本發(fā)明涉及生物技術(shù)，具體涉及一種sarna及其應(yīng)用與sarna疫苗和方法與藥物組合。

背景技術(shù)：

1、自復(fù)制rna（sarna）的發(fā)展為疫苗設(shè)計和基因治療引入了一種變革性的方法。目前，基于sarna的幾種疫苗正在進行臨床試驗，顯示出良好的安全性和有效性。sarna源自于阿爾法病毒科的病毒，如委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒（veev）、森德比森林病毒（sfv）和辛德比斯病毒，這些病毒特點在于它們能夠在宿主細胞內(nèi)復(fù)制遺傳物質(zhì)。sarna關(guān)鍵優(yōu)勢就在于其自我復(fù)制的能力，其在細胞內(nèi)可產(chǎn)生高達2?x?10^5的高拷貝數(shù)。這一特性使得使用比傳統(tǒng)mrna更少的sarna量就能實現(xiàn)有效的基因遞送和產(chǎn)生高滴度的保護抗體。sarna的自我復(fù)制過程在轉(zhuǎn)染后啟動，編碼的復(fù)制酶被翻譯并與基因組rna的5'和3'端相互作用，合成互補的基因組rna拷貝。這些拷貝作為模板，用于合成新的正鏈、帶帽和聚腺苷酸化的基因組拷貝和亞基因組轉(zhuǎn)錄本，導(dǎo)致體內(nèi)抗原的高產(chǎn)量。在疫苗開發(fā)方面，sarna在臨床前模型中顯示出比非復(fù)制性mrna和dna疫苗更優(yōu)越，因為它能提供非常高的表達水平，并同時誘導(dǎo)強烈的先天免疫反應(yīng)，從而增強免疫。

2、sarna的獨特特性是疫苗和基因治療的下一代技術(shù)的平臺，因為它能從微小的轉(zhuǎn)染模板中產(chǎn)生高水平的蛋白，與常規(guī)mrna相比，在效果和劑量要求方面展現(xiàn)出了顯著的優(yōu)勢。然而，sarna觸發(fā)的強烈先天免疫反應(yīng)，特別是蛋白激酶r（pkr）和干擾素（ifn）信號通路的激活，一直是其充分利用的主要障礙。這種免疫反應(yīng)是由模式識別受體感應(yīng)sarna翻譯過程中形成的雙鏈rna中間體啟動的，導(dǎo)致翻譯關(guān)閉，阻礙了目的基因的表達。最近的研究表明，將修飾核苷，如5-甲基胞嘧啶（5mc）整合到sarna中可以抑制早期干擾素反應(yīng)，并增強sarna的表達。盡管該方法取得了一些進展，但這種方法固有的局限性仍然存在。具體來說，由修飾sarna分子復(fù)制產(chǎn)生的后代sarna拷貝包含野生型核苷酸，因為病毒rna依賴的rna聚合酶（rdrp）僅使用野生型核苷酸進行復(fù)制。因此，雖然最初修飾的sarna可能表現(xiàn)出增強基因表達的性能，但隨后的復(fù)制輪次產(chǎn)生的野生型sarna，仍然受到限制抗原表達的先天免疫反應(yīng)的影響。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷與不足，本發(fā)明提供了一種sarna及其應(yīng)用與sarna疫苗和方法與藥物組合。

2、本發(fā)明采用的技術(shù)解決方案是：一種sarna，所述的sarna包括單純皰疹病毒（hsv）的icp34.5蛋白基因互補的核苷酸序列。

3、所述的icp34.5蛋白基因為i型單純皰疹病毒（hsv-1）的icp34.5蛋白基因，其核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

4、所述的sarna包括單純皰疹病毒（hsv）的icp34.5蛋白基因啟動子區(qū)-218位點至-233位點區(qū)域互補的核苷酸序列。

5、一種hsv病毒icp34.5蛋白基因的sarna疫苗，所述的sarna疫苗是將編碼icp34.5蛋白的核酸片段插入到sarna疫苗的表達載體中構(gòu)建的。

6、所述的icp34.5蛋白的編碼基因的核苷酸序列為seq?id?no:1。

7、一種sarna在制備基因治療藥物上的應(yīng)用。

8、所述的基因治療藥物為增強特定基因表達和延長抗原表達時間的藥物。

9、所述的基因治療藥物為抑制宿主的抗病毒先天免疫反應(yīng)的藥物。

10、一種抑制sarna觸發(fā)的宿主抗病毒先天免疫反應(yīng)的方法，所述的方法為通過編碼icp34.5的sarna抑制pkr和ifn信號通路，以增強外來基因的表達和減少免疫介導(dǎo)的副作用。

11、一種優(yōu)化的基因遞送效率的方法，所述的方法為通過整合icp34.5編碼序列到sarna中，以提高基因遞送效率和治療效果。

12、一種延長基因治療中抗原表達時間的方法，所述的方法為通過整合icp34.5編碼序列到sarna中，促進eif2α的去磷酸化，延長基因在宿主細胞中的表達時間。

13、一種基因治療的藥物組合，所述的藥物組合包括所述的sarna和載體細胞。

14、所述的載體細胞為間充質(zhì)干細胞，t細胞或nk細胞。

15、一種基因遞送系統(tǒng)，所述的基因遞送系統(tǒng)包括能激活icp34.5蛋白基因的sarna。

16、本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了一種sarna及其應(yīng)用與sarna疫苗和方法與藥物組合，該發(fā)明具有以下優(yōu)點：

17、（1）增強基因表達和翻譯：通過編碼icp34.5，sarna能夠抑制宿主的抗病毒先天免疫反應(yīng)，特別是通過抑制pkr和ifn信號通路，減少翻譯關(guān)閉，從而增強基因的表達和翻譯。

18、（2）延長抗原表達時間：icp34.5的加入有助于延長感興趣基因的表達時間，這對于基因治療和疫苗開發(fā)來說是至關(guān)重要的，因為它可以提供更持久的治療效果。

19、（3）優(yōu)化基因遞送系統(tǒng)：icp34.5的整合確保了后代sarna具有相同的免疫逃避特性，這可能優(yōu)化基因遞送系統(tǒng)，提高其效率和效果。

20、（4）減少免疫反應(yīng)：通過編碼icp34.5，sarna能夠減少強烈的先天免疫反應(yīng)，這對于減少基因治療中的副作用和提高治療窗口具有重要意義。

技術(shù)特征：

1.一種sarna，其特征在于，所述的sarna包括單純皰疹病毒（hsv）的icp34.5蛋白基因互補的核苷酸序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的sarna，其特征在于，所述的icp34.5蛋白基因為i型單純皰疹病毒（hsv-1）的icp34.5蛋白基因，其核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的sarna，其特征在于，所述的sarna包括單純皰疹病毒（hsv）的icp34.5蛋白基因啟動子區(qū)-218位點至-233位點區(qū)域互補的核苷酸序列。

4.一種hsv病毒icp34.5蛋白基因的sarna疫苗，其特征在于，所述的sarna疫苗是將編碼icp34.5蛋白的核酸片段插入到sarna疫苗的表達載體中構(gòu)建的。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的sarna疫苗，其特征在于，所述的icp34.5蛋白的編碼基因的核苷酸序列為seq?id?no:1。

6.一種權(quán)利要求1所述的sarna在制備基因治療藥物上的應(yīng)用。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的基因治療藥物為增強特定基因表達和延長抗原表達時間的藥物。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的基因治療藥物為抑制宿主的抗病毒先天免疫反應(yīng)的藥物。

9.一種抑制sarna觸發(fā)的宿主抗病毒先天免疫反應(yīng)的方法，其特征在于，所述的方法為通過編碼icp34.5的sarna抑制pkr和ifn信號通路，以增強外來基因的表達和減少免疫介導(dǎo)的副作用。

10.一種優(yōu)化的基因遞送效率的方法，其特征在于，所述的方法為通過整合icp34.5編碼序列到sarna中，以提高基因遞送效率和治療效果。

11.一種延長基因治療中抗原表達時間的方法，其特征在于，所述的方法為通過整合icp34.5編碼序列到sarna中，促進eif2α的去磷酸化，延長基因在宿主細胞中的表達時間。

12.一種基因治療的藥物組合，其特征在于，所述的藥物組合包括權(quán)利要求1所述的sarna和載體細胞。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的藥物組合，其特征在于，所述的載體細胞為間充質(zhì)干細胞，t細胞或nk細胞。

14.一種基因遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述的基因遞送系統(tǒng)包括能激活icp34.5蛋白基因的sarna。

技術(shù)總結(jié)
一種saRNA及其應(yīng)用與saRNA疫苗和方法與藥物組合，構(gòu)建了編碼HSV?ICP34.5的saRNA，可顯著增強基因的翻譯和表達的能力，并優(yōu)化其在基因遞送系統(tǒng)中的使用，為疫苗和基因治療提供更加優(yōu)越的應(yīng)用載體，通過編碼ICP34.5，saRNA能夠抑制宿主的抗病毒先天免疫反應(yīng)，特別是通過抑制PKR和IFN信號通路，減少翻譯關(guān)閉，從而增強基因的表達和翻譯，通過ICP34.5的加入有助于延長感興趣基因的表達時間，提供更持久的治療效果，ICP34.5的整合確保了后代saRNA具有相同的免疫逃避特性，優(yōu)化基因遞送系統(tǒng)，提高其效率和效果。通過編碼ICP34.5，saRNA能夠減少強烈的先天免疫反應(yīng)，減少基因治療中的副作用和提高治療窗口。

技術(shù)研發(fā)人員：夏玉龍,盧學(xué)敏,吳雅彬,趙純?nèi)~,陳尚武,鄭杰
受保護的技術(shù)使用者：國科溫州研究院（溫州生物材料與工程研究所）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8