本發(fā)明涉及鏈孢粘帚霉揮發(fā)物提取，具體為一種具有產(chǎn)香能力的鏈孢粘帚霉揮發(fā)物提取方法及其應用。

背景技術(shù)：

1、香味物質(zhì)因其令人愉悅、舒緩壓力等特點而備受關(guān)注，人們對于這類物質(zhì)的應用已滲入生活各個方面，例如食品輕工、化妝品等制造業(yè)。香味物質(zhì)的應用依托于香精香料，傳統(tǒng)的香精香料來源多半從芳香植物或動物麝中直接提取或通過化學合成法得到高純度香味物質(zhì)，但以上方法高耗低產(chǎn)，不能滿足市場需求。與傳統(tǒng)方法相比，微生物發(fā)酵和生物轉(zhuǎn)化的方法具有高效、綠色、環(huán)保等眾多優(yōu)點，現(xiàn)已成為香精香料開發(fā)的研究熱點。因此，發(fā)掘具有產(chǎn)香功能的微生物成為香精香料市場的迫切需求。

2、近年來，真菌成為微生物中具有產(chǎn)香功能的關(guān)注重點。真菌所產(chǎn)生的揮發(fā)性有機化合物(vocs)包括多種化學類別，并應用于工業(yè)生產(chǎn)中。例如張鵬等利用產(chǎn)黑色素短梗霉(aureobasidium?melanogenum)發(fā)酵液改善煙絲香味，周森等篩選出具有白酒風味的產(chǎn)香白地霉(geotrichum?candidum)。鏈孢粘帚霉(clonostachys?rosea?f.catenulata)屬子囊菌門(ascomycota)糞殼菌綱(sordariomycetes)肉座菌目(hypocreales)生赤殼科(bionectriaceae)螺旋聚孢霉屬(clonostachys)，是粉紅螺旋聚孢霉(clonostachysrosea)的一種變型。該菌具有廣泛的分布區(qū)域，在各溫度帶的土壤、沙漠以及水域中都有存在。作為一種兼性腐生菌，該菌常在土壤中與各種病原菌的菌核、菌絲以及線蟲的胞囊共存。此外，該菌也常在植物中被分離得到，如大麥、洋蔥、草莓、玫瑰和可可，其中根、葉和花是主要的分離部分，頻率最高的部分是根。同時該菌可以在植物不同組織部位表現(xiàn)出內(nèi)生能力，例如在天竺葵葉片以及黃瓜根部定植。以往對鏈孢粘帚菌的研究多集中于其作為重寄生菌的特性開發(fā)生防菌劑以及針對其作為土傳病原菌展開病害防治。鏈孢粘帚霉與其他產(chǎn)香真菌相比，具有不可多得重寄生能力，該能力可以讓其寄生于其他真菌內(nèi)并發(fā)生物質(zhì)交換，從而拓展其代謝產(chǎn)物的來源。目前，對于鏈孢粘帚霉的研究大多集中在代謝產(chǎn)物中的非揮發(fā)性成分上，對鏈孢粘帚霉揮發(fā)性成分的研究則鮮有報道。結(jié)合鏈孢粘帚霉已具有的高應用價值，以及其本身在拓展代謝產(chǎn)物來源上的能力，開發(fā)具有產(chǎn)香能力的鏈孢粘帚霉極具市場應用前景，但目前，關(guān)于鏈孢粘帚霉在其揮發(fā)物方面的研究較少，因此開發(fā)其在揮發(fā)物方面的應用在微生物來源的香料領(lǐng)域極具潛力。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、(一)解決的技術(shù)問題

2、針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種具有產(chǎn)香能力的鏈孢粘帚霉揮發(fā)物提取方法及其應用，在一定程度上彌補了鏈孢粘帚霉在其揮發(fā)物方面的研究較少的問題。

3、(二)技術(shù)方案

4、為實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：一種具有產(chǎn)香能力的鏈孢粘帚霉揮發(fā)物提取方法，具體包括以下步驟：

5、s1.活化培養(yǎng)

6、將鏈孢粘帚霉從保存的冷凍管里用接種針挑取出并將其接種在含有20mlpsa培養(yǎng)基的直徑為8.5cm培養(yǎng)皿的正中間，28℃恒溫培養(yǎng)7天備用；

7、s2.鏈孢粘帚霉培養(yǎng)

8、選擇500ml培養(yǎng)瓶作為培養(yǎng)容器，每個培養(yǎng)瓶加入120ml培養(yǎng)基；

9、s3.萃取頭的篩選

10、使用50/30μm?dvb/car/pdms萃取頭，在氣相色譜進樣口處以250℃老化至少2小時直至無雜峰備用；

11、s4.揮發(fā)物提取

12、將培養(yǎng)好的鏈孢粘帚霉培養(yǎng)瓶置于萃取溫度28℃、平衡時間30分鐘、萃取時間40分鐘、解析時間3分鐘的條件下進行揮發(fā)性有機化合物(vocs)的萃取。

13、優(yōu)選的，所述方法步驟中還包括gc-ms分析。

14、優(yōu)選的，所述gc-ms分析的gc條件為：使用hp-5ms色譜柱(30m×250μm×0.25μm)；載氣為氦氣，流速0.8ml/min；不分流進樣，進樣口溫度250℃；升溫程序設定為初始溫度40℃保持5分鐘，以5℃/min速度升溫至130℃并保持5分鐘，再以10℃/min速度升溫到230℃并保持2分鐘。

15、優(yōu)選的，所述gc-ms分析的ms條件為：電子離子源，離子源溫度230℃；數(shù)據(jù)采集方法為全掃描，質(zhì)量范圍m/z：35-550u。

16、優(yōu)選的，所述步驟s2鏈孢粘帚霉培養(yǎng)中的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基體積120ml，培養(yǎng)溫度27.5℃，培養(yǎng)天數(shù)27天,碳源為蔗糖，不添加氮源，ph值為自然。

17、一種具有產(chǎn)香能力的鏈孢粘帚霉揮發(fā)物在生產(chǎn)香味、香精香料方面的應用。

18、(三)有益效果

19、本發(fā)明提供了一種具有產(chǎn)香能力的鏈孢粘帚霉揮發(fā)物提取方法及其應用。具備以下有益效果：

20、本發(fā)明提供了一種具有產(chǎn)香能力的鏈孢粘帚霉揮發(fā)物提取方法及其應用，本發(fā)明通過精心選擇的spme(固相微萃取)萃取頭(50/30μmdvb/car/pdms)，結(jié)合優(yōu)化的gc-ms(氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用)分析條件，該方法能夠高效且準確地從鏈孢粘帚霉中提取揮發(fā)性有機化合物(vocs)，這種提取和分析方法提高了檢測的靈敏度和分辨率，使得揮發(fā)物的識別更為準確，同時保持了成分的完整性，通過細致的實驗設計和優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)了鏈孢粘帚霉最佳的培養(yǎng)條件，包括培養(yǎng)基體積、溫度和培養(yǎng)天數(shù)，這些條件的優(yōu)化不僅提高了菌株的生長和代謝活性，也顯著增強了其產(chǎn)香能力，實驗結(jié)果與模型擬合良好，驗證了優(yōu)化培養(yǎng)條件的可行性和有效性，通過這兩項技術(shù)的應用，不僅為鏈孢粘帚霉揮發(fā)物的提取和分析提供了標準化方法，也為進一步研究和開發(fā)其在香味、香精香料及相關(guān)領(lǐng)域的應用打下了堅實的基礎(chǔ)，特別是在食品和化妝品領(lǐng)域，這種天然來源的香料具有潛在的市場優(yōu)勢，使用鏈孢粘帚霉作為天然香料來源，避免了化學合成香料可能帶來的環(huán)境和健康風險，此外，優(yōu)化的培養(yǎng)條件減少了對化學試劑的依賴，降低了實驗過程中的化學廢物產(chǎn)生，符合綠色化學和可持續(xù)發(fā)展的原則，通過提高培養(yǎng)效率和揮發(fā)物提取的準確性，減少了實驗材料和時間的浪費，從而降低了生產(chǎn)成本，這為商業(yè)化生產(chǎn)鏈孢粘帚霉提取物提供了可能，有利于實現(xiàn)經(jīng)濟效益和環(huán)境保護的雙贏。

技術(shù)特征：

1.一種具有產(chǎn)香能力的鏈孢粘帚霉揮發(fā)物提取方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有產(chǎn)香能力的鏈孢粘帚霉揮發(fā)物提取方法及其應用，其特征在于：所述方法步驟中還包括gc-ms分析。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種具有產(chǎn)香能力的鏈孢粘帚霉揮發(fā)物提取方法及其應用，其特征在于：所述gc-ms分析的gc條件為：使用hp-5ms色譜柱(30m×250μm×0.25μm)；載氣為氦氣，流速0.8ml/min；不分流進樣，進樣口溫度250℃；升溫程序設定為初始溫度40℃保持5分鐘，以5℃/min速度升溫至130℃并保持5分鐘，再以10℃/min速度升溫到230℃并保持2分鐘。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種具有產(chǎn)香能力的鏈孢粘帚霉揮發(fā)物提取方法及其應用，其特征在于：所述gc-ms分析的ms條件為：電子離子源，離子源溫度230℃；數(shù)據(jù)采集方法為全掃描，質(zhì)量范圍m/z：35-550u。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有產(chǎn)香能力的鏈孢粘帚霉揮發(fā)物提取方法及其應用，其特征在于：所述步驟s2鏈孢粘帚霉培養(yǎng)中的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基體積120ml，培養(yǎng)溫度27.5℃，培養(yǎng)天數(shù)27天,碳源為蔗糖，不添加氮源，ph值為自然。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任意一項所述的一種具有產(chǎn)香能力的鏈孢粘帚霉揮發(fā)物在生產(chǎn)香味、香精香料方面的應用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一種具有產(chǎn)香能力的鏈孢粘帚霉揮發(fā)物提取方法及其應用，涉及鏈孢粘帚霉揮發(fā)物提取技術(shù)領(lǐng)域。該具有產(chǎn)香能力的鏈孢粘帚霉揮發(fā)物提取方法，具體包括以下步驟：S1.活化培養(yǎng)；S2.鏈孢粘帚霉培養(yǎng)；S3.萃取頭的篩選；S4.揮發(fā)物提取。本發(fā)明提供一種具有產(chǎn)香能力的鏈孢粘帚霉揮發(fā)物提取方法及其應用，該專利展示的鏈孢粘帚霉及其揮發(fā)物成分提取和培養(yǎng)方法，相較于現(xiàn)有技術(shù)，主要優(yōu)勢在于提高了揮發(fā)物的提取效率和精度，同時優(yōu)化了鏈孢粘帚霉的培養(yǎng)條件以增強其產(chǎn)香能力，這些研究結(jié)果不僅提升了目標化合物的檢測靈敏度和生產(chǎn)收率，還通過減少化學試劑的使用，降低了生產(chǎn)成本和環(huán)境影響，為天然香料的開發(fā)與應用提供了新的可能性。

技術(shù)研發(fā)人員：趙平,吳博宇,楊曉琴,朱國磊,鄒麗花,解思達,姜倩
受保護的技術(shù)使用者：西南林業(yè)大學
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8