本發(fā)明涉及人工酶體系，具體是指一種益生菌-人工酶體系的合成方法。

背景技術：

1、手性納米材料近年來在生物醫(yī)學領域得到了廣泛關注，在醫(yī)學技術研究中起到重要的作用；黃金，作為一種具有良好生物相容性的惰性貴金屬，在生物醫(yī)學領域有著悠久的研究歷史；aunp(金納米顆粒)是所有貴金屬納米顆粒中研究最廣泛的納米顆粒，因為它們具有多種表面功能和獨特的表面等離振子共振，可在許多方面加以利用?；诖?，我們選擇金作為原料來合成手性納米材料用于治療疾病。大量研究表明，納米材料的性能與其手性等因素有著錯綜復雜的關系；手性無機納米材料可以表現(xiàn)出類似酶的特性，納米酶克服了天然酶的可回收性、活性可控、制備成本低等缺點；谷胱甘肽作為抗氧化系統(tǒng)中最重要的抗氧化劑之一可以保護組織免受活性氧的損傷；因此，利用上述材料的特點，合成一種人工酶是相關領域內(nèi)技術人員急需解決的問題。

技術實現(xiàn)思路

1、為解決上述技術問題，本發(fā)明提供的技術方案為：一種益生菌-人工酶體系的合成方法，包括以下步驟：

2、(1)稱取36.88mg的l-gsh/d-gsh溶解在5ml去離子水中；

3、(2)向步驟(1)的溶液中加入84μl、476.3mmol/l的haucl4·4h2o水溶液，將其與步驟(1)的溶液混合均勻后，再加入到36ml去離子水中攪拌30min；

4、(3)向步驟(2)的混合溶液中緩慢加入0.88mmol的nabh4水溶液2ml，快速攪拌使金離子充分還原，再攪拌2h，直至溶液呈棕色；

5、(4)將步驟(3)所得產(chǎn)物放入超濾機中進行超濾處理，然后將超濾后的產(chǎn)物用去離子水洗滌3次，去除游離gsh分子，得到l-au或d-au，即手性納米金顆粒；

6、(5)將步驟(4)得到的l-au或d-au分散在水溶液中，得到l-au或d-au水溶液；

7、(6)取10ml步驟(5)得到的l-au或d-au水溶液及500mg的peg-nh2，將peg-nh2溶解在l-au或d-au水溶液中；

8、(7)待步驟(6)中的peg-nh2完全溶解后，向其中加入0.5ml的naoh溶液，反應0.5h，再加入aa溶液2ml，攪拌0.5h，用去離子水反復洗滌，得到peg-au溶液，倒出備用；

9、(8)取1ml步驟(7)制備的peg-au，向其中加入含有1.15mgedc和1.3mgnhs的菌懸液，攪拌0.5h后放入離心機進行離心操作，得到一種益生菌-人工酶，并使用pbs洗滌3次。

10、優(yōu)選地，步驟(4)中超濾處理為：在10000rpm的轉(zhuǎn)速下超濾15min。

11、優(yōu)選地，步驟(7)中naoh溶液的溶度為240mg/ml。

12、優(yōu)選地，步驟(8)中的菌懸液，其制備方法，包括以下步驟：

13、(8.1)配置改良ycfa液體培養(yǎng)基，將普拉梭菌菌株活化后，儲存于4攝氏度備用；

14、(8.2)將普拉梭菌菌株按5％的比例接種于改良ycfa液體培養(yǎng)基中，在37℃的條件下培養(yǎng)72h，用麥氏比濁儀調(diào)整菌濃度為4x109cfu/mi.

15、優(yōu)選地，步驟(8)中離心處理為：在3000rpm的轉(zhuǎn)速下離心5min。

16、本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比的優(yōu)點在于：(1)本發(fā)明的人工酶體系可以保護益生菌順利通過胃腸道，并在腸道長時間定植，手性金納米酶可以保護益生菌免受腸道內(nèi)的ros損傷；

17、(2)本發(fā)明的益生菌-人工酶體系可以控制非酒精性脂肪性肝炎小鼠的血糖水平及體內(nèi)炎癥因子水平，改善腸道菌群分布，治療非酒精性脂肪性肝炎。

技術特征：

1.一種益生菌-人工酶體系的合成方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權利要求1所述的一種益生菌-人工酶體系的合成方法，其特征在于，步驟(4)中超濾處理為：在10000rpm的轉(zhuǎn)速下超濾15min。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種益生菌-人工酶體系的合成方法，其特征在于，步驟(7)中naoh溶液的溶度為240mg/ml。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種益生菌-人工酶體系的合成方法，其特征在于，步驟(8)中的菌懸液，其制備方法，包括以下步驟：

5.根據(jù)權利要求1所述的一種益生菌-人工酶體系的合成方法，其特征在于，步驟(8)中離心處理為：在3000rpm的轉(zhuǎn)速下離心5min。

技術總結
本發(fā)明公開了一種益生菌?人工酶體系的合成方法，包括將L/D?GSH溶解在去離子水中；加入84μL、476.3mmol/L的HAuCl<subgt;4</subgt;·4H<subgt;2</subgt;O水溶液，再加入到36mL去離子水中攪拌30min；緩慢加入0.88mmol的NaBH<subgt;4</subgt;水溶液2mL；放入超濾機中進行超濾處理；將L?Au或D?Au分散在水溶液中，得到L?Au或D?Au水溶液；將PEG?NH<subgt;2</subgt;溶解在L?Au或D?Au水溶液中；向其中加入0.5ml的NaOH溶液；加入含有1.15mgEDC和1.3mgNHS的菌懸液；本發(fā)明的人工酶體系可以保護益生菌順利通過胃腸道，并在腸道長時間定植，手性金納米酶可以保護益生菌免受腸道內(nèi)的ROS損傷；益生菌?人工酶體系可以控制非酒精性脂肪性肝炎小鼠的血糖水平及體內(nèi)炎癥因子水平，改善腸道菌群分布，治療非酒精性脂肪性肝炎。

技術研發(fā)人員：陳菁,尹豪豪,方研,滕楊,張恒
受保護的技術使用者：珠海市人民醫(yī)院
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/5/8