本發(fā)明涉及生物，具體是涉及一種基于玻璃載體和低溫真空的pcr試劑干燥方法、微流控芯片。

背景技術(shù)：

1、poct(point-of-care?testing)是指即時(shí)檢驗(yàn)，它可以在醫(yī)療現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)出患者的某些生化、免疫或者傳染性指標(biāo)，以便及時(shí)診斷和治療。最早僅應(yīng)用在血糖、血?dú)夥治龅壬贁?shù)項(xiàng)目，目前已拓寬至更廣泛的領(lǐng)域，如心肌標(biāo)志物、腫瘤標(biāo)志物、細(xì)菌或病毒核酸等。poct的優(yōu)勢(shì)在于快速、簡(jiǎn)便、便攜，可以減少患者等待時(shí)間，提高醫(yī)療效率。為了滿足poct的要求，一般會(huì)將試劑預(yù)存在poct的產(chǎn)品中，減少使用過(guò)程中的人工操作的時(shí)間。

2、poct分子診斷的產(chǎn)品常采用pcr檢測(cè)方法。pcr試劑通常采用鼓風(fēng)干燥箱烘干或者凍干機(jī)凍干的方式實(shí)現(xiàn)預(yù)存。凍干機(jī)凍干試劑成本昂貴，操作繁瑣，且凍干試劑極易受潮，產(chǎn)品加工環(huán)境要求苛刻；鼓風(fēng)干燥試劑雖然較凍干機(jī)凍干方法成本減少，但試劑烘干溫度高，烘干時(shí)間長(zhǎng)，1μl～30μl反應(yīng)體系烘干需要在溫度4℃～80℃下烘干時(shí)間15min～120min，長(zhǎng)時(shí)間的高溫烘干影響試劑性能。

3、上述兩種常用方法均存在一定問(wèn)題，因此發(fā)明一種成本低加工簡(jiǎn)單，且能夠保證試劑性能的方法很有必要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的第一目的是提供一種基于玻璃載體和低溫真空的pcr試劑干燥方法，用于解決現(xiàn)有試劑干燥方法成本高，加工復(fù)雜，干燥后試劑性能下降的問(wèn)題。

2、本發(fā)明的第二目的是提供一種微流控芯片，包括蓋板，蓋板為使用上述一種基于玻璃載體和低溫真空的pcr試劑干燥方法進(jìn)行試劑干燥的玻璃制備而成。

3、為了實(shí)現(xiàn)上述的第一目的，本發(fā)明提供的一種基于玻璃載體和低溫真空的pcr試劑干燥方法，包括以下步驟：

4、(1)烘干前準(zhǔn)備：

5、激光修飾：對(duì)已經(jīng)進(jìn)行鍍膜疏水處理的玻璃的局部進(jìn)行激光修飾，進(jìn)行激光修飾的部分為擴(kuò)增反應(yīng)區(qū)域；

6、恒溫預(yù)熱：將已經(jīng)進(jìn)行激光修飾的玻璃在4℃～37℃下恒溫浴10min～30min進(jìn)行預(yù)熱；

7、制備試劑：配制pcr試劑；

8、(2)烘干處理

9、滴加試劑：將已經(jīng)預(yù)熱好的玻璃激光修飾過(guò)的面朝上放置于4℃～37℃的恒溫臺(tái)上，在擴(kuò)增反應(yīng)區(qū)域滴加制備好的pcr試劑；

10、真空干燥：將滴加pcr試劑的玻璃在-100kpa～-90kpa、4℃～37℃下真空干燥10s～120s。

11、由上述方案可見(jiàn)，烘干前對(duì)玻璃進(jìn)行激光修飾，使擴(kuò)增反應(yīng)區(qū)域的玻璃親水性增強(qiáng)，后續(xù)試劑滴落后可以自然攤平，試劑均一性高。對(duì)玻璃進(jìn)行恒溫預(yù)熱，后續(xù)操作玻璃也置于恒溫臺(tái)上，降低室溫對(duì)試劑干燥的影響，減少批次間的差異，試劑干燥可重復(fù)性高。在-100kpa至-90kpa、4℃～37℃下真空干燥下進(jìn)行干燥10s～120s，試劑干燥效率高，干燥在低溫下進(jìn)行，對(duì)試劑性能不產(chǎn)生影響，試劑性能良好。同時(shí)干燥后的試劑成玻璃態(tài)，具有一定的耐潮性。且本發(fā)明的干燥方法無(wú)需專用設(shè)備儀器，成本低，操作簡(jiǎn)單。

12、進(jìn)一步的方案是，烘干處理還包括滴加保護(hù)劑的步驟，滴加保護(hù)劑的步驟在真空干燥的步驟后進(jìn)行，滴加保護(hù)劑的步驟具體為：

13、將真空干燥后的玻璃置于4℃～37℃的恒溫臺(tái)上，在擴(kuò)增反應(yīng)區(qū)域滴加2μl～15μl液封保護(hù)劑。

14、由上述方案可見(jiàn)，烘干后采用液封保護(hù)劑滴于形成玻璃態(tài)的試劑上，盡可能隔絕空氣。

15、進(jìn)一步的方案是，滴加保護(hù)劑的步驟為將真空干燥后的玻璃置于35℃的恒溫臺(tái)上，在擴(kuò)增反應(yīng)區(qū)域滴加4μl液封保護(hù)劑。

16、由上述方案可見(jiàn)，滴加保護(hù)劑減少試劑干燥后試劑與空氣的接觸，降低空氣和濕度對(duì)試劑影響，起到液態(tài)密封的效果。滴加保護(hù)劑的量適中使保護(hù)劑可附著在預(yù)存干燥試劑的玻璃上，滴加保護(hù)劑后直接用于芯片制作。

17、進(jìn)一步的方案是，液封保護(hù)劑為不溶于水的液態(tài)試劑，液封保護(hù)劑中包含礦物油。

18、由上述方案可見(jiàn)，上述液封保護(hù)劑對(duì)pcr反應(yīng)無(wú)影響，且能夠很好地隔絕空氣和水。

19、進(jìn)一步的方案是，激光修飾的步驟具體為使用激光修飾機(jī)對(duì)已經(jīng)進(jìn)行鍍膜疏水處理的玻璃的局部進(jìn)行激光修飾。

20、由上述方案可見(jiàn)，通過(guò)激光修飾機(jī)對(duì)玻璃進(jìn)行修飾，無(wú)需準(zhǔn)備額外專用設(shè)備，減少成本支出。修飾后玻璃擴(kuò)增反應(yīng)區(qū)域親水，一方面試劑滴落玻璃則自然攤平，確保試劑均一性的同時(shí)提高加工效率，無(wú)需人工攤平。另一方面攤平后試劑干燥面積大，試劑中的水分更容易蒸發(fā)，干燥效率高。

21、進(jìn)一步的方案是，pcr試劑包括引物、探針、dntps、鹽、緩沖液、干燥保護(hù)劑、酶和rna酶抑制劑中的一種或多種。

22、由上述方案可見(jiàn)，本發(fā)明的試劑干燥方法適用于多類(lèi)型pcr試劑，適用范圍廣。

23、進(jìn)一步的方案是，恒溫預(yù)熱的步驟為將已經(jīng)進(jìn)行激光修飾的玻璃在35℃下恒溫浴10min進(jìn)行預(yù)熱。

24、進(jìn)一步的方案是，滴加試劑的步驟為將已經(jīng)預(yù)熱好的玻璃激光修飾過(guò)的面朝上放置于35℃的恒溫臺(tái)上，在擴(kuò)增反應(yīng)區(qū)域滴加制備好的pcr試劑。

25、由上述方案可見(jiàn)，在恒溫下對(duì)玻璃進(jìn)行處理，降低室溫對(duì)試劑干燥的影響，降低干燥試劑的批次間的差異，提高試劑干燥的可重復(fù)性。

26、進(jìn)一步的方案是，真空干燥的步驟為將滴加pcr試劑的玻璃在-95kpa、35℃下真空干燥40s。

27、由上述方案可見(jiàn)，在真空狀態(tài)或低壓狀態(tài)下，試劑中的水分和其他揮發(fā)性組分的沸點(diǎn)降低，在較低溫度狀態(tài)下就可以脫離試劑表面而被真空泵抽走。避免了高溫對(duì)試劑性能造成影響。

28、為實(shí)現(xiàn)上述第二目的，本發(fā)明提供一種微流控芯片，包括蓋板，蓋板為使用上述任一方案的一種基于玻璃載體和低溫真空的pcr試劑干燥方法進(jìn)行試劑干燥的玻璃制備而成。

技術(shù)特征：

1.一種基于玻璃載體和低溫真空的pcr試劑干燥方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.如權(quán)利要求1所述的一種基于玻璃載體和低溫真空的pcr試劑干燥方法，其特征在于：

3.如權(quán)利要求2所述的一種基于玻璃載體和低溫真空的pcr試劑干燥方法，其特征在于：

4.如權(quán)利要求2所述的一種基于玻璃載體和低溫真空的pcr試劑干燥方法，其特征在于：

5.如權(quán)利要求1所述的一種基于玻璃載體和低溫真空的pcr試劑干燥方法，其特征在于：

6.如權(quán)利要求1所述的一種基于玻璃載體和低溫真空的pcr試劑干燥方法，其特征在于：

7.如權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的一種基于玻璃載體和低溫真空的pcr試劑干燥方法，其特征在于：

8.如權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的一種基于玻璃載體和低溫真空的pcr試劑干燥方法，其特征在于：

9.如權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的一種基于玻璃載體和低溫真空的pcr試劑干燥方法，其特征在于：

10.微流控芯片，包括蓋板，所述蓋板為使用如權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的一種基于玻璃載體和低溫真空的pcr試劑干燥方法進(jìn)行試劑干燥的玻璃制備而成。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一種基于玻璃載體和低溫真空的PCR試劑干燥方法、微流控芯片，包括以下步驟：激光修飾：對(duì)已經(jīng)進(jìn)行鍍膜疏水處理的玻璃的局部進(jìn)行激光修飾，進(jìn)行激光修飾的部分為擴(kuò)增反應(yīng)區(qū)域；恒溫預(yù)熱：將已經(jīng)進(jìn)行激光修飾的玻璃在4℃～37℃下恒溫浴10min～30min進(jìn)行預(yù)熱；制備試劑：配制PCR試劑；滴加試劑：將已經(jīng)預(yù)熱好的玻璃激光修飾過(guò)的面朝上放置于4℃～37℃的恒溫臺(tái)上，在擴(kuò)增反應(yīng)區(qū)域滴加制備好的PCR試劑；真空干燥：將滴加好PCR試劑的玻璃在?100kPa～?90kPa、4℃～37℃下真空干燥10s～120s，干燥完成后滴加液封保護(hù)劑，用于制備微流控芯片。上述干燥方法試劑干燥效率高，試劑性能良好，試劑均一性高，試劑加工效率高，試劑干燥可重復(fù)性高。

技術(shù)研發(fā)人員：陳天藍(lán),孫韻,劉新紅,劉偉健
受保護(hù)的技術(shù)使用者：珠海市迪奇孚瑞生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/5