本發(fā)明涉及生物，尤其涉及一種高產(chǎn)單一組分鼠李糖脂的方法。

背景技術(shù)：

1、鼠李糖脂（rhamnolipids,?rls）是一類(lèi)由某些微生物產(chǎn)生的表面活性劑，其微生物來(lái)源主要包括銅綠假單胞菌（ pseudomonas?aeruginosa）等細(xì)菌。鼠李糖脂主要由鼠李糖和脂肪酸分子通過(guò)糖苷鍵連接形成，具有較強(qiáng)的界面活性，能夠降低水的表面張力，其廣泛應(yīng)用于多種工業(yè)領(lǐng)域，尤其在環(huán)境保護(hù)、清潔劑、化妝品及生物醫(yī)藥領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用前景。

2、然而，由于鼠李糖脂的組分具有一定的復(fù)雜性和混雜性，且微生物在合成過(guò)程中存在一定的變異性，使得同一來(lái)源的鼠李糖脂可能具有不同的組分（即不同的脂肪酸鏈長(zhǎng)組合和不同的鼠李糖含量），從而導(dǎo)致同一來(lái)源的鼠李糖脂的性質(zhì)（例如，理化性質(zhì)、界面活性及生物活性等）不穩(wěn)定，進(jìn)而使得鼠李糖脂的應(yīng)用效果不夠好。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提出一種高產(chǎn)單一組分鼠李糖脂的方法，能夠高產(chǎn)單一組分的性質(zhì)穩(wěn)定的鼠李糖脂，從而提高鼠李糖脂的應(yīng)用效果。

2、為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供一種高產(chǎn)單一組分鼠李糖脂的方法，對(duì)銅綠假單胞菌的野生型鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhlb或rhla進(jìn)行改造，改造后的鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhlb的氨基酸序列如seq?id?no：1所示。

4、上述改造后的鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhlb是基于野生型鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhlb突變得到的。野生型鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhlb的氨基酸序列如seq?id?no：3所示。具體的，野生型鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhlb的第49位氨基酸丙氨酸突變?yōu)楣劝彼?，?4位氨基酸絲氨酸突變?yōu)榘腚装彼?，?44位氨基酸賴(lài)氨酸突變?yōu)榫彼?，?51位氨基酸甲硫氨酸酸突變?yōu)槔i氨酸，第234位氨基酸異亮氨酸突變?yōu)槔i氨酸，第315位氨基酸絲氨酸突變?yōu)楸彼?，得到改造后的鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhlb。

5、改造后的野生型鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhla的氨基酸序列如seq?id?no：2所示。

6、上述改造后的鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhla是基于鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhla突變得到的。野生型鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhla的氨基酸序列如seq?id?no：4所示。具體的，野生型鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhla的第28位氨基酸絲氨酸突變?yōu)樘於彼幔?4位氨基酸谷氨酸突變?yōu)楸彼?，?68位氨基酸谷氨酰胺突變?yōu)楦彼?，?06位氨基酸丙氨酸突變?yōu)榻z氨酸，第262位氨基酸纈氨酸突變?yōu)楸彼?，得到改造后的鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhla。

7、作為本發(fā)明的另一方面，在上述方法中，對(duì)銅綠假單胞菌的野生型鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhlb進(jìn)行改造，得到突變型銅綠假單胞菌（ pseudomonas?aeruginosa）njuxr-cc-1，于2025年01月13日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2025100。

8、作為本發(fā)明的另一方面，在上述方法中，對(duì)銅綠假單胞菌的野生型鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhla進(jìn)行改造，得到突變型銅綠假單胞菌（ pseudomonas?aeruginosa）njuxr-cc-2，于2025年01月13日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2025102。

9、相較于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下有益效果：

10、1、本發(fā)明提供的銅綠假單胞菌生產(chǎn)的單一組分鼠李糖脂產(chǎn)量較高。

11、2、本發(fā)明通過(guò)定點(diǎn)突變參與銅綠假單胞菌合成鼠李糖脂的關(guān)鍵酶，篩選出了輔助銅綠假單胞菌高產(chǎn)單一組分鼠李糖脂的改造后的鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhlb和改造后的鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhla，由于單一組分鼠李糖脂性質(zhì)穩(wěn)定，因而能夠提高鼠李糖脂的應(yīng)用效果。

技術(shù)特征：

1.一種高產(chǎn)單一組分鼠李糖脂的方法，其特征在于，對(duì)銅綠假單胞菌的野生型鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhlb或rhla進(jìn)行改造，改造后的鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhlb的氨基酸序列如seq?id?no：1所示，改造后的鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhla的氨基酸序列如seq?id?no：2所示。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，對(duì)銅綠假單胞菌的野生型鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhlb進(jìn)行改造，得到突變型銅綠假單胞菌（pseudomonas?aeruginosa）njuxr-cc-1，于2025年01月13日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2025100。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，對(duì)銅綠假單胞菌的野生型鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhla進(jìn)行改造，得到突變型銅綠假單胞菌（pseudomonas?aeruginosa）njuxr-cc-2，于2025年01月13日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2025102。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種高產(chǎn)單一組分鼠李糖脂的方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，能夠高產(chǎn)單一組分的性質(zhì)穩(wěn)定的鼠李糖脂，從而提高鼠李糖脂的應(yīng)用效果。該方法對(duì)銅綠假單胞菌的野生型鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhlB或rhlA進(jìn)行改造，改造后的鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhlB的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示；改造后的鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶rhlA的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

技術(shù)研發(fā)人員：任鑫坤,余克洋,程冰潔,曲展,王瑾豐,王天奇,鄭明樞,李佳依,劉淼
受保護(hù)的技術(shù)使用者：南京大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8