本發(fā)明屬于柑橘育種領(lǐng)域，具體涉及一種柑橘csmyb62基因及其在柑橘枝刺軟化中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、刺是植物防御食草動物的物理防護策略，該策略得益于刺的尖端硬化。柑橘枝刺是變態(tài)枝條，與枝條頂端持續(xù)生長不同，柑橘枝刺頂部細胞分裂停止，這些細胞完成伸長后，初生細胞壁逐漸沉積木質(zhì)化的次生細胞壁，導致細胞壁增厚硬化，最終形成堅硬、鋒利的刺尖。

2、柑橘類果樹豐富多樣，然而大多數(shù)柑橘品種都具有枝刺，特別是一些砧木品種。柑橘枝刺在柑橘嫁接、修剪、果實采收等農(nóng)事操作中帶來極大不便；柑橘枝刺還易刺傷果實和葉片，傳播病蟲害。然而刺尖硬化的調(diào)控機制尚未明確。因此，培育枝刺弱化或者無刺柑橘接穗和砧木品種是柑橘育種的重要目標之一。

3、有鑒于此，特提出本申請。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供了一種柑橘csmyb62基因及其在柑橘枝刺軟化中的應(yīng)用。

2、本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)：

3、一種柑橘csmyb62基因，所述的柑橘csmyb62基因的核苷酸序列為seq?id?no：1所示或者在seq?id?no：1所示核苷酸序列經(jīng)取代、缺失或添加一個或幾個核苷酸且具有編碼同等活性蛋白的核苷酸序列。

4、本發(fā)明還提供了一種柑橘csmyb62基因在柑橘枝刺軟化中的應(yīng)用，所述的應(yīng)用通過降低或消除柑橘csmyb62基因的活性實現(xiàn)。進一步的，所述的應(yīng)用通過敲低或敲除柑橘csmyb62基因?qū)崿F(xiàn)。

5、本發(fā)明還提供了一種柑橘枝刺軟化的方法，其為降低或消除柑橘csmyb62基因的活性。

6、進一步的，所述的柑橘枝刺軟化的方法為敲低或敲除柑橘csmyb62基因。

7、更進一步的，所述的柑橘枝刺軟化的方法包括以下步驟：

8、(1)設(shè)計靶向柑橘csmyb62基因的靶點序列；

9、(2)構(gòu)建靶向柑橘csmyb62基因的基因編輯載體；

10、(3)靶向柑橘csmyb62基因的基因編輯載體轉(zhuǎn)化柑橘，經(jīng)篩選得到柑橘csmyb62基因被敲除的植株，即得到枝刺短而軟的柑橘植株。

11、進一步的，步驟(1)中，靶向柑橘csmyb62基因的靶點為核苷酸序列為seq?id?no：2的靶點1和核苷酸序列為seq?id?no：3的靶點2。靶向靶點1的grna1的引物分別為核苷酸序列如seq?id?no：4、5所示的grna1-f、grna1-r，靶向靶點2的grna2的引物分別為核苷酸序列如seq?id?no：6、7所示的grna2-f、grna2-r。

12、進一步的，步驟(2)中包括：將步驟(1)中的兩個靶點引物退火后連接到基因編輯載體中得到靶向柑橘csmyb62基因的基因編輯載體。所述的基因編輯載體優(yōu)選為pcambia1300-pyao-cas9。

13、進一步的，步驟(3)包括：將步驟(2)獲得的靶向柑橘csmyb62基因的基因編輯載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌，制備含基因編輯載體的農(nóng)桿菌菌液，農(nóng)桿菌菌液侵染柑橘無菌幼苗上胚軸，經(jīng)熒光篩選、hi-tom檢測得到柑橘csmyb62基因被敲除的csmyb62植株，即得到枝刺短而軟的柑橘植株。

14、本發(fā)明還提供了柑橘csmyb62基因在培育枝刺弱化的柑橘品種中的應(yīng)用。所述的枝刺弱化的柑橘品種為csmyb62基因活性降低或失活的柑橘品種。

15、本發(fā)明的優(yōu)點和有益效果：本發(fā)明發(fā)現(xiàn)柑橘csmyb62基因是柑橘枝刺尖端硬化調(diào)控關(guān)鍵基因，利用基因編輯敲除csmyb62基因，能夠顯著降低柑橘枝刺長度以及硬度，并且不影響轉(zhuǎn)基因植株正常生長。因此該基因可以作為培育枝刺弱化柑橘品種的重要候選基因。本發(fā)明可為柑橘枝刺性狀遺傳改良提供了重要的理論基礎(chǔ)和基因資源。

技術(shù)特征：

1.一種柑橘csmyb62基因，其特征在于：所述的柑橘csmyb62基因的核苷酸序列為seqid?no：1所示或者在seq?id?no：1所示核苷酸序列經(jīng)取代、缺失或添加一個或幾個核苷酸且具有編碼同等活性蛋白的核苷酸序列。

2.權(quán)利要求1所述的柑橘csmyb62基因在柑橘枝刺軟化中的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于：所述的應(yīng)用通過降低或消除柑橘csmyb62基因的活性實現(xiàn)。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于：所述的應(yīng)用通過敲低或敲除柑橘csmyb62基因?qū)崿F(xiàn)。

5.一種柑橘枝刺軟化的方法，其特征在于：所述的方法為降低或消除權(quán)利要求1所述的柑橘csmyb62基因的活性。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的柑橘枝刺軟化的方法，其特征在于：所述的方法為敲低或敲除柑橘csmyb62基因。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的柑橘枝刺軟化的方法，其特征在于：所述的方法包括以下步驟：

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：步驟(1)中，靶向柑橘csmyb62基因的靶點為核苷酸序列為seq?id?no：2的靶點1和核苷酸序列為seq?id?no：3的靶點2；靶向靶點1的grna1的引物分別為核苷酸序列如seq?id?no：4、5所示的grna1-f、grna1-r，靶向靶點2的grna2的引物分別為核苷酸序列如seq?id?no：6、7所示的grna2-f、grna2-r。

9.權(quán)利要求1所述的柑橘csmyb62基因在培育枝刺弱化的柑橘品種中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于：所述的枝刺弱化的柑橘品種為csmyb62基因活性降低或失活的柑橘品種。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種柑橘CsMYB62基因及其在柑橘枝刺軟化中應(yīng)用，屬于柑橘育種領(lǐng)域。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)柑橘CsMYB62基因是柑橘枝刺尖端硬化調(diào)控關(guān)鍵基因，其核苷酸序列為SEQ?ID?NO：1所示或者在SEQ?ID?NO：1所示核苷酸序列經(jīng)取代、缺失或添加一個或幾個核苷酸且具有編碼同等活性蛋白的核苷酸序列。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)利用基因編輯敲除柑橘CsMYB62基因能夠讓柑橘枝刺變得短而軟，因此該基因可以作為培育枝刺弱化柑橘品種的重要候選基因。本發(fā)明可為柑橘枝刺性狀遺傳改良提供了重要的理論基礎(chǔ)和基因資源。

技術(shù)研發(fā)人員：郭文武,張飛,任杰,段耀園,李若琪,伍小萌,解凱東
受保護的技術(shù)使用者：華中農(nóng)業(yè)大學
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8