一種舒肝丸中川楝子的含量測(cè)定方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種舒肝丸中川楝子的含量測(cè)定方法。該方法采用UPLC?MS/MS法測(cè)定舒肝丸中川楝子的含量，方法靈敏，準(zhǔn)確，可用于舒肝丸的質(zhì)量控制。
【專利說(shuō)明】
一種舒肝丸中川楝子的含量測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及到一種舒肝丸中川楝子的含量測(cè)定方法，屬中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體的，涉 及一種UPLC-MS/MS法測(cè)定舒肝丸中川楝子含量的測(cè)定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 舒肝丸為理氣劑，具有舒肝和胃，理氣止痛之功效。主治肝郁氣滯，胸肋脹滿，胃脘 疼痛，嘈雜嘔吐，噯氣泛酸。該藥物由川楝子、醋延胡索、片姜黃、白芍（酒炒）、沉香、枳殼 (炒）、木香、砂仁、陳皮、豆蔻仁、茯苓、姜厚樸、朱砂組成，藥效明確。舒肝丸(大蜜丸)標(biāo)準(zhǔn)最 早收錄在《中國(guó)藥典》1985年版，2000年版中增加水蜜丸規(guī)格，2005年版增加水丸規(guī)格，并對(duì) 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂，檢驗(yàn)內(nèi)容同現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)，2010年版第二增補(bǔ)本中增加小蜜丸規(guī)格，檢驗(yàn)內(nèi)容同 《中國(guó)藥典》2005年版，未作修定。該藥物現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為《中國(guó)藥典》2015年版，記載了該藥物的 組方、制法及質(zhì)量控制方法。該藥物所含藥味多，《中國(guó)藥典》2015年版中的含量測(cè)定項(xiàng)中， 樣品經(jīng)過(guò)復(fù)雜的處理過(guò)程后，僅對(duì)白芍中芍藥苷進(jìn)行了含量測(cè)定，舒肝丸處方中川楝子并 未進(jìn)行含量測(cè)定。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供了一種測(cè)定舒肝丸中川楝子的含量測(cè)定方法，本發(fā)明采用 超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(UPLC-MS/MS)法測(cè)定舒肝丸中川楝子的含量，該方法如下：
[0004] -種舒肝丸中川楝子的含量測(cè)定方法，該方法采用超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法， 其特征在于該含量測(cè)定方法如下：
[0005] 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相為乙腈-0.01 %至0.02%甲酸溶液，體 積比為31:69;流速為0.351111/1^11;采用三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器，電噴霧離子化負(fù)離子 模式下選擇質(zhì)荷比573離子進(jìn)行檢測(cè);理論板數(shù)按川楝素峰計(jì)算應(yīng)不低于6000-8000。
[0006] 對(duì)照品溶液的制備取川楝素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含0.001-1 yg的溶液，即得。
[0007] 供試品溶液的制備取舒肝丸水丸或水蜜丸適量，研細(xì)，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸適量，剪碎，取lg;或取濃縮丸適量，研細(xì)，取〇. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾 過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
[0008] 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各liil，注入液相色譜儀，測(cè)定，即 得。
[0009] 本發(fā)明含量測(cè)定方法中，流動(dòng)相優(yōu)選為乙腈-0.01 %甲酸溶液，體積比為31:69。
[0010] 本發(fā)明含量測(cè)定方法中，理論板數(shù)優(yōu)選為按川楝素峰計(jì)算應(yīng)不低于8000。
[0011] 本發(fā)明含量測(cè)定方法中，對(duì)照品溶液的制備優(yōu)選為取川楝素對(duì)照品適量，精密稱 定，加甲醇制成每lml含lyg的溶液，即得。
[0012] 本發(fā)明含量測(cè)定方法還優(yōu)選為：
[0013] 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相為乙腈-o .01 %甲酸溶液，體積比為31 :69;流速:0.35ml/min;采用三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器，電噴霧離子化負(fù)離子模式下選擇 質(zhì)荷比573離子進(jìn)行檢測(cè);理論板數(shù)按川楝素峰計(jì)算應(yīng)不低于8000。
[0014] 對(duì)照品溶液的制備取川楝素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含Uxg的溶 液，即得。
[0015] 供試品溶液的制備取舒肝丸水丸或水蜜丸適量，研細(xì)，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸適量，剪碎，取lg;或取濃縮丸適量，研細(xì)，取〇. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾 過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
[0016] 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各liil，注入液相色譜儀，測(cè)定，即 得。
[0017] 《中國(guó)藥典》2010年版第一增補(bǔ)本中川楝素的含量測(cè)定方法采用單級(jí)四極桿質(zhì)譜 檢測(cè)器，"舒肝丸"中除川楝子另有12味藥材，若采用單級(jí)四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器，其他藥味可能 對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響，而采用多反應(yīng)檢測(cè)可以較好地排除其他因素對(duì)川楝素的干擾，從而 得到制劑中川楝素的準(zhǔn)確含量。
[0018] 為了驗(yàn)證測(cè)定含量方法的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性、專屬性及系統(tǒng)適應(yīng)性，對(duì)方法進(jìn)行了以 下方法學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，以確保該含量測(cè)定方法可以作為舒肝丸的質(zhì)量控制。
[0019] 1儀器與試藥
[0020] Waters公司XEVO TQ-S超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，Millipore公司Milli-Q超純 水機(jī)。川楝素對(duì)照品（中檢院，批號(hào)= 111842-201102)，甲醇、乙腈均為色譜純。
[0021] 2、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
[0022] 色譜柱為ACQUITY UPLC BEH (：18(2.1\50臟，1.7_)，流動(dòng)相為乙腈-0.01%甲酸 水，體積比為36:64;流速:0.35ml/min。
[0023] 采用三重串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜檢測(cè)器，電噴霧離子化(ESI)負(fù)離子模式進(jìn)行檢測(cè)，毛細(xì) 管電壓2.8kV，去溶劑氣溫度500°C。
[0024] 川楝素質(zhì)譜條件如下表：
[0026] 3、對(duì)照品溶液的制備
[0027]精密稱取川楝素對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每lml含川楝素為lng、5ng、20ng、 40ng、80ng、160ng、1 OOOng 的溶液，即得。
[0028] 4、供試品溶液的制備
[0029] 取舒肝丸約lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回 流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
[0030] 5線性范圍考察
[0031 ]分別精密吸取對(duì)照品溶液（1 ? 115ng/ml，5 ? 575ng/ml，22 ? 3ng/ml，44 ? 6ng/ml， 89.2ng/ml，178.4ng/ml，1115ng/ml)各lyl注入液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，按上述條件測(cè)定峰面 積，以川楝素峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣濃度(ng/mL)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸 方程為Y = 778.74X+629.44(r = 0.9999)。結(jié)果表明，川楝素在1.115~1115ng/ml范圍內(nèi)，線 性關(guān)系良好。
[0032]表1標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果
[0033]
[0034] 6重復(fù)性試驗(yàn)
[0035]取同一批樣品（批號(hào)1204071)，研細(xì)，取0.58、1.(^、1.58各三份，精密稱定，按正文 方法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，本方法重復(fù)性良好(結(jié)果見表2)。
[0036] 表2重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
[0039] 取已知含量的樣品（批號(hào)20151877,川楝素:0.0083mg/g)9份，每份約0.5g，精密稱 定，每三份為一組，分別加入用甲醇配制的低、中、高三個(gè)濃度的混合對(duì)照品溶液，按供試品 溶液制備項(xiàng)下方法制備供試品溶液。按擬定的色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表3,表明 本方法回收率較好。
[0040]表3回收率試驗(yàn)的結(jié)果
[0042] 8樣品測(cè)定
[0043] 對(duì)全部135批樣品進(jìn)行測(cè)定，典型樣品色譜圖見圖1，
[0044] 表4樣品測(cè)定結(jié)果


【附圖說(shuō)明】
[0047] 圖1:川楝素負(fù)離子模式掃描一級(jí)質(zhì)譜圖。
[0048] 圖2:川楝素負(fù)離子模式掃描二級(jí)質(zhì)譜圖。
[0049] 圖3:川楝素對(duì)照品溶液總離子流圖。
[0050] 圖4:舒肝丸的總離子流圖。
【具體實(shí)施方式】 [0051 ] 實(shí)施例1
[0052]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相為乙腈-0.01 %甲酸溶液，體積比為31 :69;流速:0.35ml/min;采用三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器，電噴霧離子化負(fù)離子模式下選擇 質(zhì)荷比573離子進(jìn)行檢測(cè);理論板數(shù)按川楝素峰計(jì)算應(yīng)不低于8000;
[0053]對(duì)照品溶液的制備取川楝素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含liig的溶 液，即得；
[0054] 供試品溶液的制備取舒肝丸水丸或水蜜丸適量，研細(xì)，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸適量，剪碎，取lg;或取濃縮丸適量，研細(xì)，取〇. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾 過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
[0055] 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各liil，注入液相色譜儀，測(cè)定，即 得。
[0056] 實(shí)施例2
[0057]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相為乙腈-0.02 %甲酸溶液，體積比為31 :69;流速:0.35ml/min;采用三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器，電噴霧離子化負(fù)離子模式下選擇 質(zhì)荷比573離子進(jìn)行檢測(cè);理論板數(shù)按川楝素峰計(jì)算應(yīng)不低于6000;
[0058]對(duì)照品溶液的制備取川楝素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含liig的溶 液，即得；
[0059] 供試品溶液的制備取舒肝丸水丸或水蜜丸適量，研細(xì)，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸適量，剪碎，取lg;或取濃縮丸適量，研細(xì)，取〇. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾 過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
[0060] 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各liil，注入液相色譜儀，測(cè)定，即 得。
[0061 ] 實(shí)施例3
[0062]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相為乙腈-0.01 %甲酸溶液，體積比為31 :69;流速:0.35ml/min;采用三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器，電噴霧離子化負(fù)離子模式下選擇 質(zhì)荷比573離子進(jìn)行檢測(cè);理論板數(shù)按川楝素峰計(jì)算應(yīng)不低于8000;
[0063] 對(duì)照品溶液的制備取川楝素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含0.0 Olyg 的溶液，即得；
[0064] 供試品溶液的制備取舒肝丸水丸或水蜜丸適量，研細(xì)，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸適量，剪碎，取lg;或取濃縮丸適量，研細(xì)，取〇. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾 過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
[0065] 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各liil，注入液相色譜儀，測(cè)定，即 得。
[0066] 實(shí)施例4
[0067]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相為乙腈_0.15%甲酸溶液，體積比為31 :69;流速:0.35ml/min;采用三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器，電噴霧離子化負(fù)離子模式下選擇 質(zhì)荷比573離子進(jìn)行檢測(cè);理論板數(shù)按川楝素峰計(jì)算應(yīng)不低于7000;
[0068] 對(duì)照品溶液的制備取川楝素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.05yg 的溶液，即得；
[0069] 供試品溶液的制備取舒肝丸水丸或水蜜丸適量，研細(xì)，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸適量，剪碎，取lg;或取濃縮丸適量，研細(xì)，取〇. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾 過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
[0070] 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各liil，注入液相色譜儀，測(cè)定，即 得。
[0071] 上述實(shí)施例均按照藥典要求進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果顯示方法準(zhǔn)確可靠、靈敏、專 屬，各項(xiàng)指標(biāo)均符合質(zhì)量控制的要求。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種舒肝丸中川楝子的含量測(cè)定方法，該方法采用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用色譜 法，其特征在于該含量測(cè)定方法如下： 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相為乙腈-ο. 01 %至0.02%甲酸溶液，體積比 為31:69;流速為0.35ml/min;采用三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器，電噴霧離子化負(fù)離子模式 下選擇質(zhì)荷比573離子進(jìn)行檢測(cè);理論板數(shù)按川楝素峰計(jì)算應(yīng)不低于6000-8000; 對(duì)照品溶液的制備取川楝素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含0.001-Uig的 溶液，即得； 供試品溶液的制備取舒肝丸水丸或水蜜丸適量，研細(xì)，取〇.8g;或取小蜜丸、大蜜丸適 量，剪碎，取1 g;或取濃縮丸適量，研細(xì)，取〇. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 50ml，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取 續(xù)濾液，即得； 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各2μ1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述含量測(cè)定方法，其特征在于所述流動(dòng)相為乙腈-0.01 %甲酸溶 液，體積比為31:69。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述含量測(cè)定方法，其特征在于所述理論板數(shù)為按川楝素峰計(jì)算應(yīng) 不低于8000。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述含量測(cè)定方法，其特征在于所述對(duì)照品溶液的制備為取川楝素 對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含Uig的溶液，即得。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4所述含量測(cè)定方法，其特征在于該含量測(cè)定方法如下： 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相為乙腈-〇. 01 %甲酸溶液，體積比為31:69; 流速:0.35ml/min;采用三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器，電噴霧離子化負(fù)離子模式下選擇質(zhì)荷 比573離子進(jìn)行檢測(cè);理論板數(shù)按川楝素峰計(jì)算應(yīng)不低于8000; 對(duì)照品溶液的制備取川楝素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含lyg的溶液， 即得； 供試品溶液的制備取舒肝丸水丸或水蜜丸適量，研細(xì)，取〇.8g;或取小蜜丸、大蜜丸適 量，剪碎，取1 g;或取濃縮丸適量，研細(xì)，取〇. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 50ml，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取 續(xù)濾液，即得； 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各?μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK106053661SQ201610527135
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年6月29日
【發(fā)明人】馬永青, 王敏, 劉永利, 趙振霞
【申請(qǐng)人】河北省藥品檢驗(yàn)研究院