本發(fā)明屬于環(huán)境保護(hù)綠色健康養(yǎng)殖領(lǐng)域，具體涉及一種廣譜噬菌體及其益生制劑與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、大規(guī)模水產(chǎn)養(yǎng)殖活動(dòng)引起病害頻發(fā)及細(xì)菌耐藥性等系列難題。傳統(tǒng)抗生素通常對(duì)病原菌有一定去除效果，但抗生素的濫用容易造成耐藥性病原菌的累積，也容易造成水產(chǎn)養(yǎng)殖特別是高密度工廠化養(yǎng)殖循環(huán)水生物處理系統(tǒng)的紊亂和崩潰。

2、綠色生態(tài)養(yǎng)殖已成為水產(chǎn)行業(yè)關(guān)注的熱點(diǎn)。近年來(lái)，噬菌體作為殺滅病原菌的新技術(shù)也開始有一定應(yīng)用，該技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)病原菌的快速去除，起到凈化環(huán)境和保障水產(chǎn)健康養(yǎng)殖的作用。但噬菌體殺菌譜窄，無(wú)法實(shí)現(xiàn)多種病原菌的同時(shí)防控。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種廣譜噬菌體及其益生制劑與應(yīng)用。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

3、一種廣譜噬菌體，廣譜噬菌體為噬菌體ytlj-vbn1，于2024年1月22日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號(hào)為gdmcc?no：64300-b1，分類命名為vibrio?phage，保藏地址為中國(guó)廣州。

4、一種所述的廣譜噬菌體的應(yīng)用，所述噬菌體ytlj-vbn1在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用。

5、所述噬菌體ytlj-vbn1在水產(chǎn)養(yǎng)殖中抑制致病弧菌中的應(yīng)用。

6、所述致病弧菌為哈維氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、氣單胞菌、愛(ài)德華氏菌、坎貝爾弧菌、霍亂弧菌、殺對(duì)蝦弧菌、創(chuàng)傷弧菌、鰻弧菌中的一種或幾種。

7、一種廣譜噬菌體益生制劑，所述益生制劑含所述的廣譜噬菌體，或，含所述的廣譜噬菌體和短芽孢桿菌ytlj-n-sxh2。

8、所述短芽孢桿菌ytlj-n-sxh2，于2022年1月17日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號(hào)為gdmcc?no：62215，分類命名為brevibacillus?sp.，保藏地址中國(guó)廣州。

9、一種所述的廣譜噬菌體益生制劑的制備方法，所述廣譜噬菌體益生制劑為廣譜噬菌體和短芽孢桿菌ytlj-n-sxh2時(shí)，步驟如下：

10、1）噬菌體和菌種擴(kuò)繁：將噬菌體ytlj-vbn1與弧菌各按1-10wt%依次接種至擴(kuò)繁培養(yǎng)基中，于28-35℃恒溫培養(yǎng)12-48h，而后過(guò)濾去除培養(yǎng)液中弧菌，獲得弧菌噬菌體ytlj-vbn1擴(kuò)繁培養(yǎng)液；短芽孢桿菌ytlj-n-sxh2按1-10wt%接種至擴(kuò)繁培養(yǎng)基，于溫度28-35℃下培養(yǎng)24-72小時(shí)，獲得短芽孢桿菌ytlj-n-sxh2擴(kuò)繁培養(yǎng)液；

11、所述弧菌為副溶血弧菌、鰻弧菌、溶藻弧菌、霍亂弧菌、哈維氏弧菌、坎貝爾弧菌；

12、2）噬菌體和益生菌組裝混合：將上述獲得的擴(kuò)繁后弧菌噬菌體ytlj-vbn1與短芽孢桿菌ytlj-n-sxh2培養(yǎng)液分別冷凍干燥獲得各自凍干粉，然后弧菌噬菌體ytlj-vbn1與短芽孢桿菌ytlj-n-sxh2凍干粉按照質(zhì)量比1～10:1混合獲得混合凍干粉；

13、3）助劑制備：將聚谷氨酸、短芽孢桿菌抗菌肽-蒙脫土復(fù)合物、菊粉、大黃、杜仲多糖按質(zhì)量比0.01-0.1:1:0.001-0.01:0.001-0.01:0.0001-0.001混合，混合后即為助劑；其中，短芽孢桿菌抗菌肽-蒙脫土復(fù)合物由短芽孢桿菌抗菌肽、蒙脫土按照質(zhì)量比1：10-100球磨混合處理后備用；

14、4）益生制劑制備：將步驟2）所得混合凍干粉與步驟3）所得助劑按照質(zhì)量比1:1-100混合，制得益生制劑；其中，益生制劑噬菌體效價(jià)≥1.0×109個(gè)/ml，總有效活菌數(shù)≥1.0×109個(gè)/ml。

15、所述短芽孢桿菌抗菌肽為將步驟1）擴(kuò)繁獲得的短芽孢桿菌ytlj-n-sxh2培養(yǎng)液中添加其質(zhì)量70-90%的硫酸銨，混合后調(diào)節(jié)體系ph至9.0-10.0，而后靜置6-24小時(shí)，靜置后冷凍干燥得短芽孢桿菌抗菌肽，存儲(chǔ)于干燥處待用。

16、一種所述的廣譜噬菌體益生制劑的應(yīng)用，所述廣譜噬菌體益生制劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用。

17、所述廣譜噬菌體益生制劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中抑制多種病原菌、降低死亡率的應(yīng)用。

18、所述廣譜噬菌體益生制劑添加量占水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中水體質(zhì)量的0.1-1wt%。

19、本發(fā)明所具有的優(yōu)點(diǎn)：

20、1）所獲得的噬菌體為廣譜噬菌體，可同時(shí)高效殺滅多種高致病弧菌、氣單胞菌、愛(ài)德華氏菌等病原菌，能夠克服傳統(tǒng)噬菌體殺菌譜窄的難題，可生態(tài)友好地解決抗生素防治病菌過(guò)程中易產(chǎn)生耐藥性的難題。

21、2）本發(fā)明的廣譜噬菌體ytlj-vbn1與益生菌短芽孢桿菌ytlj-n-sxh2有很好的互補(bǔ)性；其中，噬菌體ytlj-vbn1能夠殺滅包括哈維氏弧菌、副溶血弧菌、氣單胞菌、愛(ài)德華氏菌、溶藻弧菌、坎貝爾弧菌、霍亂弧菌、殺對(duì)蝦弧菌、創(chuàng)傷弧菌、鰻弧菌等在內(nèi)的多種高致病菌。短芽孢桿菌ytlj-n-sxh2則能夠抑制不動(dòng)桿菌、假單胞菌、諾卡氏菌、水霉、鰓霉、鐮刀菌等病原菌。兩者混合能夠優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，為多種病原菌的聯(lián)合生態(tài)防治去除提供新思路，進(jìn)一步彌補(bǔ)傳統(tǒng)噬菌體療法宿主譜過(guò)窄的短板和不足。

技術(shù)特征：

1.一種廣譜噬菌體，其特征在于：所述廣譜噬菌體為噬菌體ytlj-vbn1，于2024年1月22日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號(hào)為gdmcc?no：64300-b1，分類命名為vibriophage，保藏地址為中國(guó)廣州。

2.一種權(quán)利要求1所述的廣譜噬菌體的應(yīng)用，其特征在于：所述噬菌體ytlj-vbn1在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的廣譜噬菌體的應(yīng)用，其特征在于：所述噬菌體ytlj-vbn1在水產(chǎn)養(yǎng)殖中抑制致病弧菌中的應(yīng)用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的廣譜噬菌體的應(yīng)用，其特征在于：所述致病弧菌為哈維氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、氣單胞菌、愛(ài)德華氏菌、坎貝爾弧菌、霍亂弧菌、殺對(duì)蝦弧菌、創(chuàng)傷弧菌、鰻弧菌中的一種或幾種。

5.一種廣譜噬菌體益生制劑，其特征在于：所述廣譜噬菌體益生制劑含權(quán)利要求1所述的廣譜噬菌體，或，含權(quán)利要求1所述的廣譜噬菌體和短芽孢桿菌ytlj-n-sxh2。

6.一種權(quán)利要求5所述的廣譜噬菌體益生制劑的制備方法，其特征在于，所述廣譜噬菌體益生制劑為廣譜噬菌體和短芽孢桿菌ytlj-n-sxh2時(shí)，步驟如下：

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的廣譜噬菌體益生制劑的制備方法，其特征在于：所述短芽孢桿菌抗菌肽為將權(quán)利要求6中步驟1）擴(kuò)繁獲得的短芽孢桿菌ytlj-n-sxh2培養(yǎng)液中添加其質(zhì)量70-90%的硫酸銨，混合后調(diào)節(jié)體系ph至9.0-10.0，而后靜置6-24小時(shí)，靜置后冷凍干燥得短芽孢桿菌抗菌肽，存儲(chǔ)于干燥處待用。

8.一種權(quán)利要求5所述的廣譜噬菌體益生制劑的應(yīng)用，其特征在于：所述廣譜噬菌體益生制劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的廣譜噬菌體益生制劑的應(yīng)用，其特征在于：所述廣譜噬菌體益生制劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中抑制多種病原菌、降低死亡率的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的廣譜噬菌體益生制劑的應(yīng)用，其特征在于：所述廣譜噬菌體益生制劑添加量占水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中水體質(zhì)量的0.1-1wt%。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于環(huán)境保護(hù)綠色健康養(yǎng)殖領(lǐng)域，具體涉及一種廣譜噬菌體及其益生制劑與應(yīng)用。所述廣譜噬菌體為噬菌體YTLJ?VBN1，于2024年1月22日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號(hào)為GDMCC?No：64300?B1，分類命名為Vibrio?phage，保藏地址為中國(guó)廣州。廣譜噬菌體可同時(shí)高效殺滅多種高致病弧菌、氣單胞菌、愛(ài)德華氏菌等病原菌，能夠克服傳統(tǒng)噬菌體殺菌譜窄的難題，可生態(tài)友好地解決抗生素防治病菌過(guò)程中易產(chǎn)生耐藥性的難題。

技術(shù)研發(fā)人員：呂劍,劉彥希,武君,王建華,張翠,呂孝東
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國(guó)科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8