼翳、支氣管炎、淋巴結炎、口腔潰瘍、感冒咳嗽等。同屬植物中同為藏藥的 甘西鼠尾草Maxim.的化學成分研究比較深入，主要有砲類(包括單 萜、倍半萜、二萜、二倍半萜、三萜)、酚酸類、木脂素、黃酮、揮發(fā)油等。
[0004] 粘毛鼠尾草化學成分有倍半萜類、二萜類、三萜類、黃類、留類、酚酸、揮發(fā)油、脂肪 酸等，其中倍半萜和三萜類是主要成分。倍半萜成分主要為吉瑪烷型倍半萜和愈創(chuàng)木烷型 倍半萜，以吉瑪烷型倍半萜為主。粘毛鼠尾草中三萜包含烏蘇烷型、齊墩果烷型、羽扇烷型 等，以羽扇烷型三萜、烏蘇烷型三萜為主。
[0005] 如前所述，粘毛鼠尾草成分主要為萜類化合物(倍半萜、二萜、三萜)，而萜類化合 物具有廣泛的生物活性，如細胞毒性、抗腫瘤、抗氧化功能，此外還具有抗寄生蟲、抗菌、抗 艾滋病毒活性，因此從粘毛鼠尾草中尋找出具有良好前景的生物活性成分或先導化合物是 可行的。

【發(fā)明內容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種從粘毛鼠尾草干燥全草中分離得到的一種具有治療腎 癌作用的貝殼杉烷類二萜化合物及其制備方法。
[0007] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現(xiàn)的： 具有下述結構式的化合物（I )，
[0008] 所述的化合物（I )的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將粘毛鼠尾草干燥全草 粉碎，用75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用75%乙醇洗脫8 個柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟（b)中75%乙醇 洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、50 :1、35:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟（c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為 20:1、12:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟（d)中組分2用十八 烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10 個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I )。
[0009] 進一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0010] 進一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為80%。
[0011] 一種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學上可接受的載 體。
[0012] 所述的化合物（I )在制備治療腎癌的藥物中的應用。
[0013] 所述的藥物組合物在制備治療腎癌的藥物中的應用。
[0014] 本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0015] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I )，其余為藥物學上可接受的、 對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0016] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質體或乳劑等。
[0017] 說明書附圖 圖1為化合物（I)結構式； 圖2為化合物（I )理論E⑶值與實驗E⑶值比較。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合實施例進一步說明本發(fā)明的實質性內容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術方案的實質和范圍。
[0019] 實施例1 :化合物（I )分離制備及結構確證 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學試 劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0020] 制備方法：（a )將粘毛鼠尾草干燥全草（8kg )粉碎，用80%乙醇熱回流提取 (25LX3次)，合并提取液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油醚（3LX3次)、乙酸乙酯（3LX3 次)和水飽和的正丁醇（3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（355g)和 正丁醇萃取物；（b)步驟（a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗 脫6個柱體積，再用75%乙醇洗脫8個柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇 洗脫物浸膏（136g) ;(c)步驟（b)中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為 80:1 (8個柱體積)、50:1 (8個柱體積)、35:1 (6個柱體積)、15:1 (8個柱體積）和1:1 (5 個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟（c)中組分4 (31g)用正相 硅膠進一步分離，依次用體積比為20:1 (8個柱體積)、12:1 (10個柱體積)和5:1 (6個柱 體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟（d)中組分2 (Ilg)用十八烷基 硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個柱 體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I ) (37mg)。
[0021] 結構確證：HR-ES頂S顯示[M+Na]+為m/z 419. 1704,結合核磁特征可得分子式 為C2qH28O8,不飽和度為7。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δ η (ppm, DMSO-厶 500MHz) :H-1 (5.78， overlap)，H-2 (1.85，m)，H-2 (L77，m)，H-3 (1.50，m)，H-5 (2.88，d，方5·2)，Η-6 (6.04， d，方5.2)，H-9 (2· 68, overlap)，H-Il (4.54, br，s)，H-12 (2· 69, overlap)，H-12 (2.41， dd，^14.1，5.7)，H-14(3.58，d，^10.4)，H-14(2.09，d，^10.4)，H-15(5.78,overlap)， H-17 (5. 70, br，s)，H-17 (5. 55, br，s)，H-18 (I. 01，s)，H-19 (3. 97, d，方8. 7)，H-19 (3. 37, d，方8. 7)，H-20 (4. 39, d，方8. 8)，H-20 (4. 17, d，方8. 8)，6-OH (4. 52, s)，13-OH (4.77, s)，15-OH (7.58, s)，19-OH (4.24, s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù) Sc (ppm，DMSO-成， 125Hz):77.7 (CH，1-C)，22.8 (CH2,2-C)，28.7 (CH2,3-C)，41.9 (C，4-C)，54.0 (CH，5-C)， 111. I (CH，6-C)，174. 4 (C，7-C)，51. 6 (C，8-C)，38. 9 (CH，9-C)，50.1 (C，10-C)，66. 4 (CH， 11-C)，52.3 (CH2，12-C)，75.5 (C，13-C)，40.9 (CH2，14-C)，77.4 (CH，15-C)，161.6 (C， 16-C)，107.4 (CH2，17-C)，30.7 (CH3，18-C)，76.8 (CH2，19-C)，71.9 (CH2,20-C);碳原子標 記參見圖1。13C NMR和DEPT譜顯示該化合物含有一個甲基，七個亞甲基（二個含氧和一個 烯烴)，六個次甲基（四個含氧)，六個季碳(一個含氧，一種烯烴以及一個內酯羰基碳)，因此 表明該化合物是6, 7-開環(huán)-ent-kauranoid-1, 8-內酯結構。此外，13位碳上連