阿卡波糖及其制劑的高效液相色譜分析方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物新技術領域，涉及一種治療胰島素依賴型或非依賴型糖尿病的藥物阿卡波糖及其制劑分析測定方法，具體的說是阿卡波糖及其制劑的高效液相色譜分析方法。
【背景技術】
[0002]根據文獻報道及國家藥品標準，測定阿卡波糖及其制劑采用高效液相分析方法有:
1、國家藥品標準收載的阿卡波糖含量方法照高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)。
[0003]色譜條件與系統適應性試驗用氨基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-磷酸鹽緩沖液(70:30)為流動相；流速為2ml/min ;柱溫35°C，檢測波長為210nm。稱取20mg阿卡波糖對照品適量，用水超聲振搖溶解制成每Iml中含Img的溶液，取上述溶液25ml置50ml量瓶中，用0.lmol/L氫氧化鈉溶液1ml，搖勻，室溫放置8小時后，用0.lmol/L鹽酸溶液1ml，加水至刻度作為系統適用性溶液。取此液10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，阿卡波糖峰與其降解產物峰之間的分離度不得小于1.3，出峰順序為阿卡波糖堿降解產物峰和阿卡波糖峰。
[0004]測定法精密稱取本品約10mg，置1ml量瓶中，加水溶解稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 μ I注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿卡波糖對照品適量，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。
[0005]2、國家藥品標準收載的阿卡波糖有關物質方法照高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)。
[0006]色譜條件與系統適應性試驗用氨基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-磷酸鹽緩沖液(70:30)為流動相；流速為2ml/min ;柱溫35°C，檢測波長為210nm。稱取20mg阿卡波糖對照品適量，用水超聲振搖溶解制成每Iml中含Img的溶液，取上述溶液25ml置50ml量瓶中，用0.lmol/L氫氧化鈉溶液1ml，搖勻，室溫放置8小時后，用0.lmol/L鹽酸溶液1ml，加水至刻度作為系統適用性溶液。取此液10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，阿卡波糖峰與其降解產物峰之間的分離度不得小于1.3，出峰順序為阿卡波糖堿降解產物峰和阿卡波糖峰。
[0007]測定法取本品適量，精密稱定，加水制成每Iml中含Img的溶液，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液適量，加水稀釋成每Iml中含0.04mg的溶液作為對照溶液。取對照溶液20 μ I注入液相色譜儀，調節(jié)檢測靈敏度，使主成份色譜峰的峰高約為記錄儀滿量程的10°/Γ15%，再精密量取供試品溶液和對照溶液各20 μ 1，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成份峰保留時間的2倍。供試品溶液色譜圖中如顯雜質峰，各雜質面積的和不得大于對照溶液主成份峰面積，單個雜質峰面積不得大于對照溶液主成份峰面積的3/8。
[0008]3、國家藥品標準收載的阿卡波糖片含量方法照高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)。
[0009]色譜條件與系統適應性試驗用氨基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-磷酸鹽緩沖液(70:30)為流動相；流速為2ml/min ;柱溫35°C，檢測波長為210nm。理論塔板數按阿卡波糖峰計不得低于2500，組分A相對保留時間為0.9，應與主峰完全分離，阿卡波糖峰的保留時間約為If 18分鐘。
[0010]測定法取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取細粉適量(約相當于阿卡波糖250mg)，置25ml量瓶中，加水約15ml，超聲處理10分鐘，加水稀釋至刻度，搖勻，用濾膜濾過，取續(xù)濾液10 μ I注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿卡波糖對照品適量，同法測定，按外標法以峰面積計算。
[0011]4、國家藥品標準收載的阿卡波糖片有關物質方法照高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)。
[0012]色譜條件與系統適應性試驗用氨基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-磷酸鹽緩沖液(70:30)為流動相；流速為2ml/min ;柱溫35°C，檢測波長為210nm。理論塔板數按阿卡波糖峰計不得低于2500，組分A相對保留時間為0.9，應與主峰完全分離，阿卡波糖峰的保留時間約為If 18分鐘。
[0013]測定法取含量測定項下的供試品溶液作為供試品溶液。另精密量取供試品溶液Iml，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，作為對照溶液。取對照溶液10 μ I注入液相色譜儀，調節(jié)檢測靈敏度，使主成份色譜峰的峰高約為記錄儀滿量程的25%，再精密量取供試品溶液和對照溶液各10 μ 1，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成份峰保留時間的2倍。
[0014]已知副產物組分2、B、A、C、4A、4B、4C的相對保留時間分別為0.5,0.8,0.9，1.2，1.8,2.0,2.3。除主成份及以上副產物以外的其他單個未知雜質峰面積不得大于對照溶液主成份峰面積的1/2。未知雜質峰面積之和不得大于對照溶液主成份峰面積，已知副產物A的峰面積不得大于對照溶液主成份峰面積的1.2倍。
[0015]5、歐洲藥典、美國藥典及英國藥典收載的阿卡波糖有關物質方法
色譜條件與系統適應性試驗用氨基硅烷鍵和硅膠為填充劑(5 μ m，4.0_X 250mm)色譜柱，柱溫35°C，流動相:乙腈-磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鉀0.60g，磷酸氫二鈉二水合物0.35g，加 100ml 水使溶解)(75:25)。流速為 2.0ml/min，
檢測波長為210nm。進樣量為10 μ 1，記錄色譜圖至阿卡波糖主峰保留時間的2.5倍。
[0016]精密稱取0.200g阿卡波糖用去二氧化碳的水溶解，并稀釋至1ml作為供試品溶液；用5ml去二氧化碳的水溶解I瓶阿卡波糖CRS作為對照溶液(a);稱取20mg阿卡波糖峰鑒別對照品(含雜質A，B, C，D, E, F，H，G)，用Iml去二氧化碳的水溶解作為對照溶液(b);量取1.0ml供試品溶液，用去二氧化碳的水稀釋至10ml作為對照溶液(C)。對照溶液(b)色譜圖中，雜質A的峰高和雜質A與主峰見的峰谷比值不小于1.2。
[0017]以上有關物質及含量的分析方法，流動相的pH值顯弱堿性，所用的氨基柱阿卡波糖主峰保留時間不穩(wěn)定，逐漸向后漂移。為解決阿卡波糖主峰漂移的問題，我們后摸索出一套適合阿卡波糖及制劑有關物質和含量測定的分析方法。該方法快速簡便，精密度高，穩(wěn)定性好,結果準確,重復性試驗及含量回收率試驗RSD均小于2.0%,最低檢出量(s/n=3)為
0.40ng/ml。
[0018]

【發(fā)明內容】

[0019]本發(fā)明目的在于提供一種穩(wěn)定性好、重現性好、操作簡單，用于阿卡波糖及其制劑的分析測定方法。
[0020]本發(fā)明解決上述技術問題所采取的技術方案是:本方法是采用高效液相分離與紫外檢測串聯的方式對阿卡波糖及其制劑進行分析檢測；將阿卡波糖及其制劑用水溶解稀釋成每Iml中含阿卡波糖0.5mg?50mg的溶液作為供試品溶液,進樣體積1?100 μ I,采用采用固定相氨基硅烷鍵合硅膠色譜柱，流動相為乙腈-磷酸鹽溶液，其中所述的流動相中含乙腈的體積比例范圍為50°/Γ90%，含磷酸鹽溶液的體積比例范圍為10°/Γ50%，流動相流速為
0.5^3.0ml/min ;紫外檢測波長200nnT230nm，對阿卡波糖及其制劑的有關物質和含量進行測