本發(fā)明涉及對β-葡聚糖具有結(jié)合特異性的抗體或其抗原結(jié)合片段，以及這種單克隆抗體的生產(chǎn)。

背景技術(shù)：

1、抗體是屬于免疫球蛋白超家族蛋白質(zhì)的糖蛋白。主要有五類免疫球蛋白，包括igg、igm、iga、ige和igd?？贵w通常由基本結(jié)構(gòu)單元組成，該基本結(jié)構(gòu)單元包含兩條重鏈和兩條輕鏈。例如，igg免疫球蛋白分子包含四條多肽鏈，其中兩條是相同的重(h)鏈，其中兩條是相同的輕(k)鏈。每條重鏈包含一個n-末端可變域(vh)和三個恒定域(ch1、ch2和ch3)，以鉸鏈區(qū)連接ch1和ch2。每條輕鏈包含一個n-末端可變域(vl)和一個恒定域(cl)，它們共同與重鏈的vh和ch1域關(guān)聯(lián)。

2、抗體可經(jīng)由(via，通過)抗原結(jié)合片段(fab)可變區(qū)識別抗原，該可變區(qū)包含vl、cl、vh和ch1域。抗體可以通過可結(jié)晶片段區(qū)(fc區(qū))激活免疫系統(tǒng)，該可結(jié)晶片段區(qū)是包含ch2域和ch3域的抗體的尾部區(qū)。

3、重鏈可變區(qū)(vh)是指包含三個互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)的抗體的重鏈片段，三個互補(bǔ)決定區(qū)位于框架區(qū)之間，框架區(qū)形成支撐cdr的支架。類似地，輕鏈可變區(qū)(vl)包含三個cdr和它們周圍的框架區(qū)。

4、對于抗體或其抗原結(jié)合片段，cdr是在重鏈和輕鏈的可變區(qū)中形成環(huán)的高度可變的氨基酸序列。因此，cdr能夠與抗原相互作用。重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)各自包含三個cdr，本文中稱為cdrh1、cdrh2和cdrh3(重鏈cdr)以及cdrl1、cdrl2和cdrl3(輕鏈cdr)。

5、igg是在血液和細(xì)胞外液中發(fā)現(xiàn)的主要抗體同種型(isotype，同型)。igg在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮多種作用，包括促進(jìn)病原體凝集、激活補(bǔ)體系統(tǒng)、中和毒素以及促進(jìn)抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(adcc)。igg以各種亞型存在，包括igg1、igg2、igg3和igg4。igg1是用于本實(shí)施方式的目的的示例性抗體。igg1抗體可源自非人類來源，諸如人類種系(germline)抗體文庫(repertoire)之外的任何來源。盡管不相同，但從非人類哺乳動物(諸如小鼠)獲得的抗體包含通?？稍谌祟愔斜磉_(dá)的重鏈可變區(qū)氨基酸序列。

6、因此，非人類起源但可以像來自人類抗體文庫表達(dá)的序列可被視為人類序列。當(dāng)對諸如igg1的非人類抗體的大部分進(jìn)行工程化以匹配在人類抗體文庫中表達(dá)的序列時，該工程化的抗體被稱為“人源化的”并且該方法稱為“人源化”。在其他方面，人源化是指保留鼠序列的某些部分，其可以包括cdr，并將這些序列整合到人類抗體的部分中，諸如重鏈和輕鏈的恒定區(qū)。這通常也稱為cdr移植，其中異種cdr被整合到人類抗體框架中以降低免疫原性。通常，這種人源化的抗體表現(xiàn)出增加的功效，并且減少與鼠或其他非人類抗體關(guān)聯(lián)的、在人類中經(jīng)常出現(xiàn)的整體免疫原性、炎癥和其他不希望的作用。

7、β-葡聚糖是在各種生物體的細(xì)胞壁中發(fā)現(xiàn)的一組異質(zhì)的(heterogeneous)天然多糖，其中一些生物體是致病的，包括真菌和細(xì)菌。研究表明，β-葡聚糖可以發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，因此對β-葡聚糖具有良好結(jié)合親和力的抗體可以通過抑制這些分子提供有益結(jié)果。

8、此前，已經(jīng)以不同程度的成功工程化單克隆抗體，以提供與β-葡聚糖的結(jié)合。即便如此，在臨床、診斷和治療背景下，對于顯示出改善地與β-葡聚糖結(jié)合的單克隆抗體仍然有顯著需求，尤其是對于顯示出這些特性的人源化的抗體。本文所述的實(shí)施方式針對這些及其他改進(jìn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明人已開發(fā)抗體或其抗原結(jié)合片段，其靶向β-葡聚糖并且可以用作抗真菌劑或用于制備能夠治療真菌感染的抗真菌劑。

2、本發(fā)明人令人驚訝地證明，可以制備這種與β-葡聚糖有改善的結(jié)合的抗體。進(jìn)一步令人驚訝地證明，當(dāng)用作抗真菌劑和/或用于治療真菌感染時，所述抗體導(dǎo)致了改善的臨床、治療和診斷效果。

3、在一個方面，本發(fā)明提供了抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，該抗體或抗原結(jié)合片段包含輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)包含：

4、(a)seq?id?no?1的cdrl1；

5、(b)cdrl2，選自由seq?id?no?2和seq?id?no?3組成的組；和

6、(c)seq?id?no?4的cdrl3；

7、以及重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)包含：

8、(d)cdrh1，選自由seq?id?no?5-7組成的組；

9、(e)cdrh2，選自由seq?id?no?8-12和seq?id?no?28組成的組；和

10、(f)seq?id?no?13的cdrh3。

11、在一個方面，本發(fā)明提供了抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，該抗體或其抗原結(jié)合片段包含：含有與seq?id?no?14具有至少70％同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，和/或含有與seq?id?no?16具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。

12、在一個方面，本發(fā)明提供了抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，該抗體或其抗原結(jié)合片段包含：含有與seq?id?no?14具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，和/或含有與seq?id?no?18具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。

13、在一個方面，本發(fā)明提供了抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，該抗體或其抗原結(jié)合片段包含：含有與seq?id?no?15具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，和/或含有與seq?id?no?17具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。

14、在一個方面，本發(fā)明提供了抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，該抗體或其抗原結(jié)合片段包含：含有與seq?id?no?14具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，和/或含有與seq?id?no?17具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。

15、在一個方面，本發(fā)明提供了抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，該抗體或其抗原結(jié)合片段包含：含有與seq?id?no?14具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，和/或含有與seq?id?no?19具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。

16、在一個方面，本發(fā)明提供了抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，該抗體或其抗原結(jié)合片段包含：含有與seq?id?no?14具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，和/或含有與seq?id?no?20具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。

17、在一個方面，本發(fā)明提供了抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，該抗體或其抗原結(jié)合片段包含：含有與seq?id?no?14具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，和/或含有與seq?id?no?29具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。

18、在一個方面，本發(fā)明提供了抗體或抗原結(jié)合片段，其中，該抗體或抗原結(jié)合片段是人源化的。

19、在一個方面，本發(fā)明提供了抗體或抗原結(jié)合片段，其中，該抗體或抗原結(jié)合片段能夠結(jié)合至β-葡聚糖。

20、在進(jìn)一步的方面，抗體或其抗原結(jié)合片段能夠結(jié)合至1,3-β-葡聚糖或1,6-β-葡聚糖。

21、在進(jìn)一步的方面，抗體或其抗原結(jié)合片段能夠結(jié)合至海帶多糖(laminarin，海藻多糖，昆布多糖)。

22、在一個方面，抗體或其抗原結(jié)合片段可用作抗真菌劑。

23、在進(jìn)一步的方面，抗體或其抗原結(jié)合片段可用在真菌感染的治療中。

24、在進(jìn)一步的方面，抗體或其抗原結(jié)合片段可用在用于治療真菌感染的藥物的制備中。

25、在進(jìn)一步的方面，抗體或其抗原結(jié)合片段可用在曲霉菌(aspergillus)感染的治療中。

26、在進(jìn)一步的方面，抗體或其抗原結(jié)合片段可用在煙曲霉菌(aspergillusfumigatus)感染的治療中。

27、在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了治療真菌感染的方法，包括施用本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段。

28、在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了治療曲霉菌感染的方法，包括施用本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段。

29、在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了治療煙曲霉菌感染的方法，包括施用本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段。

30、在一個方面，本發(fā)明提供了編碼如本文公開的抗體或其抗原結(jié)合片段的核酸。

31、在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了核酸，該核酸編碼與seq?id?no?21具有至少70％序列同一性的輕鏈可變區(qū)，和/或與seq?id?no?23具有至少70％序列同一性的重鏈可變區(qū)。

32、在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了核酸，該核酸編碼與seq?id?no?21具有至少70％序列同一性的輕鏈可變區(qū)，和/或與seq?id?no?24具有至少70％序列同一性的重鏈可變區(qū)。

33、在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了核酸，該核酸編碼與seq?id?no?22具有至少70％序列同一性的輕鏈可變區(qū)，和/或與seq?id?no?24具有至少70％序列同一性的重鏈可變區(qū)。

34、在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了核酸，該核酸編碼與seq?id?no?21具有至少70％序列同一性的輕鏈可變區(qū)，和/或與seq?id?no?25具有至少70％序列同一性的重鏈可變區(qū)。

35、在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了核酸，該核酸編碼與seq?id?no?21具有至少70％序列同一性的輕鏈可變區(qū)，和/或與seq?id?no?26具有至少70％序列同一性的重鏈可變區(qū)。

36、在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了核酸，該核酸編碼與seq?id?no?21具有至少70％序列同一性的輕鏈可變區(qū)，和/或與seq?id?no?27具有至少70％序列同一性的重鏈可變區(qū)。

37、在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了核酸，該核酸編碼與seq?id?no?21具有至少70％序列同一性的輕鏈可變區(qū)，和/或與seq?id?no?30具有至少70％序列同一性的重鏈可變區(qū)。

38、在一個方面，本發(fā)明提供了編碼抗體或抗原結(jié)合片段的核酸，其中，該抗體或抗原結(jié)合片段是人源化的。

39、在一個方面，本發(fā)明提供了編碼抗體或抗原結(jié)合片段的核酸，其中，該抗體或抗原結(jié)合片段能夠結(jié)合至β-葡聚糖。

40、在進(jìn)一步的方面，核酸編碼能夠結(jié)合至1,3-β-葡聚糖或1,6-β-葡聚糖的抗體或其抗原結(jié)合片段。

41、在進(jìn)一步的方面，核酸編碼能夠結(jié)合至海帶多糖的抗體或其抗原結(jié)合片段。