一種氟醚菌酰胺殘留量的lc-ms/ms測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種氟醚菌酰胺殘留量的LC-MS/MS測(cè)定方法，更具體地說是采用液 相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS)定性定量測(cè)定糧谷、豬肉、牛肉、羊肉、雞肉等動(dòng)物肌肉及制品 等復(fù)雜基質(zhì)的動(dòng)植物源性食品中殘留的氟醚菌酰胺含量的方法，屬于農(nóng)藥殘留量的測(cè)定技 術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 雙酰胺類殺蟲劑是近年來全球熱門的殺蟲劑產(chǎn)品，可廣泛應(yīng)用于水稻、蔬菜、棉花 等作物的害蟲控制，具有低毒、環(huán)境安全、高活性等優(yōu)點(diǎn)，包括氯蟲苯甲酰胺、氰蟲酰胺、氟 蟲雙酰胺等品種，氟醚菌酰胺（SYP-9080)是由中化集團(tuán)下屬沈陽化工研宄院研發(fā)、中化農(nóng) 化有限公司經(jīng)營(yíng)的新產(chǎn)品，我國(guó)首個(gè)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的雙酰胺類殺蟲劑，已獲得國(guó)家農(nóng) 業(yè)部的臨時(shí)登記。
[0003] 氟醚菌酰胺（SYP-9080)屬于魚尼丁受體激活劑類殺蟲劑，其通過與害蟲體內(nèi)魚 尼丁受體結(jié)合，打開鈣離子通道，使儲(chǔ)存在細(xì)胞內(nèi)的鈣離子持續(xù)釋放到肌漿中，鈣離子和肌 漿中基質(zhì)蛋白結(jié)合，引起肌肉持續(xù)收縮。昆蟲體癥狀表現(xiàn)為抽搐、拒食，最終死亡。氟醚菌 酰胺為低毒、廣譜殺蟲劑，對(duì)鱗翅目害蟲均具有很好的活性。防治對(duì)象包括稻縱卷葉螟、二 化螟、小菜蛾、甜菜夜蛾、玉米螟、甘蔗螟、小卷蛾、食心蟲等。
[0004] 隨著氟醚菌酰胺的登記、推廣和使用，有關(guān)氟醚菌酰胺殘留消解動(dòng)態(tài)及最終殘留 量等環(huán)境行為的研宄勢(shì)必增加，同時(shí)，作為我國(guó)主要出口市場(chǎng)的歐盟、日本等國(guó)家規(guī)定若田 間使用農(nóng)藥沒有在該國(guó)家登記，沒有制定相應(yīng)的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，出口至其國(guó)家的食品農(nóng) 產(chǎn)品包括畜禽肉等動(dòng)物源性食品中殘留限量均實(shí)行0. 〇lmg/L的"一律標(biāo)準(zhǔn)"。
[0005] 迄今為止，未見國(guó)內(nèi)外有關(guān)于食品農(nóng)產(chǎn)品中氟醚菌酰胺殘留量檢測(cè)方法的報(bào)道， 使用LC-MS/MS測(cè)定食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，由于糧谷、動(dòng) 物源性食品等食品農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)比較復(fù)雜，須建立凈化效果良好的樣品前處理方法才能滿足 檢測(cè)要求，因此建立簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、耐用、能準(zhǔn)確定性和定量分析蔬菜和水果中氟醚菌酰 胺殘留量的LC-MS/MS檢測(cè)方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種氟醚菌酰胺殘留量的LC-MS/MS測(cè)定方法，主要用于測(cè) 定糧谷、動(dòng)物源性食品等復(fù)雜基質(zhì)食品農(nóng)產(chǎn)品中氟醚菌酰胺殘留量。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種氟醚菌酰胺殘留量的LC-MS/ MS測(cè)定方法，包括如下步驟：
[0008] (1)提取 稱取粉碎樣品于具塞離心管中，加入適量水復(fù)蘇后，定量加入乙腈或含1 %乙酸的乙 腈溶液均質(zhì)或振蕩超聲提取，然后加入氯化鈉或乙酸鈉中的一種和無水硫酸鎂，劇烈渦旋 Imin后離心。
[0009] (2)凈化 移取一定體積樣品提取液，濃縮至ImL左右，經(jīng)C18/PSA固相萃取柱凈化，乙腈洗脫，收 集洗脫液，用乙腈定容，取定容液過膜后，待液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS)檢測(cè)；
[0010] ⑶標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含氟醚菌酰胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理，得樣品提取凈化 液，用空白提取凈化液配制成至少3個(gè)濃度的氟醚菌酰胺系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液；
[0011] ⑷液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS)測(cè)定 將步驟（3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行LC-MS/MS測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜 峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；在相同條件下將步驟（2)中凈化 后的樣品液注入LC-MS/MS進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得樣品液中氟醚菌酰胺的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲 線，得到樣品液中氟醚菌酰胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣品中氟 醚菌酰胺殘留量。
[0012] 步驟（1)中樣品若為糧谷及動(dòng)物肝臟等含水量較少的樣品，提取前須加適量水充 分浸潤(rùn)。
[0013] 步驟（1)中米用乙腈提取時(shí)加入氯化鈉鹽析，米用含1 %乙酸的乙腈溶液提取時(shí) 加入乙酸鈉鹽析。
[0014] 步驟⑵中進(jìn)行C18/PSA固相萃取凈化，乙腈洗脫時(shí)，洗脫體積為6~8mL。
[0015] 步驟⑷中液相色譜的流動(dòng)相為：含5mmol/L乙酸銨的水溶液和乙腈，流速 0. 2-0. 4mL/min，進(jìn)樣量 5 μ L。
[0016] 步驟（4)中液相色譜使用梯度洗脫的方法，梯度洗脫程序?yàn)椋?br>【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種氟醚菌酰胺殘留量的LC-MS/MS測(cè)定方法，其特征在于，所述方法包括以下步 驟： (1) 提取 稱取混勻樣品于具塞離心管中，加適量水后，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均質(zhì)或 振蕩超聲提取后，加入氯化鈉或乙酸鈉中的一種和無水硫酸鎂，劇烈渦旋Imin后離心； (2) 凈化 移取一定體積樣品提取液，濃縮至ImL左右，經(jīng)C18/PSA固相萃取柱凈化，乙腈洗脫，收 集洗脫液，用乙腈定容，取定容液過膜后，待液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS)檢測(cè)； (3) 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含氟醚菌酰胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理，得樣品提取凈化 液，用空白提取凈化液配制成至少5個(gè)濃度的氟醚菌酰胺系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液； (4) 測(cè)定和結(jié)果計(jì)算 將步驟（3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行LC-MS/MS測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰 面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；在相同條件下將步驟（2)中凈 化后的樣品液注入LC-MS/MS進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得樣品液中氟醚菌酰胺的色譜峰面積，代入基質(zhì) 標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品液中氟醚菌酰胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣 品中氟醚菌酰胺殘留量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種氟醚菌酰胺殘留量的LC-MS/MS測(cè)定方法，其特征在于， 步驟（1)中樣品若為糧谷及動(dòng)物肝臟等含水量較少的樣品，提取前須加適量水充分浸潤(rùn)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種氟醚菌酰胺殘留量的LC-MS/MS測(cè)定方法，其特征在于， 步驟⑴中采用乙腈提取時(shí)需加入氯化鈉鹽析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取時(shí)需加入 乙酸鈉鹽析。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種氟醚菌酰胺殘留量的LC-MS/MS測(cè)定方法，其特征在于， 步驟⑵中進(jìn)行C18/PSA固相萃取凈化，乙腈洗脫時(shí)，洗脫體積為6~8mL。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蔬菜和水果中氟醚菌酰胺殘留量的LC-MS/MS測(cè)定方 法，其特征在于，步驟（4)中LC-MS/MS的液相色譜分析條件為：填料為C 18的色譜柱，柱溫為 30°C;進(jìn)樣體積為5 μ L ;流動(dòng)相為：含5mmol/L乙酸銨的水溶液和乙腈，梯度洗脫；梯度洗脫 程序?yàn)椋?br>質(zhì)譜條件為：電噴霧質(zhì)譜檢測(cè)；電噴霧電壓為-3500至-4500V ;霧化氣壓力為 275. 9kPa ;干燥氣和鞘氣均為氮?dú)猓桓稍餁鉁囟葹?00°C ;干燥氣流速為5. OL/min ;鞘氣溫 度為250°C，鞘氣流速為11. OL/min，噴嘴電壓500V，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM)負(fù)離子掃描模式；氟 醚菌酰胺的母離子為414. 4~415. 4,子離子分別為163. 3~164. 3和178. 4~179. 4。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種氟醚菌酰胺殘留量的LC-MS/MS測(cè)定方法，該方法主要用于測(cè)定糧谷、動(dòng)物源性食品等復(fù)雜基質(zhì)食品農(nóng)產(chǎn)品中殘留的氟醚菌酰胺含量的方法。用乙腈或含1%乙酸的乙腈溶液均質(zhì)提取樣品中殘留的氟醚菌酰胺，C18/PSA固相萃取柱凈化后，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）檢測(cè)，采用不含待測(cè)農(nóng)藥的空白基質(zhì)溶液建立校正的標(biāo)準(zhǔn)曲線，外標(biāo)法定量。本方法平均回收率為83.1%～89.5%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為4.0%～6.3%，檢出限低于0.12μg/kg，具有操作簡(jiǎn)便、快速、去雜效果好、靈敏度高、重復(fù)性好、定性定量準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。能滿足0.01mg/kg殘留限量的“一律標(biāo)準(zhǔn)”技術(shù)要求，為保障我國(guó)人民食品安全、對(duì)外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【IPC分類】G01N30-06, G01N30-88
【公開號(hào)】CN104730191
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510109791
【發(fā)明人】崔淑華, 李瑞娟, 張曉梅
【申請(qǐng)人】崔淑華
【公開日】2015年6月24日
【申請(qǐng)日】2015年3月12日