本發(fā)明屬于眼藥水，具體涉及一種基于多功能肽類組合物的眼藥水及其制備方法和在治療糖尿病視網(wǎng)膜病變中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、糖尿病視網(wǎng)膜病變是糖尿病常見且嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一，在全球范圍內(nèi)，糖尿病患者數(shù)量的持續(xù)攀升使得糖尿病視網(wǎng)膜病變的患病率也日益增長(zhǎng)，成為主要的致盲性眼病之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，部分糖尿病患者在患病若干年后會(huì)出現(xiàn)不同程度的視網(wǎng)膜病變，嚴(yán)重威脅患者的視力健康與生活質(zhì)量。

2、目前，糖尿病視網(wǎng)膜病變的治療手段多樣。激光光凝治療通過破壞視網(wǎng)膜的異常血管組織，減少新生血管生成因子的產(chǎn)生，從而控制病變進(jìn)展，但可能會(huì)損傷周邊正常視網(wǎng)膜組織，導(dǎo)致視野缺損等副作用。玻璃體切割手術(shù)則適用于較為嚴(yán)重的增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變，如出現(xiàn)大量玻璃體積血、視網(wǎng)膜脫離等情況，但手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)較大，術(shù)后恢復(fù)周期長(zhǎng)，且存在感染、視網(wǎng)膜再次脫離等并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)。藥物治療方面，抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vegf)藥物雖能有效抑制新生血管形成，但需頻繁眼內(nèi)注射，這不僅增加了眼內(nèi)感染、出血、視網(wǎng)膜脫離等風(fēng)險(xiǎn)，還對(duì)患者造成了較大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)與心理壓力；糖皮質(zhì)激素類藥物雖可以減輕視網(wǎng)膜炎癥反應(yīng)，但長(zhǎng)期使用會(huì)引發(fā)白內(nèi)障、青光眼等眼部并發(fā)癥。

3、眼藥水作為一種局部用藥方式，具有使用方便、患者依從性高、可直接作用于眼部病變部位等優(yōu)點(diǎn)，在眼科疾病治療中具有獨(dú)特的地位。然而，現(xiàn)有的眼藥水在治療糖尿病視網(wǎng)膜病變方面仍存在諸多局限性。多數(shù)常規(guī)眼藥水主要側(cè)重于緩解眼部干澀、疲勞、炎癥等一般性癥狀，對(duì)于糖尿病視網(wǎng)膜病變復(fù)雜的病理生理機(jī)制缺乏針對(duì)性作用。例如，一些常見的潤(rùn)滑型眼藥水僅能改善眼表的潤(rùn)滑狀態(tài)，無法干預(yù)視網(wǎng)膜血管病變及神經(jīng)損傷的進(jìn)程；抗感染類眼藥水只能預(yù)防或治療眼部感染，對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變的血管異常增生、視網(wǎng)膜缺氧缺血等核心問題無能為力。

4、近年來，科研人員致力于研發(fā)能夠有效治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的眼藥水。一些研究聚焦于開發(fā)新型藥物載體，如納米粒、脂質(zhì)體等，旨在提高藥物的穩(wěn)定性、生物利用度與眼部組織穿透性，使藥物能夠更精準(zhǔn)地作用于視網(wǎng)膜病變部位。同時(shí)，針對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變的關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)，如氧化應(yīng)激損傷、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡等，探索具有相應(yīng)作用機(jī)制的藥物成分，并嘗試將其配制成眼藥水劑型。但截至目前，仍然缺乏安全、高效、便捷地治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的眼藥水。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有市場(chǎng)仍然缺乏安全、高效、便捷地治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的眼藥水，本發(fā)明提供一種基于多功能肽類組合物的眼藥水及其制備方法和在治療糖尿病視網(wǎng)膜病變中的應(yīng)用，以特定比例的s-乙酰-l-谷胱甘肽、魚眼提取肽、貫葉連翹花提取肽、歐洲七葉樹葉提取肽為活性物質(zhì)，發(fā)揮了眼藥水治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的便攜性，同時(shí)具有安全、高效的治療效果。其具體技術(shù)方案如下：

2、一種基于多功能肽類組合物的眼藥水，眼藥水包括以下原料：s-乙酰-l-谷胱甘肽1w/v％～2w/v％、魚眼提取肽0.5w/v％～1w/v％、貫葉連翹花提取肽0.5w/v％～1w/v％、歐洲七葉樹葉提取肽0.3w/v％～0.5w/v％、滲透壓調(diào)節(jié)劑0.8w/v％～0.9w/v％、防腐劑0.003w/v％～0.008w/v％，緩沖劑調(diào)節(jié)ph7.2～7.6，余量為注射用水。

3、上述眼藥水中，所述滲透壓調(diào)節(jié)劑為氯化鈉。

4、上述眼藥水中，所述緩沖劑為磷酸鹽緩沖液(pbs)。

5、上述眼藥水中，所述魚眼提取肽的制備方法包括如下步驟：將新鮮的雪魚眼洗凈，去除雜質(zhì)，用組織搗碎機(jī)在4℃～6℃低溫下破碎成勻漿，得到魚眼漿；按魚眼漿：磷酸鹽緩沖液＝1：(8～10)的質(zhì)量比，將魚眼漿加入濃度為0.04mo?l/l～0.06mo?l/l且ph7.0～8.0的磷酸鹽緩沖液中，然后加入魚眼漿質(zhì)量0.5％～1.0％的胰蛋白酶，在35℃～40℃酶解60min～90min，升溫滅酶；降至35℃～40℃后，加入魚眼漿質(zhì)量0.5％～1.0％的沙雷肽酶，酶解60min～90min，升溫滅酶；降至室溫后，以6000rpm～8000rpm離心20min～30min，取上清液；上清液采用超濾膜截留過濾，得到截留分子量1000kda～3000kda之間的濾液，冷凍干燥，得到魚眼提取肽。

6、上述魚眼提取肽的制備方法中，所述雪魚眼包括角膜、晶狀體、視網(wǎng)膜和玻璃體部位。

7、上述眼藥水中，所述貫葉連翹花提取肽的制備方法包括如下步驟：取貫葉連翹花進(jìn)行粉碎，加入貫葉連翹花8倍～10倍質(zhì)量的水，調(diào)節(jié)ph至6.0～7.0，加入貫葉連翹花質(zhì)量0.5％～1％的菠蘿蛋白酶，在50℃～55℃酶解60min～90min，升溫滅酶；降至35℃～40℃后，調(diào)節(jié)ph至7.0～8.0，加入貫葉連翹花質(zhì)量0.5％～1.0％的沙雷肽酶，酶解60min～90min，升溫滅酶；降至35℃～40℃后，調(diào)節(jié)ph至7.2～7.8，加入貫葉連翹花質(zhì)量0.5％～1.0％的納豆激酶，酶解60min～90min，升溫滅酶；降至室溫后，以6000rpm～8000rpm離心20min～30min，取上清液；上清液采用超濾膜截留過濾，得到截留分子量1000kda～3000kda之間的濾液，冷凍干燥，得到貫葉連翹花提取肽。

8、上述眼藥水中，所述歐洲七葉樹葉提取肽的制備方法包括如下步驟：取歐洲七葉樹葉進(jìn)行粉碎，先用歐洲七葉樹葉5倍～6倍質(zhì)量的0.1v/v％～0.5v/v％濃度鹽酸水溶液浸泡1h～2h，經(jīng)200目～250目篩網(wǎng)過濾，得到濾液a和殘?jiān)?；殘?jiān)儆脷W洲七葉樹葉5倍～6倍質(zhì)量的0.1wt％～0.5wt％濃度氫氧化鈉水溶液浸泡1h～2h，經(jīng)200目～250目篩網(wǎng)過濾，得到濾液b；合并濾液a和濾液b，調(diào)節(jié)ph至5.0～6.0，得到提取液；向提取液中加入提取液質(zhì)量0.05％～0.15％的木瓜蛋白酶和提取液質(zhì)量0.05％～0.15％的無花果蛋白酶，在60℃～65℃酶解90min～120min，升溫滅酶；降至室溫后，以6000rpm～8000rpm離心20min～30min，取上清液；上清液采用超濾膜截留過濾，得到截留分子量1000kda～3000kda之間的濾液，冷凍干燥，得到歐洲七葉樹葉提取肽。

9、上述制備方法中，所述升溫滅酶的溫度為85℃～90℃，所述升溫滅酶的時(shí)間為10min～20min。

10、上述一種基于多功能肽類組合物的眼藥水的制備方法，包括如下步驟：

11、s1：將70％～80％體積百分?jǐn)?shù)的注射用水加入配液容器中，之后加入滲透壓調(diào)節(jié)劑和防腐劑，邊加邊攪拌，混合溶解均勻，之后加入s-乙酰-l-谷胱甘肽、魚眼提取肽、貫葉連翹花提取肽和歐洲七葉樹葉提取肽，邊加邊攪拌，混合溶解均勻，用ph計(jì)檢測(cè)溶液ph值，之后滴加緩沖劑調(diào)節(jié)ph至7.2～7.6，然后用注射用水定容至最終眼藥水的體積，得到眼藥水溶液；

12、s2：將眼藥水溶液進(jìn)行過濾、滅菌、密封包裝，得到眼藥水。

13、上述一種基于多功能肽類組合物的眼藥水在治療糖尿病視網(wǎng)膜病變中的應(yīng)用。

14、本發(fā)明的一種基于多功能肽類組合物的眼藥水及其制備方法和在治療糖尿病視網(wǎng)膜病變中的應(yīng)用，有益效果如下：

15、一、糖尿病視網(wǎng)膜病變過程中，高血糖會(huì)引發(fā)一系列氧化應(yīng)激反應(yīng)，產(chǎn)生大量活性氧(ros)。s-乙酰-l-谷胱甘肽能夠直接與ros結(jié)合，將其還原為無害的物質(zhì)，從而減輕氧化應(yīng)激對(duì)視網(wǎng)膜細(xì)胞的損傷。s-乙酰-l-谷胱甘肽能夠清除超氧陰離子、羥自由基等活性氧成分，保護(hù)視網(wǎng)膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等免受氧化損傷。在糖尿病狀態(tài)下，細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)被破壞，s-乙酰-l-谷胱甘肽能夠恢復(fù)細(xì)胞內(nèi)的正常氧化還原環(huán)境，保證細(xì)胞的正常代謝和生理功能。高血糖引起的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡，s-乙酰-l-谷胱甘肽能夠通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的凋亡信號(hào)通路，抑制caspase酶等的激活，減少視網(wǎng)膜細(xì)胞的凋亡，維持視網(wǎng)膜的正常結(jié)構(gòu)和功能。在糖尿病視網(wǎng)膜病變中，氧化應(yīng)激和炎癥導(dǎo)致腎臟功能損傷，進(jìn)而影響cys?c水平，s-乙酰-l-谷胱甘肽通過減輕氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，間接保護(hù)腎臟功能。s-乙酰-l-谷胱甘肽阻止因氧化應(yīng)激和炎癥引起的腎小球?yàn)V過功能異常，從而維持cys?c在正常范圍內(nèi)。氧化應(yīng)激是vegf表達(dá)上調(diào)的一個(gè)重要因素，s-乙酰-l-谷胱甘肽通過清除ros，減輕氧化應(yīng)激，從而抑制缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hi?f-1α)的激活。hif-1α是vegf表達(dá)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，抑制其激活能夠減少vegf的過度表達(dá)，防止視網(wǎng)膜新生血管的異常增生和血管通透性的增加。炎癥反應(yīng)在糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機(jī)制中起重要作用，tnf-α是一種關(guān)鍵的炎癥因子，s-乙酰-l-谷胱甘肽通過抗氧化作用減輕炎癥反應(yīng)，從而抑制炎癥細(xì)胞的激活和tnf-α等炎癥因子的釋放。，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的炎癥信號(hào)通路，nf-κb通路等，減少tnf-α的產(chǎn)生。

16、二、魚眼提取肽為雪魚眼經(jīng)胰蛋白酶、沙雷肽酶依次分級(jí)酶解，獲得的1000kda～3000kda的提取肽。魚眼提取肽通過調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜細(xì)胞的代謝和功能來治療糖尿病視網(wǎng)膜病變。視網(wǎng)膜細(xì)胞在高血糖環(huán)境下，其代謝和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路會(huì)發(fā)生紊亂。魚眼提取肽含有一些生物活性肽，能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)分子，通過調(diào)節(jié)pi3k-akt等信號(hào)通路來保護(hù)視網(wǎng)膜細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞存活。魚眼提取肽對(duì)視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞有保護(hù)作用。在糖尿病狀態(tài)下，血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，魚眼提取肽通過增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞的屏障功能，減少血管滲漏，從而減輕視網(wǎng)膜水腫等病變。糖尿病視網(wǎng)膜病變導(dǎo)致腎臟功能損傷，引起cys?c水平變化。魚眼提取肽通過改善視網(wǎng)膜血液循環(huán)，減輕腎臟的血液動(dòng)力學(xué)改變，從而間接調(diào)節(jié)cysc的水平。同時(shí)，它也能通過抑制炎癥反應(yīng)來阻止cys?c因炎癥刺激而升高。魚眼提取肽通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，抑制缺氧誘導(dǎo)因子-1α(h?i?f-1α)等的激活，從而減少vegf的表達(dá)。在糖尿病視網(wǎng)膜病變的炎癥過程中，tnf-α的釋放會(huì)增加，魚眼提取肽通過抑制相關(guān)炎癥信號(hào)通路，nf-κb等通路，來降低tnf-α的水平。魚眼提取肽含有抗氧化的肽段，同時(shí)通過激活視網(wǎng)膜細(xì)胞內(nèi)的抗氧化酶系統(tǒng)，超氧化物歧化酶(sod)、谷胱甘肽過氧化物酶(gsh-px)等，來增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力，減少ros的產(chǎn)生和積累。

17、三、貫葉連翹花提取肽為貫葉連翹花經(jīng)菠蘿蛋白酶、沙雷肽酶、納豆激酶依次分級(jí)酶解，獲得的1000kda～3000kda的提取肽。貫葉連翹花提取肽通過其抗炎和抗氧化特性來治療糖尿病視網(wǎng)膜病變。炎癥和氧化應(yīng)激在糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵作用，貫葉連翹花提取肽通過抑制炎癥反應(yīng)和清除ros來減輕視網(wǎng)膜組織的損傷。通過調(diào)節(jié)神經(jīng)保護(hù)因子的表達(dá)來保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞。在糖尿病視網(wǎng)膜病變中，神經(jīng)細(xì)胞會(huì)受到損傷，貫葉連翹花提取肽促進(jìn)神經(jīng)保護(hù)因子的分泌，維持神經(jīng)細(xì)胞的正常功能。貫葉連翹花提取肽通過減輕炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，間接調(diào)節(jié)cys?c的水平。炎癥和氧化應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致腎臟功能損傷，進(jìn)而影響cys?c的水平，貫葉連翹花提取肽通過改善視網(wǎng)膜和腎臟的微環(huán)境來維持cys?c的正常范圍。貫葉連翹花提取肽通過調(diào)節(jié)炎癥因子的釋放來影響vegf的表達(dá)，炎癥反應(yīng)刺激vegf的產(chǎn)生，貫葉連翹花提取肽通過抑制炎癥反應(yīng)，減少vegf的異常上調(diào)，防止血管新生和血管滲漏。貫葉連翹花提取肽通過抑制炎癥細(xì)胞的活性和炎癥信號(hào)通路來降低tnf-α的水平。貫葉連翹花提取肽通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的抗氧化酶基因表達(dá)，增加過氧化氫酶(cat)等酶的表達(dá)，來增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化防御能力，減少ros的產(chǎn)生和損害。

18、四、歐洲七葉樹葉提取肽為歐洲七葉樹葉經(jīng)木瓜蛋白酶、無花果蛋白酶共同酶解，獲得的1000kda～3000kda的提取肽。歐洲七葉樹葉提取肽通過改善視網(wǎng)膜血管的通透性和調(diào)節(jié)血管功能來治療糖尿病視網(wǎng)膜病變。在糖尿病狀態(tài)下，視網(wǎng)膜血管通透性增加，歐洲七葉樹葉提取肽通過調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞間的連接蛋白，增強(qiáng)血管屏障功能。通過抑制炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激來減輕視網(wǎng)膜組織的損傷。炎癥和氧化應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致視網(wǎng)膜血管病變和神經(jīng)細(xì)胞損傷，歐洲七葉樹葉提取肽通過多種途徑來減輕這些損傷。歐洲七葉樹葉提取肽通過改善視網(wǎng)膜血液循環(huán)和減輕炎癥反應(yīng)來調(diào)節(jié)cys?c的水平。血液循環(huán)的改善減少腎臟等器官的損傷，炎癥反應(yīng)的減輕也阻止cys?c因炎癥而異常升高。歐洲七葉樹葉提取肽通過調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來影響vegf的表達(dá)，通過抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的缺氧反應(yīng)，減少vegf的分泌，防止新生血管的過度形成和血管滲漏。歐洲七葉樹葉提取肽通過調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)成分，阻止炎癥細(xì)胞的遷移，同時(shí)抑制炎癥細(xì)胞內(nèi)的炎癥信號(hào)通路，減少tnf-α的產(chǎn)生。歐洲七葉樹葉提取肽通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡，調(diào)節(jié)谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(gsh/gssg)比值，來增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力，減少ros的積累和損傷。

19、五、貫葉連翹花提取肽和歐洲七葉樹葉提取肽配合具有抗氧化協(xié)同作用：貫葉連翹花提取肽和歐洲七葉樹葉提取肽都具有抗氧化特性。貫葉連翹花提取肽通過其含有的抗氧化成分直接清除活性氧(ros)，并且能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶基因的表達(dá)，如增加過氧化氫酶(cat)等的表達(dá)。歐洲七葉樹葉提取肽也能清除ros，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡，調(diào)節(jié)谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(gsh/gssg)比值。二者配合使用更有效地清除視網(wǎng)膜組織中的ros，減輕氧化應(yīng)激對(duì)視網(wǎng)膜細(xì)胞和血管的損傷。貫葉連翹花提取肽和歐洲七葉樹葉提取肽配合具有抗炎協(xié)同增強(qiáng)作用：炎癥在糖尿病視網(wǎng)膜病變中是關(guān)鍵環(huán)節(jié)。貫葉連翹花提取肽抑制炎癥細(xì)胞的活性，通過抑制炎癥細(xì)胞中的炎癥小體激活來減少腫瘤壞死因子-α(tnf-α)等炎癥因子的分泌，還能調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)分子阻止炎癥相關(guān)信號(hào)通路激活。歐洲七葉樹葉提取肽能夠抑制炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)成分阻止炎癥細(xì)胞遷移，同時(shí)抑制炎癥細(xì)胞內(nèi)的炎癥信號(hào)通路。二者聯(lián)合使用更全面地抑制炎癥反應(yīng)，減輕視網(wǎng)膜組織的炎癥損傷。貫葉連翹花提取肽和歐洲七葉樹葉提取肽配合具有血管保護(hù)協(xié)同作用：貫葉連翹花提取肽通過調(diào)節(jié)炎癥因子釋放影響血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vegf)的表達(dá)，防止血管新生和血管滲漏。歐洲七葉樹葉提取肽能改善視網(wǎng)膜血管的通透性，調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞間的連接蛋白，增強(qiáng)血管屏障功能。二者配合有助于更好地保護(hù)視網(wǎng)膜血管，維持血管的正常功能和結(jié)構(gòu)，減輕糖尿病視網(wǎng)膜病變中的血管病變。

20、六、魚眼提取肽、貫葉連翹花提取肽和歐洲七葉樹葉提取肽配合使用能夠發(fā)揮全方位抗氧化防御：魚眼提取肽含有抗氧化的肽段，能直接清除ros，還能激活視網(wǎng)膜細(xì)胞內(nèi)的抗氧化酶系統(tǒng)，如超氧化物歧化酶(sod)、谷胱甘肽過氧化物酶(gsh-px)等。與貫葉連翹花提取肽和歐洲七葉樹葉提取肽共同使用時(shí)，能夠構(gòu)建一個(gè)多層次的抗氧化防御體系，更高效地清除視網(wǎng)膜組織中的各種ros，從多個(gè)角度減輕氧化應(yīng)激對(duì)視網(wǎng)膜的損害。魚眼提取肽、貫葉連翹花提取肽和歐洲七葉樹葉提取肽配合使用實(shí)現(xiàn)全面抗炎機(jī)制互補(bǔ)：三者各自的抗炎機(jī)制，配合使用能夠更全面地抑制炎癥反應(yīng)的各個(gè)環(huán)節(jié)，包括炎癥細(xì)胞的激活、炎癥因子的釋放和炎癥細(xì)胞的遷移等，從而更有效地減輕視網(wǎng)膜組織的炎癥。魚眼提取肽、貫葉連翹花提取肽和歐洲七葉樹葉提取肽配合使用能夠協(xié)同改善血管和細(xì)胞功能：魚眼提取肽對(duì)視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞有保護(hù)作用，調(diào)節(jié)vegf的表達(dá)，防止新生血管過度形成和血管滲漏。貫葉連翹花提取肽和歐洲七葉樹葉提取肽在血管保護(hù)方面也有各自的作用。同時(shí)，這三種提取肽還共同調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜細(xì)胞的代謝和功能，通過不同的信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞存活，保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞，從血管和細(xì)胞兩個(gè)層面改善糖尿病視網(wǎng)膜病變的狀況。