本發(fā)明屬于藥毒物篩查，具體涉及一種采用液相色譜質譜對常見藥毒物進行高通量篩查的方法。

背景技術：

1、在法醫(yī)毒理學、臨床毒理學以及藥物濫用監(jiān)測等領域，對常見藥毒物的快速、準確篩查具有重要意義，傳統(tǒng)的篩查方法，如氣相色譜法、免疫分析法等，雖然在一定程度上能夠滿足檢測需求，但往往存在操作繁瑣、靈敏度有限、檢測范圍狹窄等問題，隨著液相色譜質譜(lc-ms/ms)技術的不斷發(fā)展，其高靈敏度、高分辨率、高選擇性的優(yōu)勢逐漸顯現(xiàn)，成為藥毒物篩查的重要工具。

2、然而，現(xiàn)有的lc-ms/ms篩查方法在實際應用中仍存在一些挑戰(zhàn)，例如，方法涵蓋的目標物數(shù)量有限，僅適用于少量藥毒物檢驗，在非正常死亡案(事)件毒物排查工作中易造成漏檢；標準物質的配制和稀釋過程可能引入誤差，影響工作曲線標準溶液的精確性；樣品制備過程中，蛋白質的沉淀和過濾效率直接影響樣品的純凈度和分析結果的準確性；色譜柱的選擇、流動相的配置以及梯度洗脫條件的優(yōu)化等，都對分離效果和檢測靈敏度有著至關重要的影響，此外，數(shù)據(jù)處理和分析方法的準確性和可靠性也是確保篩查結果可信的關鍵因素，為此，本發(fā)明經(jīng)深入調研，系統(tǒng)總結，將涵蓋殺蟲劑、除草劑、殺鼠劑、殺菌劑、抗生素、傳統(tǒng)毒品、新精神活性物質、食品添加劑、動植物激素、有毒動植物成分以及其它合成類藥物(包括降糖/降壓/降脂/心血管類藥物與安眠鎮(zhèn)靜藥物等)共計510種常見毒害物質納入目標藥物范疇，建立常見毒藥物成分的高通量液相色譜-串聯(lián)質譜篩查方法，為涉毒案(事)件中毒物成分的確定及非正常死亡案(事)件中常規(guī)毒物的排查工作提供靈敏高效的檢測手段。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于以高通量篩查為目標，建立510種常見種毒藥物成分的液相色譜-串聯(lián)質譜篩查方法，為涉毒案(事)件中毒物成分的確定及非正常死亡案(事)件中常規(guī)毒物的排查工作提供靈敏高效的檢測手段。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：

3、一種采用液相色譜質譜對常見藥毒物進行高通量篩查的方法，包括：

4、步驟一：對溶液進行配制，使用甲醇將固體標準物質配制成濃度為1mg/ml的標準物質儲備液，并將所述標準物質儲備液或商品化的其它濃度標準物質溶液逐級稀釋，得到一系列濃度的工作曲線標準溶液，所述濃度為5μg/ml至1.0ng/ml之間的多個梯度；

5、步驟二：對樣品進行制備，取空白血液700μl，加入不同濃度的工作曲線標準溶液300μl，混勻，并進行沉淀蛋白、離心和過膜操作，得到具有一系列濃度的加標樣品；

6、步驟三：采用omega,po?l?arc18色譜柱，所述進樣量為2μl，并使用含有2mm醋酸銨和0.1％或0.001％甲酸的甲醇和水作為流動相，進行梯度洗脫；

7、步驟四：采用專用軟件進行數(shù)據(jù)平滑、背景扣除、平峰識別等預處理操作，以提高數(shù)據(jù)分析的準確性和可靠性，并采用外標法進行定量分析，同時考慮校正曲線的線性范圍、相關系數(shù)和截距等參數(shù)，以確保定量結果的準確性。

8、優(yōu)選的，在所述步驟一中，將所述標準物質儲備液或商品化的其它濃度標準物質溶液逐級稀釋至濃度為100ng/ml，得到用于分時間段多反應監(jiān)測模式方法優(yōu)化與二級全掃描建庫的標準物質樣品；

9、在所述步驟一中，在逐級稀釋過程中，引入質量控制樣品，在每個稀釋級別制備額外的qc樣品，用于驗證稀釋過程的準確性和一致性，同時記錄每次稀釋后的溶液體積和濃度，確保工作曲線標準溶液的精確制備。

10、優(yōu)選的，在所述步驟三中，還包括采用esi模式、分時間段多反應監(jiān)測模式或分時間段多反應檢測－信息依賴采集－子離子增強模式，設置噴霧電壓、氣簾氣、霧化氣、輔助氣、輔助氣溫度以及epi碰撞能量等參數(shù)；

11、在所述步驟三中，還包括采用自動化參數(shù)優(yōu)化軟件，以快速找到最佳質譜條件，同時采用數(shù)據(jù)依賴采集策略，以在單次分析中同時獲取目標化合物的多級質譜信息。

12、優(yōu)選的，在所述步驟四中，對所述數(shù)據(jù)進行預處理的軟件為jade、hi?ghscore和topas；

13、在所述步驟四中，還包括通過對比不同批次實驗的結果、分析qc樣品的穩(wěn)定性和重復性，以及采用其他分析方法進行交叉驗證，以評估本方法的準確性和可靠性。

14、優(yōu)選的，在所述步驟二中，還包括使用乙腈沉淀蛋白，離心后取上清液，通過0.22μm有機系濾膜過濾，供液相色譜－質譜分析。

15、優(yōu)選的，所述標準物質包括毒品類標準物質和其他類藥毒物，所述實驗用水為超純水，在所述步驟二中，所述樣品制備的離心條件為10000rpm，所述離心時間為5min。

16、優(yōu)選的，所述該方法還包括利用mrm-ida-epi模式獲取目標物的二級全碎裂譜，并建立二級全掃描指紋譜庫。

17、優(yōu)選的，在所述步驟三中，還包括使用液相色譜系統(tǒng)對樣品進行分離、使用質譜系統(tǒng)對經(jīng)液相色譜分離后的樣品進行檢測和對目標物進行定性時，采用兩對母離子－子離子對和保留時間進行確認；

18、其中，分離介質采用反相介質，選自c18、c8、cn或苯基中的一種或多種；所述流動相a為含醋酸銨和甲酸的甲醇溶液，所述醋酸銨濃度為2mm，所述甲酸濃度為0.001％至0.1％v/v；所述流動相b為含醋酸銨和甲酸的水溶液，所述醋酸銨濃度為2mm，所述甲酸濃度為0.001％至0.1％v/v；所述流速為0.3ml/min，所述柱溫設置為室溫40℃；

19、所述監(jiān)測方式為分時間段多反應監(jiān)測；所述離子源為電噴霧離子源；所述掃描方式為正離子或負離子掃描；所述電噴霧電壓設定為5500v/-4500v；所述霧化氣為氮氣，流速設定為55ps?i；所述氣簾氣為氮氣，流速設定為30ps?i；所述輔助氣溫度設置為550℃。

20、優(yōu)選的，所述該方法能夠對至少510種常見藥毒物進行篩查，所述藥毒物包括但不限于阿片類、苯丙胺類、可卡因類、苯二氮類和巴比妥類安眠，以及一些常見藥物、生物堿、有機磷類、氨基甲酸酯類、擬除蟲菊酯類繼而有機氯類殺蟲劑。

21、優(yōu)選的，所述該方法還包括建立目標物的二級全掃描指紋譜庫，以兩個母離子－子離子對和保留時間作為篩選依據(jù)，當篩選分析出現(xiàn)可疑色譜峰時，進行mrm-ida-epi掃描分析，通過已建立的各類化合物的二級全掃描指紋譜庫進行確認。

22、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：

23、通過精心設計的標準物質配制和稀釋過程，引入了質量控制樣品以驗證稀釋過程的準確性和一致性，從而確保了工作曲線標準溶液的精確制備，同時，采用高靈敏度的lc-ms/ms技術和優(yōu)化的色譜分離條件，顯著提高了檢測靈敏度和準確性；

24、本發(fā)明的方法能夠對至少510種常見藥毒物進行篩查，包括但不限于阿片類、苯丙胺類、可卡因類、苯二氮類和巴比妥類安眠藥物，以及一些常見藥物、生物堿、有機磷類、氨基甲酸酯類、擬除蟲菊酯類和有機氯類殺蟲劑等，這大大拓寬了檢測范圍，滿足了不同領域的檢測需求；

25、在樣品制備過程中，采用乙腈沉淀蛋白和離心過濾的方法，有效去除了蛋白質等雜質，提高了樣品的純凈度，同時，通過精細的離心條件控制，確保了樣品制備的一致性和穩(wěn)定性；

26、采用專用軟件進行數(shù)據(jù)平滑、背景扣除、平峰識別等預處理操作，并采用外標法進行定量分析，同時，通過對比不同批次實驗的結果、分析qc樣品的穩(wěn)定性和重復性，以及采用其他分析方法進行交叉驗證，進一步增強了數(shù)據(jù)處理和分析的可靠性和準確性；

27、利用mrm-ida-epi模式獲取目標物的二級全碎裂譜，并建立二級全掃描指紋譜庫，這為實現(xiàn)未知樣品的快速篩查和準確鑒定提供了有力支持。