本發(fā)明涉及植物繁殖，具體為一種蘋果無性繁殖育苗方法。

背景技術(shù)：

1、在植物繁殖技術(shù)領(lǐng)域中，蘋果育苗是蘋果產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要基礎(chǔ)環(huán)節(jié)。當(dāng)前，傳統(tǒng)蘋果育苗方法存在諸多難以忽視的問題。種子繁殖的實生苗后代性狀分離現(xiàn)象嚴(yán)重，極大地破壞了母本優(yōu)良性狀的穩(wěn)定性，致使果實品質(zhì)、產(chǎn)量以及抗逆性參差不齊，無法滿足市場對蘋果品質(zhì)一致性的需求。而常用的無性繁殖方法，像嫁接繁殖，雖能在一定程度上保持母本特性，但嫁接操作對技術(shù)要求頗高，嫁接后的成活率受嫁接時間、砧木與接穗親和力、環(huán)境條件等多種因素影響，且生長周期漫長，從嫁接至成苗耗時久，大幅增加了育苗成本。扦插繁殖在蘋果育苗方面也困難重重，生根難度大，往往需要借助生根劑等輔助手段，不同品種蘋果扦插生根率差異顯著，整體生根率較低，難以大規(guī)模應(yīng)用于實際生產(chǎn)。這些問題嚴(yán)重制約了蘋果育苗產(chǎn)業(yè)的高效、穩(wěn)定發(fā)展，急需創(chuàng)新的育苗技術(shù)來突破困境。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種蘋果無性繁殖育苗方法，解決了現(xiàn)有蘋果育苗方法中存在的不能高效穩(wěn)定保持母本優(yōu)良性狀、成活率低、生長周期長以及成本高的問題。

2、為實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：一種蘋果無性繁殖育苗方法，包括以下步驟：

3、s1、母株選擇與預(yù)處理：選優(yōu)母株，取10-15cm一年生半木質(zhì)化枝條，留頂2-3葉，枝條基部用0.1%-0.2%多菌靈浸10-15分鐘后洗凈；

4、s2、愈傷組織誘導(dǎo)：配特定培養(yǎng)基ph5.8-6.0，插入枝條基部，在22-25℃、1500-2000lx光照、12-14小時/天條件下培養(yǎng)2-3周誘導(dǎo)愈傷組織；

5、s3、不定芽分化：愈傷組織0.5-1.0cm時，轉(zhuǎn)至相應(yīng)培養(yǎng)基ph5.8-6.0，在23-25℃、2000-2500lx光照、14-16小時/天條件下培養(yǎng)3-4周分化不定芽；

6、s4、生根培養(yǎng)：選3-5cm不定芽，移至生根培養(yǎng)基ph5.8-6.0，利用酵母發(fā)酵供碳，在20-22℃、1000-1500lx光照、10-12小時/天條件下培養(yǎng)2-3周生根；

7、s5、煉苗與移栽：小植株浸藥10-15分鐘后栽入營養(yǎng)土育苗缽，在18-22℃、70%-80%濕度溫室煉苗1-2周，加強光照通風(fēng)后移栽大田。

8、優(yōu)選的，所述s1中具體包括：

9、s101：選擇生長健壯、無病蟲害、具有優(yōu)良性狀，果實品質(zhì)好、產(chǎn)量高、抗逆性強的成年蘋果植株作為母株；

10、s102：在母株上選取一年生、半木質(zhì)化的枝條，枝條長度為10-15cm，保留枝條頂部2-3片葉片，其余葉片去除；

11、s103：將選取的枝條基部在含有0.1%-0.2%多菌靈溶液中浸泡10-15分鐘進行消毒處理，然后用清水沖洗干凈。

12、優(yōu)選的，所述s2中具體包括：

13、s201：制備愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其成分包括ms基本培養(yǎng)基、1.0-2.0mg/l6-芐氨基腺嘌呤、0.5-1.0mg/l萘乙酸、30g/l蔗糖和7g/l瓊脂，ph值調(diào)節(jié)至5.8-6.0；

14、s202：將消毒后的枝條基部插入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在溫度為22-25℃、光照強度為1500-2000lx、光照時間為12-14小時/天的條件下培養(yǎng)2-3周，誘導(dǎo)枝條基部形成愈傷組織。

15、優(yōu)選的，所述s3中具體包括：

16、s301、當(dāng)愈傷組織生長到一定大小其直徑約為0.5-1.0cm時，將其轉(zhuǎn)移到不定芽分化培養(yǎng)基上，不定芽分化培養(yǎng)基成分包括ms基本培養(yǎng)基、1.5-2.5mg/l激動素、0.3-0.5mg/l吲哚丁酸、30g/l蔗糖和7g/l瓊脂，ph值調(diào)節(jié)至5.8-6.0；

17、s302、在溫度為23-25℃、光照強度為2000-2500lx、光照時間為14-16小時/天的條件下培養(yǎng)3-4周，促使愈傷組織分化出不定芽。

18、優(yōu)選的，所述s4中具體包括：

19、s401、選取生長健壯、高度為3-5cm的不定芽，將其轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基成分包括1/2ms基本培養(yǎng)基、0.5-1.0mg/l吲哚-3-乙酸、0.2-0.3mg/l生根粉、20g/l葡萄糖、酵母粉2g/l和6g/l蛭石，ph值調(diào)節(jié)至5.8-6.0。酵母菌在無氧條件下將葡萄糖發(fā)酵分解為乙醇和二氧化碳，化學(xué)方程式為：c6h12o6+酵母菌→2c2h5oh+2co2↑二氧化碳為植物光合作用提供碳元素；

20、s402、在溫度為20-22℃、光照強度為1000-1500lx、光照時間為10-12小時/天的條件下培養(yǎng)2-3周，使不定芽生根形成完整的小植株。

21、優(yōu)選的，所述s5中具體包括：

22、s501、將生根后的小植株從培養(yǎng)瓶中取出，在含有0.1%-0.2%多菌靈和0.2%-0.3%磷酸二氫鉀的溶液中浸泡10-15分鐘；

23、s502、將小植株移栽到裝有營養(yǎng)土的育苗缽中，其腐葉土：珍珠巖：蛭石=3:1:1，在溫度為18-22℃、濕度為70%-80%的溫室中進行煉苗，煉苗1-2周后，逐漸增加光照強度和通風(fēng)量，待小植株生長健壯后，即可移栽到大田中。

24、優(yōu)選的，所述s1中還包括：在枝條浸泡多菌靈后，噴灑枯草芽孢桿菌其濃度1×10^8cfu/ml，抑制根腐病。同時，對母株所在園區(qū)進行土壤熏蒸，降低線蟲和真菌基數(shù)。

25、優(yōu)選的，所述s5中還包括：移栽前，將組培苗根系浸入腐殖酸100mg/l和海藻提取物0.1%混合液中10分鐘，促進毛細根發(fā)育并增強抗旱性。煉苗階段逐步增加uv-b光照，每日2小時，刺激植株合成次生代謝物，用于適應(yīng)大田。

26、本發(fā)明提供了一種蘋果無性繁殖育苗方法。具備以下有益效果：

27、1、本發(fā)明通過從源頭上為無性繁殖提供穩(wěn)定優(yōu)良遺傳信息的效果，并獲取具有高繁殖活性且能維持自身生長的枝條，并為其營造有利于生長和繁殖的內(nèi)部營養(yǎng)環(huán)境，并為枝條繁殖創(chuàng)造一個相對無菌的環(huán)境，避免病菌侵害影響枝條正常生長和發(fā)育。解決了無法穩(wěn)定保持母本優(yōu)良性狀的問題。

28、2、本發(fā)明通過調(diào)配培養(yǎng)基成分和控制ph值，實現(xiàn)了為枝條基部細胞的生長、分裂和分化創(chuàng)造適宜營養(yǎng)和理化環(huán)境的效果，促使細胞脫分化形成愈傷組織。解決了傳統(tǒng)育苗過程中，因營養(yǎng)供給不足或不均衡、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)缺乏以及培養(yǎng)基環(huán)境不適宜，導(dǎo)致枝條難以誘導(dǎo)形成愈傷組織的問題。

29、3、本發(fā)明通過提供合適的培養(yǎng)基成分和環(huán)境，實現(xiàn)了為愈傷組織分化不定芽創(chuàng)造良好條件的效果，促使愈傷組織向芽的方向分化，高效、穩(wěn)定地促使愈傷組織分化出不定芽的效果，增加了不定芽的數(shù)量和質(zhì)量。解決了因培養(yǎng)環(huán)境條件控制不佳，導(dǎo)致存活率較低的問題。

30、4、本發(fā)明通過提供特定成分的生根培養(yǎng)基，實現(xiàn)了為不定芽生根提供適宜的營養(yǎng)、物理和化學(xué)環(huán)境，促進不定芽快速、健康生根的效果，使不定芽高效生根并發(fā)育成完整小植株的效果，提高了小植株的成活率和縮短生長周期。解決了現(xiàn)有技術(shù)中生長周期較長的問題。

31、5、本發(fā)明通過對小植株進行殺菌處理，同時為其補充磷、鉀營養(yǎng)，增強植株抗逆性，幫助小植株逐步適應(yīng)外界環(huán)境，提高其移栽到大田后的成活率和生長周期的效果。由于提高了成活率和縮短了生長周期，減少了育苗過程中的人力、物力和時間成本。同時，培養(yǎng)基的成分相對簡單且成本較低，有利于大規(guī)模的蘋果育苗生產(chǎn)。解決了使用成本較高的問題。