本發(fā)明涉及醫(yī)療用品，具體涉及一種多孔殼聚糖微粒及制備方法和在傷口愈合中的應用。

背景技術：

1、創(chuàng)傷大出血是戰(zhàn)場及暴力沖突中傷員休克和死亡的主要原因。在戰(zhàn)場、災難和事故等院前情況下，局部止血紗布聯(lián)合手動壓迫是最常見的創(chuàng)傷緊急治療止血方法。許多有效的局部止血劑，例如基于礦物(quickclot沸石粉)、基于肽和蛋白質(凝血酶、纖維蛋白、明膠和膠原蛋白)、基于合成聚合物(聚氰基丙烯酸酯、聚乙二醇、聚乙烯醇)、基于多糖(淀粉、殼聚糖、右旋糖、氧化纖維素)的試劑或材料已在過去20年被用作止血材料。各種來源的止血材料均有各自優(yōu)缺點，如：quickclot沸石粉被美國食品藥品監(jiān)督管理局(fda)批準用于大出血創(chuàng)傷的外用，但由于放熱水合作用，其可導致受傷組織嚴重燒傷。蛋白止血劑對凝血級聯(lián)反應和組織再生具有生物活性，但可能引起潛在的生物污染和逆向免疫反應，且價格昂貴，并且由于儲存問題限制了其應用場景。

2、殼聚糖是一種天然多糖，具有良好的相容性、生物功能和可降解性，通過甲殼素脫乙?；@得，是目前最有前途的止血劑之一。這主要是因為其高效的凝血潛能、豐富的天然甲殼素、廉價、易于儲存和長保質期、可生物降解性、抗菌和促進組織再生等功能。市售的殼聚糖止血劑，包括celox紗布、敷料、hemcontm繃帶已廣泛用于戰(zhàn)場和民用應急領域。殼聚糖止血材料的凝血機制是帶正電荷的殼聚糖與帶負電荷的紅細胞(rbc)之間的靜電相互作用，以及與血小板粘附，聚集形成血小板栓，活化血小板釋放的凝血因子啟動凝血級聯(lián)反應，產生纖維蛋白，進而形成牢固血凝塊封堵出血點。

3、多孔殼聚糖的制備方法包括溶劑致孔、粒子致孔、氣體致孔和冷凍干燥法。溶劑致孔利用惰性溶劑形成孔隙；粒子致孔通過添加顆粒產生孔洞；氣體致孔使用超臨界氣體或反應生成氣體而制孔；冷凍干燥法則通過冰晶升華形成多孔結構。這些方法通過調控孔徑和孔隙率，以適用于不同應用需求。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。本發(fā)明提供了一種新型多孔殼聚糖微粒及其制備方法和應用。所提供的多孔殼聚糖止血微粒具有高的孔隙率，和低的血液凝固指數(shù)，可以用作傷口愈合和止血。

2、具體而言，本發(fā)明提供了如下技術方案：

3、在本發(fā)明的第一方面提供了一種多孔殼聚糖微粒的制備方法，包括：

4、(1)提供殼聚糖溶液，所述殼聚糖溶液為將分子量為10kda～200kda，脫乙酰度為80％以上的殼聚糖溶于乙酸溶液獲得；

5、(2)將所述殼聚糖溶液與乳化劑、油相混合，進行乳化處理，得到乳化產物；

6、(3)將所述乳化產物和堿性溶液混合，攪拌至反應生成含殼聚糖水凝膠微球的產物；

7、(4)分別使用有機溶劑和去離子水對含殼聚糖水凝膠微球的產物進行洗滌，過濾，經冷凍干燥處理得到多孔殼聚糖微粒。

8、本發(fā)明提供了一種新型多孔殼聚糖微粒，其通過特定分子量和脫乙酰度的殼聚糖在油相中乳化、交聯(lián)制孔、經冷凍干燥得到。所制備得到的多孔殼聚糖止血顆?？紫堵矢撸已笖?shù)低，可以用作傷口愈合或者傷口的止血。根據(jù)具體實施例，所述殼聚糖的脫乙酰度為95％左右。所用到的殼聚糖可以是多種來源，包括但不限于蝦、蟹、小龍蝦、蛆殼或金針菇等。

9、根據(jù)本發(fā)明的實施例，步驟(1)中所述殼聚糖溶液為1wt％～6wt％殼聚糖溶液，所述殼聚糖溶液通過將殼聚糖溶于0.5wt％-3wt％的乙酸水溶液中獲得。

10、根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述油相選自橄欖油、大豆油、液體石蠟中的至少一種。

11、根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述乳化劑選自司班80、司班60、吐溫20中的至少一種。

12、根據(jù)本發(fā)明的實施例，在200-1000rpm轉速下進行所述乳化處理。

13、根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述堿性溶液選自氨-氯化銨緩沖溶液、tris-hcl緩沖溶液、磷酸鹽緩沖溶液、碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液中的至少一種。

14、根據(jù)本發(fā)明的實施例，步驟(3)中所述反應時間為0.5-2h；所述乳化產物和所述堿性溶液的體積比為(5～30):1。

15、根據(jù)本發(fā)明的實施例，步驟(4)中所述有機溶劑為乙酸乙酯和乙醇。

16、本發(fā)明的第二方面提供了一種多孔殼聚糖微粒，根據(jù)第一方面任一實施例所述的制備方法獲得；所述多孔殼聚糖微粒的孔隙率大于80％，血液凝固指數(shù)小于10。

17、本發(fā)明的第三方面提供了第二方面所述的多孔殼聚糖微粒在制備傷口愈合藥物或者試劑盒中的用途。

18、本發(fā)明所取得的有益效果至少為：

19、本發(fā)明提供的多孔殼聚糖止血微粒是一種可應用于術中胃腸道出血、實質性臟器以及大動靜脈出血等復雜術中傷口出血的止血劑，或戰(zhàn)時、民用緊急時刻污染傷口的大動靜脈出血的止血劑。其中主要原料為殼聚糖，來源豐富、安全無毒，經殼聚糖乳化、物理交聯(lián)制孔、洗滌干燥等步驟處理，表面粗糙多孔，顯著增加止血材料的比表面積，增大了水分子與止血材料的接觸面積，有利于止血材料吸附水分子，從而顯著增加了止血材料吸附水分子的能力；

20、物理交聯(lián)制孔方式與傳統(tǒng)化學交聯(lián)在增加高分子化合物結構穩(wěn)定性、制孔效果如孔徑大小、空隙率、孔道結構穩(wěn)定性方面具有等同性，而且物理交聯(lián)制孔的方式減少了有毒交聯(lián)劑的加入，進而提高了多孔殼聚糖微粒的生物相容性。以具有不同分子量及脫乙酰度的殼聚糖為原料，可以制備具有不同理化性能如溶解度、粘度、帶電性、帶電量的多孔殼聚糖微粒，以滿足其在止血過程中組織粘附性、抑菌性能、對紅細胞的聚集吸附性、對血小板的聚集活化等促凝血及抑菌作用的發(fā)揮。

21、另外本發(fā)明的止血材料內部具有孔洞結構，有利于水分子在止血材料內部的轉移，從而增強了止血材料轉移血液中水分子的能力，通過這兩個方面的共同作用，提高了其快速吸液性能，在止血過程中濃縮了血液中的凝血成分，加快凝血進程，進行有效的物理性止血。另外多孔殼聚糖止血微粒在生理條件下帶正電，可與帶負電荷的紅細胞(rbc)之間的靜電相互作用，以及與血小板粘附，聚集形成血小板栓，活化血小板釋放的凝血因子啟動凝血級聯(lián)反應，產生纖維蛋白，進而形成牢固血凝塊封堵出血點。

22、本發(fā)明提供的具有止血及抑菌功能的多孔殼聚糖微粒生物相容性好、無細胞毒性、無致敏反應和急性毒性，比表面積大、吸液速率快、溶脹迅速，且具有可調控多孔結構及生理條件下的質子化水平，是一種極具應用前景的臨床及現(xiàn)場急救的殼聚糖類止血材料。

技術特征：

1.一種多孔殼聚糖微粒的制備方法，其特征在于，包括：

2.根據(jù)權利要求1所述的多孔殼聚糖微粒的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述殼聚糖溶液為1wt％～6wt％殼聚糖溶液，所述殼聚糖溶液通過將殼聚糖溶于0.5wt％-3wt％的乙酸水溶液中獲得。

3.根據(jù)權利要求1所述的多孔殼聚糖微粒的制備方法，其特征在于，所述油相選自橄欖油、大豆油、液體石蠟中的至少一種。

4.根據(jù)權利要求1所述的多孔殼聚糖微粒的制備方法，其特征在于，所述乳化劑選自司班80、司班60、吐溫20中的至少一種。

5.根據(jù)權利要求1所述的多孔殼聚糖微粒的制備方法，其特征在于，在200-1000rpm轉速下進行所述乳化處理。

6.根據(jù)權利要求1所述的多孔殼聚糖微粒的制備方法，其特征在于，所述堿性溶液選自氨-氯化銨緩沖溶液、tris-hcl緩沖溶液、磷酸鹽緩沖溶液、碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液中的至少一種。

7.根據(jù)權利要求1所述的多孔殼聚糖微粒的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述反應時間為0.5-2h；所述乳化產物和所述堿性溶液的體積比為(5～30)：1。

8.根據(jù)權利要求1所述的多孔殼聚糖微粒的制備方法，其特征在于，步驟(4)中所述有機溶劑為乙酸乙酯和乙醇。

9.一種多孔殼聚糖微粒，其特征在于，根據(jù)權利要求1～8中任一項所述的制備方法獲得；所述多孔殼聚糖微粒的孔隙率大于80％，血液凝固指數(shù)小于10。

10.權利要求9所述的多孔殼聚糖微粒在制備傷口愈合藥物或者試劑盒中的用途。

技術總結
本發(fā)明提供了一種多孔殼聚糖微粒及制備方法和在傷口愈合中的應用。多孔殼聚糖止血微粒通過下述方法制備獲得：(1)提供殼聚糖溶液，所述殼聚糖溶液為將分子量為10kDa～200kDa，脫乙酰度至少為80％的殼聚糖溶于乙酸溶液獲得；(2)將所述殼聚糖溶液與乳化劑、油相混合，進行乳化處理，得到乳化產物；(3)將所述乳化產物和堿性溶液混合，攪拌至反應生成含多孔殼聚糖的產物；(4)分別使用有機溶劑和去離子水對含多孔殼聚糖的產物進行洗滌，過濾，經冷凍干燥處理得到多孔殼聚糖微粒。所制備得到的多孔殼聚糖微粒具有高的孔隙率和低的血液凝固指數(shù)，可以用作止血。

技術研發(fā)人員：張均,員榮平
受保護的技術使用者：北京化工大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/5/8