本發(fā)明涉及一種igf2融合抗體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用，尤其涉及一種igf2融合抗體及其構(gòu)建方法和在多種膜蛋白降解中的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

1、近年來，靶向蛋白降解技術(shù)發(fā)展迅速，為提升腫瘤治療效果提供了全新的選擇。尤其是基于溶酶體途徑的靶向蛋白降解策略，進(jìn)一步拓展了對細(xì)胞外蛋白和細(xì)胞膜相關(guān)疾病蛋白進(jìn)行降解的可能性。最早利用化學(xué)偶聯(lián)的方式將結(jié)合溶酶體受體(igf2r或asgpr)的糖肽分子與靶抗體得到的溶酶體靶向嵌合體(lytac)，以及后來發(fā)展的雙功能核酸適配體，均可介導(dǎo)目的蛋白進(jìn)入溶酶體并降解，但復(fù)雜的合成步驟或有限的體內(nèi)半衰期限制了這些lytac分子的進(jìn)一步應(yīng)用?；陔p特異性抗體或抗體融合蛋白設(shè)計的蛋白降解嵌合體如transtacs或kinetacs也可有效降解膜蛋白，其分子重組性及蛋白降解高效性具有潛在的臨床應(yīng)用前景，但盡管是相同靶點在不同癌細(xì)胞表面的結(jié)構(gòu)有差異，其策略是否適用于更多腫瘤靶蛋白的降解有待進(jìn)一步研究。因此，需探索更多有效的蛋白降解策略。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的第一目的在提供一種igf2融合抗體。本發(fā)明的第二目的是提供一種該igf2融合抗體的構(gòu)建方法，本發(fā)明的第三目的是提供該igf2融合抗體在膜蛋白降解中的應(yīng)用。

2、技術(shù)方案：本發(fā)明所述一種igf2融合抗體，所述igf2融合抗體為以pd-l1抗體為模板，將igf2結(jié)構(gòu)域以單價或雙價的形式融合在pd-l1抗體的重鏈或輕鏈端，自組裝形成四種構(gòu)型的融合抗體typea、typea-gs、typeb或typeb-fab。

3、進(jìn)一步地，typea的重鏈序列如seq?id?no.4所示，typea-gs的輕鏈序列如seq?idno.5所示，typea的igf2-輕鏈序列如seq?id?no.6所示。

4、進(jìn)一步地，typea-gs?linker序列如seq?id?no.7所示。

5、進(jìn)一步地，typeb-fab的igf2-重鏈序列如seq?id?no.8所示，typeb-fab的igf2-輕鏈序列如seq?id?no.9所示。

6、進(jìn)一步地，typeb的重鏈序列如seq?id?no.10所示，typeb的igf2-輕鏈序列如seqid?no.11所示。

7、本發(fā)明所述igf2融合抗體的構(gòu)建方法，包括將pd-l1抗體序列合成在pcdna3.4載體上，再將igf2的編碼序列通過同源重組的方式連接于pd-l1抗體的輕鏈的n端或重鏈fc域的n端。

8、進(jìn)一步地，typea為typea為將igf2蛋白基因序列通過基因以單價形式重組的融合在pd-l1抗體的重鏈fc域的n端。

9、進(jìn)一步地，typea-gs為將igf2蛋白基因序列通過連接子g4s?linker以單價形式融合在pd-l1抗體的重鏈fc域的n端得到。

10、進(jìn)一步地，typeb為將igf2蛋白基因序列通過連接子g4s?linker以雙價形式融合在pd-l1抗體的輕鏈的n端得到。

11、進(jìn)一步地，typeb-fab為保留了抗體與pd-l1蛋白的單個fab結(jié)合域，將igf2蛋白基因序列以雙價形式分別融合在pd-l1抗體重鏈和輕鏈的n端得到。

12、本發(fā)明所述igf2融合抗體在制備膜蛋白降解藥物中的應(yīng)用。

13、進(jìn)一步地，所述膜蛋白為pd-l1蛋白、her2、egfr和/或gpc3。

14、本發(fā)明還包括一種藥物組合物，該藥物組合物包括本發(fā)明所述igf2融合抗體。

15、進(jìn)一步地，該藥物組合物還包括一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

16、有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下顯著優(yōu)點：

17、本發(fā)明首先以pd-l1為目的蛋白，設(shè)計了幾種igf2融合pd-l1單克隆抗體的單價(typea、typea-gs)或雙價融合抗體(typeb、typeb-fab)，通過其對細(xì)胞的親和活性及靶蛋白降解效果比較證明雙價igf2融合抗體構(gòu)型最佳，在低濃度條件下能夠高效降解多種細(xì)胞中的pd-l1蛋白。進(jìn)一步，驗證了雙價igf2融合抗體的設(shè)計策略同樣適用于其他腫瘤相關(guān)蛋白如her2、egfr和gpc3等蛋白的高效降解，為蛋白降解技術(shù)提供了新的平臺。

技術(shù)特征：

1.一種igf2融合抗體，其特征在于，所述igf2融合抗體為以pd-l1抗體為模板，將igf2結(jié)構(gòu)域以單價或雙價的形式融合在pd-l1抗體的重鏈或輕鏈端，自組裝形成四種構(gòu)型的融合抗體typea、typea-gs、typeb或typeb-fab。

2.權(quán)利要求1所述igf2融合抗體的構(gòu)建方法，其特征在于，包括將pd-l1抗體序列合成在pcdna3.4載體上，再將igf2的編碼序列通過同源重組的方式連接于pd-l1抗體的輕鏈的n端或重鏈fc域的n端。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其特征在于，typea為將igf2蛋白基因序列通過基因以單價形式重組的融合在pd-l1抗體的重鏈fc域的n端。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其特征在于，typea-gs為將igf2蛋白基因序列通過連接子g4s?linker以單價形式融合在pd-l1抗體的重鏈fc域的n端得到。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其特征在于，typeb為將igf2蛋白基因序列通過連接子g4s?linker以雙價形式融合在pd-l1抗體的輕鏈的n端得到。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其特征在于，typeb-fab為保留了抗體與pd-l1蛋白的單個fab結(jié)合域，將igf2蛋白基因序列以雙價形式分別融合在pd-l1抗體重鏈和輕鏈的n端得到。

7.權(quán)利要求1所述igf2融合抗體在制備膜蛋白降解藥物中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述膜蛋白為pd-l1蛋白、her2蛋白、egfr蛋白和/或gpc3蛋白。

9.一種藥物組合物，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述igf2融合抗體。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其特征在于，還包括一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種IGF2融合抗體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用，本發(fā)明以PD?L1抗體為模板，將IGF2結(jié)構(gòu)域以單價或雙價的形式融合在PD?L1抗體的重鏈或輕鏈端，自組裝形成四種構(gòu)型的融合抗體TypeA、TypeA?GS、TypeB或TypeB?Fab。通過構(gòu)建不同構(gòu)型的IGF2融合抗體，通過親和活性及蛋白降解的篩選得到最優(yōu)的IGF2融合抗體構(gòu)型，即融合抗體的IGF2與細(xì)胞表面的IGF2受體具有納摩爾級別的親和活性，并實現(xiàn)不同細(xì)胞表面多種膜蛋白(如PD?L1，HER2，EGFR，GPC3)的高效降解。本發(fā)明為膜蛋白降解提供了新的技術(shù)平臺。

技術(shù)研發(fā)人員：余琳,劉晶晶,劉莊
受保護(hù)的技術(shù)使用者：揚州大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8