本發(fā)明屬于干細胞，尤其是涉及一種治療痤瘡和毛囊炎的干細胞裂解物組合劑及制備方法。
背景技術(shù)：
1、尋常痤瘡是一種毛囊皮脂腺單元的慢性炎癥性疾病，常見于面部、胸部、上臂及背部。數(shù)據(jù)統(tǒng)計，痤瘡影響了約80％的青年人，在中年人中也有患病。尋常痤瘡的病理生理學(xué)機制涉及雄激素升高、毛囊皮脂腺單位角化異常、皮脂生成增加、痤瘡丙酸桿菌增殖，同時引起毛細血管周圍炎。臨床表現(xiàn)以好發(fā)于面部的粉刺、丘疹、膿皰、結(jié)節(jié)等多形性皮損為特點。炎癥導(dǎo)致復(fù)雜的傷口愈合反應(yīng)，基質(zhì)降解和膠原合成失衡，造成膠原沉積過多或減少，對應(yīng)形成增生性痤瘡瘢痕、瘢痕疙瘩及萎縮性痤瘡瘢痕。
2、目前，國際對痤瘡治療的常用方法為：(1)局部使用維甲酸(維a酸乳膏、阿達帕林凝膠、他扎羅汀凝膠)、過氧化苯甲酰、抗生素(即克林霉素或紅霉素)類藥物通過單藥治療粉刺類痤瘡，或結(jié)合局部使用及口服抗生素來治療混合型或炎性痤瘡。(2)使用全身抗生素(米諾環(huán)素、多西環(huán)素等)來治療中、重度炎性痤瘡和對局部治療有抵抗力的痤瘡，全身抗生素的使用應(yīng)限于3個月內(nèi)，并且應(yīng)結(jié)合局部用過氧化苯甲?；蚓植坑镁S甲酸來治療。(3)抗雄激素治療：聯(lián)合口服避孕藥對治療女性的炎癥性痤瘡有效，復(fù)方醋酸環(huán)丙孕酮片，適用于女性中、重度痤瘡患者，伴有雄激素水平過高表現(xiàn)(如多毛、皮脂溢出等)或多囊卵巢綜合征。遲發(fā)型痤瘡及月經(jīng)期前痤瘡顯著加重的女性患者也可考慮應(yīng)用口服避孕藥。(4)推薦口服異維甲酸來治療嚴重結(jié)節(jié)性痤瘡、中度頑固性痤瘡或產(chǎn)生瘢痕及影響心理健康的痤瘡，是目前治療痤瘡最有效的方法。(5)對于不能耐受或不愿接受藥物治療的患者，還可考慮物理治療，如光動力療法(pdt)、果酸療法、激光治療等；
3、然而，上述治療方法也帶來一些不良反應(yīng)。例如，所有局部治療方法都可能導(dǎo)致皮膚受刺激和干燥。維甲酸可引起皮膚干燥、紅斑、刺激和脫皮；過氧化苯甲酰可引起濃度依賴性的刺激和接觸性皮炎；局部抗生素治療可引起瘙癢、紅斑和脫皮；此外，多西環(huán)素可引起光過敏和胃腸道紊亂；而米諾環(huán)素可引起耳鳴、頭暈及皮膚、黏膜和牙齒的色素沉著。含雌激素的避孕藥與血液高凝狀態(tài)的小幅增加有關(guān)，并可能增加乳腺癌和卵巢癌的風險。使用異維甲酸可出現(xiàn)皮膚黏膜和眼干燥及肌肉骨骼疼痛。果酸換膚對于亞洲人種來說，使用后發(fā)生炎癥或剝脫后，發(fā)生色素沉著并發(fā)癥的風險更高。因此，急需對上述現(xiàn)有治療方法進行改進，在此提供一種治療痤瘡和毛囊炎的干細胞裂解物組合劑及制備方法。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種可以抑制痤瘡的炎癥反應(yīng)，對痤瘡治療及后續(xù)的修復(fù)起到突出的治療效果的治療痤瘡和毛囊炎的干細胞裂解物組合劑及制備方法，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的治療過程中可能導(dǎo)致皮膚受刺激和干燥等問題。
2、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
3、一種治療痤瘡和毛囊炎的干細胞裂解物組合劑，包括：
4、活性成分，所述活性成分包括人臍帶間充質(zhì)干細胞裂解液；
5、輔料，所述輔料包括5％利多卡因、薄荷油、丁香油、丙二醇、蘆薈提取物、維生素b6和甲硝唑。
6、作為一種優(yōu)選的實施方式，本發(fā)明還提供一種治療痤瘡和毛囊炎的干細胞裂解物組合劑的制備方法，其步驟包括：
7、步驟(一)：進行humscs分離，采集新生兒臍帶，剪成3-5cm小段，隨后使用生理鹽水對新生兒臍帶小段進行充分洗滌，再去除表皮以及血管，留取華通膠；
8、步驟(二)：將步驟(一)所得的華通膠剪碎至0.5-1.0mm3的組織塊，隨后將組織塊均勻平鋪于15cm培養(yǎng)皿中；
9、步驟(三)：將步驟(二)中培養(yǎng)皿置于37℃、飽和濕度、體積分數(shù)為5％co2的標準培養(yǎng)箱中，1.5h后加入10ml含5％血清替代物的α-mem培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱中，間隔6天換液，待細胞克隆長至80％左右融合度時，使用0.05％胰酶消化傳代；
10、步驟(四)：取狀態(tài)良好的第3代humscs，胰酶消化，計數(shù)并分裝至流式管，每管約一百萬個細胞，分別pbs清洗，用抗體稀釋劑重懸，分別加入對應(yīng)流式直標抗體；
11、步驟(五)：p4代間充質(zhì)干細胞采用無分紅α-mem培養(yǎng)基，待細胞至80％-90％融合時，細胞刮子取細胞及培養(yǎng)上清，經(jīng)液氮超低溫反復(fù)凍融3次后，在0～4℃冰水浴中超聲振蕩(3min，300w)3次，所得混懸液3000rpm離心5分鐘，去除沉淀部分，在無菌條件下經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，制得人源干細胞裂解液，-80℃保存?zhèn)溆茫?/p>
12、步驟(六)：其成分按照每100ml干細胞裂解液計算：將輔料與步驟(五)所得人源干細胞裂解液進行充分溶解，即可制得具有生物活性的治療痤瘡和毛囊炎的干細胞裂解物組合劑。
13、作為一種優(yōu)選的實施方式，所述步驟(四)中檢測結(jié)果表明msc中cd105、cd90和cd73均為陽性表達，陽性細胞的比例均超過90％，而hla-dr、cd45ra的表達均為陰性。
14、作為一種優(yōu)選的實施方式，所述步驟(六)中的輔料具體包含5ml的5％利多卡因、3ml薄荷油、3ml丁香油、3ml丙二醇、3g蘆薈提取物、0.3g維生素b6和1g甲硝唑。
15、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：
16、(一)以本發(fā)明技術(shù)方案制備的活性噴劑可以達到達到修復(fù)皮膚屏障、抗炎、改善血管、淡化色素和去除暗瘡、痤瘡，毛囊炎，并防止或去除基于痤瘡產(chǎn)生的瘢痕特；
17、(二)原液的各組分都來自公認的營養(yǎng)及藥物成分，具有較好的安全性，利于產(chǎn)品開發(fā)上市；
18、(三)本配方使用humscs細胞裂解物產(chǎn)物，產(chǎn)品活性成分更加豐富，簡化流程，利用產(chǎn)品盡快上市；
19、(四)本配方外用humscs細胞產(chǎn)物，基本不引起免疫反應(yīng)，因此不局限于自體來源的干細胞，因此具有來源方便，具有工業(yè)生產(chǎn)中可標準化質(zhì)控和大規(guī)模生產(chǎn)等優(yōu)勢；
20、(五)本發(fā)明采用間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)上清作為活性成分用黃褐斑的治療，通過分泌表達多種細胞因子、促進造血，重建局部微環(huán)境的生物活性，能夠很好地修復(fù)受損肌膚，改善血管，達到修復(fù)皮膚屏障、淡化色素和去除暗瘡、痤瘡、毛囊炎，并防止或去除基于痤瘡產(chǎn)生的瘢痕特點，且安全性好，沒有激素產(chǎn)品等副作用；
21、(六)每100ml干細胞培養(yǎng)上清包含：5％利多卡因5ml，薄荷油、丁香油、丙二醇各3ml，蘆薈提取物3g，維生素b60.3g，甲硝唑1g。與人源干細胞裂解液協(xié)同作用，進一步增強了痤瘡和毛囊炎的治療效果。
1.一種治療痤瘡和毛囊炎的干細胞裂解物組合劑，其特征在于，包括：
2.本發(fā)明還提供一種治療痤瘡和毛囊炎的干細胞裂解物組合劑的制備方法，其步驟包括：
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種治療痤瘡和毛囊炎的干細胞裂解物組合劑的制備方法，其特征在于：所述步驟(四)中檢測結(jié)果表明msc中cd105、cd90和cd73均為陽性表達，陽性細胞的比例均超過90％，而hla-dr、cd45ra的表達均為陰性。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種治療痤瘡和毛囊炎的干細胞裂解物組合劑的制備方法，其特征在于：所述步驟(六)中的輔料具體包含5ml的5％利多卡因、3ml薄荷油、3ml丁香油、3ml丙二醇、3g蘆薈提取物、0.3g維生素b6和1g甲硝唑。