一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球，所述單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的粒徑為5nm?5um。本發(fā)明還公開了一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的制備方法，包括以下步驟：步驟一、四氧化三鐵納米顆粒的制備；步驟二、單分散硅羥基磁性納米微球的制備；步驟三、單分散氨基化磁性納米微球的制備；步驟四、單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的制備。本發(fā)明的單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球及其制備方法具有較好的超順磁性，磁含量高、分散性好、無團(tuán)聚現(xiàn)象，形貌規(guī)則標(biāo)準(zhǔn)，粒徑統(tǒng)一可控，易功能化修飾等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】
一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及磁性納米材料技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著納米技術(shù)的發(fā)展，納米材料在生物學(xué)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用越來越廣泛，尤其是由磁性微球和納米材料結(jié)合而成的磁性納米顆粒，因具有磁響應(yīng)性、超順磁性及良好的生物相容性等優(yōu)點(diǎn)，在生物科技和生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有較好的應(yīng)用前景。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中，用于制備磁性納米微球的方法主要有包埋法、聚合法等，主要原理是將磁性納米微粒包裹在高分子微球中，由于磁性微粒表面需要包裹足夠的高分子，就導(dǎo)致其中的磁性納米微粒量少，而導(dǎo)致了整個磁性納米微粒的磁含量降低，非磁含量增加，往往團(tuán)聚在一起難以實(shí)現(xiàn)單分散。這樣的磁性納米微球存在以下缺點(diǎn):第一、由于其分散性差，易團(tuán)聚，導(dǎo)致其比表面積變小，大大降低了實(shí)際應(yīng)用效果；第二、由于其磁含量小，磁性較弱，通常在富集時需要幾十秒鐘時間甚至更久，在應(yīng)用中會使操作時間大大延長，同時為了避免這問題太，不得不增大磁珠的體積或?qū)⒍鄠€磁珠連接在一起，卻又使得空間位阻變大、靈敏度降低、懸浮性變差;第三、現(xiàn)有技術(shù)的磁性納米微球在形狀規(guī)則程度、粒徑均一度、表面功能活性基團(tuán)含量等方面效果往往不能滿足實(shí)際應(yīng)用的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決相關(guān)技術(shù)中的技術(shù)問題之一。
[0005]為此，本發(fā)明的一個目的在于提出一種磁含量高、無團(tuán)聚現(xiàn)象，形貌規(guī)則標(biāo)準(zhǔn)，粒徑可控統(tǒng)一的單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球及其制備方法。
[0006]根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球，所述單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的粒徑為5nm_5um。
[0007]根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球具有的詳細(xì)的獨(dú)立權(quán)利要求帶來的優(yōu)點(diǎn)。
[0008]另外，根據(jù)本發(fā)明上述實(shí)施例的單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的制備方法，包括以下步驟:
[0009]步驟一、四氧化三鐵納米顆粒的制備；
[0010]步驟二、單分散硅羥基磁性納米微球的制備；
[0011 ]步驟三、單分散氨基化磁性納米微球的制備；
[0012]步驟四、單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的制備。
[0013]根據(jù)本發(fā)明的一個示例，所述步驟一包括以下步驟:
[0014]S1、取濃度均為0.1?3mol/L的Fe3+的鹽溶液和Fe2+的鹽溶液，按體積比為1:1?10:1混合，取混合液lO-lOOmL，加入5-500mL含有0.1 %-10%乳化劑的水溶液中，充分混合均勻，得到混合液I;
[0015]S2、在混合液I中加入20 % -80 %的聚乙二醇-6000水溶液20_1 OOmL，得到混合液2 ；
[0016]S3、將混合液2加熱至20?50°C，同時緩慢滴加濃度為20%?75%的氨水稀釋液0.1?0.5毫升，保持溫度持續(xù)反應(yīng)I?3小時，得到顆粒I;
[0017]S4、分別用無水乙醇和超純水各清洗3次顆粒I，將顆粒I進(jìn)行磁分離技術(shù)，在65°C的溫度下干燥2小時，即得到了所述四氧化三鐵納米顆粒。
[0018]根據(jù)本發(fā)明的一個示例，所述步驟二包括以下步驟:
[0019]S1、將所述四氧化三鐵納米顆粒分散在含有I %_10%十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，再加入20-200mL濃度為20%-80%的醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液3;
[0020]S2、在混合液3中緩慢滴加5?30毫升濃度為0.1?lmol/1的四乙氧基硅烷溶液，反應(yīng)I?10小時后再次加入濃度為0.1?0.5mol/l的氨水溶液調(diào)節(jié)PH值到8?12，得到混合液4；
[0021]S3、將混合液4繼續(xù)加熱到20?70°C持續(xù)反應(yīng)3?5小時，反應(yīng)結(jié)束后，得到顆粒2;
[0022]S4、將顆粒2進(jìn)行磁分離技術(shù)出表面經(jīng)過硅羥基修飾的顆粒，用超純水清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散硅羥基磁性納米微球。
[0023 ]根據(jù)本發(fā)明的一個示例，所述步驟三包括以下步驟:
[0024]S1、將單分散硅羥基磁性納米微球分散在濃度為50?500毫升20 % -80 %的的乙醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液5;
[0025]S2、在混合液5中加入10?100微升3-氨丙基三乙氧基硅烷或硅烷偶聯(lián)劑KH-550，使其在25?60°C的溫度下反應(yīng)I?10小時，反應(yīng)結(jié)束后，得到顆粒3;
[0026]S3、將顆粒3進(jìn)行磁分離技術(shù)，用75 %的乙醇溶液清洗3次，在65 °C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散氨基化磁性納米微球。
[0027]根據(jù)本發(fā)明的一個示例，所述步驟四包括以下步驟:
[0028]S1、將單分散氨基化磁性納米微球分散在I?10毫升濃度為0.1?3mol/L的丁二酸酐溶液中，充分混合均勻，得到混合液6，使混合液6在通氮的條件下持續(xù)反應(yīng)I?10小時，得到顆粒4，使顆粒4經(jīng)過磁分離技術(shù)，待顆粒4完全吸附后，將含有顆粒4的混合液6的上清液去除;
[0029]S2、將上述顆粒4分散在I?10毫升濃度為0.1?lmol/L的嗎啉乙磺酸溶液中，充分分散后，加入I?10毫升濃度為0.1?lmol/L的N-羥基丁二酰亞胺，持續(xù)反應(yīng)1-3小時，即得到顆粒5;
[0030]S3、將顆粒5在0.1?10毫升I3BS緩沖溶液中充分分散，得到混合液7，取I?20毫升混合液7與I?100微升待檢測物的相應(yīng)抗體充分混合均勻，孵育I?5小時，得到顆粒5;
[0031]S4、將顆粒5經(jīng)過磁分離技術(shù)，PBS溶液清洗2次，即得到單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球。
[0032]根據(jù)本發(fā)明的一個示例，所述步驟四包括以下步驟:
[0033]S1、將單分散氨基化磁性納米微球分散在0.1-10毫升I3BS溶液中，加入0.1-10毫升質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的戊二醛溶液，充分混合均勻，得到混合液8，讓混合液8持續(xù)反應(yīng)I?3小時，即可得顆粒6;
[0034]S2、將顆粒6再次分散在0.1-10毫升I3BS溶液中，加入I?100微升待檢測物的相應(yīng)抗體，進(jìn)行孵育1-3小時，得到顆粒7;
[0035]S3、將顆粒7用PBS清洗2次后，加入到甘氨酸溶液中，使其混合反應(yīng)，得到顆粒8，將顆粒8用PBS清洗2次后，再經(jīng)過磁分離技術(shù)，既可以得到單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球。
[0036]本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn):
[0037]1.本發(fā)明制備的單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球磁含量高，磁性強(qiáng)，普通磁鐵3-5秒即可實(shí)現(xiàn)快速富集，無需增大磁珠的體積或?qū)⒍鄠€磁珠連接在一起即可實(shí)現(xiàn)磁珠的快速分離，本發(fā)明制得的單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球大大降低了空間位阻、大大提高了靈敏度；
[0038]2.單分散好，合成出的單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球無團(tuán)聚現(xiàn)象；
[0039]3.形貌規(guī)則，標(biāo)準(zhǔn)的球形；
[0040]4.單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球粒徑分布窄，顆粒大小均一且粒徑可控；
[0041]5.生物相容性好，易功能化修飾，且含有豐富的活性基團(tuán)；
[0042]6.懸浮性和穩(wěn)定性較好；
[0043]7.具有較好的超順磁性；
[0044]8.制備方法簡單，易于工業(yè)化大批量生產(chǎn)；
[0045]9.價(jià)格低廉，解決了市場上現(xiàn)有磁珠價(jià)格較高難易普及使用的問題，易于在實(shí)際應(yīng)用中普及和推廣。
【附圖說明】
[0046]圖1是本發(fā)明的實(shí)施例的單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的四氧化三鐵納米顆粒的電鏡圖；
[0047]圖2是本發(fā)明的實(shí)施例的單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的電鏡圖；
【具體實(shí)施方式】
[0048]下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例，所述實(shí)施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類似的標(biāo)號表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附圖描述的實(shí)施例是示例性的，旨在用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。
[0049]本發(fā)明的一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球，其粒徑為5nm-5um，形貌規(guī)則，標(biāo)準(zhǔn)的球形。
[0050]值得注意的是，本發(fā)明的單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球不僅可以理解為步驟最后的最終產(chǎn)物，還可以包括任意一個中間步驟的任意一個中間產(chǎn)物。在本發(fā)明中，最終產(chǎn)物為單分散強(qiáng)磁性納米免疫微球，中間產(chǎn)物為四氧化三鐵納米顆粒、單分散硅羥基磁性納米微球和單分散氨基化磁性納米微球。本發(fā)明專利可以理解為包括這四種產(chǎn)物及該四種產(chǎn)物的制備方法。
[0051 ]本發(fā)明的一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的制備方法，包括以下步驟:
[0052]步驟一、四氧化三鐵納米顆粒的制備；
[0053]步驟二、單分散硅羥基磁性納米微球的制備；
[0054]步驟三、單分散氨基化磁性納米微球的制備；
[0055]步驟四、單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的制備。
[0056]具體地說，每個步驟詳細(xì)包括以下內(nèi)容:
[0057]步驟一包括以下步驟:
[0058] S1、取濃度均為0.1?3mo 1/L的Fe3+的鹽溶液和Fe2+的鹽溶液，按體積比為1:1?10:1混合，取混合液lO-lOOmL，加入5-500mL含有0.1 %-10%乳化劑的水溶液中，充分混合均勻，得到混合液I;
[0059 ] S2、在混合液I中加入20 % -80 %的聚乙二醇-6000水溶液20_1 OOmL，得到混合液2 ；
[0060]S3、將混合液2加熱至20?50°C，同時緩慢滴加濃度為20%?75%的氨水稀釋液
0.1?0.5毫升，保持溫度持續(xù)反應(yīng)I?3小時，得到顆粒I;
[0061]S4、分別用無水乙醇和超純水各清洗3次顆粒I，將顆粒I進(jìn)行磁分離技術(shù)，在65°C的溫度下干燥2小時，即得到了所述四氧化三鐵納米顆粒。
[0062]步驟二包括以下步驟:
[0063]S1、將所述四氧化三鐵納米顆粒分散在含有I %_10%十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，再加入20-200mL濃度為20%-80%的醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液3;
[0064]S2、在混合液3中緩慢滴加5?30毫升濃度為0.1?lmol/1的四乙氧基硅烷溶液，反應(yīng)I?10小時后再次加入濃度為0.1?0.5mol/l的氨水溶液調(diào)節(jié)PH值到8?12，得到混合液4；
[0065]S3、將混合液4繼續(xù)加熱到20?70°C持續(xù)反應(yīng)3?5小時，反應(yīng)結(jié)束后，得到顆粒2;
[0066]S4、將顆粒2進(jìn)行磁分離技術(shù)出表面經(jīng)過硅羥基修飾的顆粒，用超純水清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散硅羥基磁性納米微球。
[0067]步驟三包括以下步驟:
[0068]S1、將單分散硅羥基磁性納米微球分散在濃度為50?500毫升20 % -80 %的的乙醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液5;
[0069]S2、在混合液5中加入10?100微升3-氨丙基三乙氧基硅烷或硅烷偶聯(lián)劑KH-550，使其在25?60°C的溫度下反應(yīng)I?10小時，反應(yīng)結(jié)束后，得到顆粒3;
[0070]S3、將顆粒3進(jìn)行磁分離技術(shù)，用75 %的乙醇溶液清洗3次，在65 °C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散氨基化磁性納米微球。
[0071]步驟四包括以下步驟:
[0072]S1、將單分散氨基化磁性納米微球分散在I?10毫升濃度為0.1?3mol/L的丁二酸酐溶液中，充分混合均勻，得到混合液6，使混合液6在通氮的條件下持續(xù)反應(yīng)I?10小時，得到顆粒4，使顆粒4經(jīng)過磁分離技術(shù)，待顆粒4完全吸附后，將含有顆粒4的混合液6的上清液去除;
[0073]S2、將上述顆粒4分散在I?10毫升濃度為0.1?lmol/L的嗎啉乙磺酸溶液中，充分分散后，加入I?10毫升濃度為0.1?lmol/L的N-羥基丁二酰亞胺，持續(xù)反應(yīng)1-3小時，即得到顆粒5;
[0074]S3、將顆粒5在0.1?10毫升I3BS緩沖溶液中充分分散，得到混合液7，取I?20毫升混合液7與I?100微升待檢測物的相應(yīng)抗體充分混合均勻，孵育I?5小時，得到顆粒5;
[0075]S4、將顆粒5經(jīng)過磁分離技術(shù)，PBS溶液清洗2次，即得到單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球。
[0076]步驟四還有另外一種方法，包括以下步驟:
[0077]S1、將單分散氨基化磁性納米微球分散在0.1-10毫升PBS溶液中，加入0.1-10毫升質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的戊二醛溶液，充分混合均勻，得到混合液8，讓混合液8持續(xù)反應(yīng)I?3小時，即可得顆粒6;
[0078]S2、將顆粒6再次分散在0.1-10毫升I3BS溶液中，加入I?100微升待檢測物的相應(yīng)抗體，進(jìn)行孵育1-3小時，得到顆粒7;
[0079]S3、將顆粒7用PBS清洗2次后，加入到甘氨酸溶液中，使其混合反應(yīng)，得到顆粒8，將顆粒8用PBS清洗2次后，再經(jīng)過磁分離技術(shù)，既可以得到單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球。
[0080]實(shí)施例一:
[0081 ] 包括以下步驟:
[0082] S1、準(zhǔn)確稱量8.94g硫酸鐵鹽和4.34g硫酸亞鐵鹽，溶解在加入0.25mL乳化劑的水溶液200mL中，充分混合均勻，得到混合液I;
[0083 ] S2、在混合液I中加入25 %聚乙二醇6000水溶液I OOmL，得到混合液2 ；
[0084]S3、將混合液2加熱至20°C，同時緩慢滴加濃度為20%的氨水稀釋液0.1毫升，保持溫度持續(xù)反應(yīng)I小時，得到顆粒I;
[0085]S4、分別用無水乙醇和超純水各清洗3次顆粒I，將顆粒I進(jìn)行磁分離技術(shù)，在65°C的溫度下干燥2小時，即得到了所述四氧化三鐵納米顆粒；
[0086]S5、將所述四氧化三鐵納米顆粒分散在含有3%的十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，再加入10mL濃度為45 %的正乙醇和無水乙醇的混合液，充分混合均勻，得到混合液3;
[0087]S6、在混合液3中緩慢滴加5毫升濃度為0.lmol/1的四乙氧基硅烷溶液，反應(yīng)I小時后再次加入濃度為0.lmol/1的氨水溶液調(diào)節(jié)PH值到8，得到混合液4;
[0088]S7、將混合液4繼續(xù)加熱到20 °C持續(xù)反應(yīng)3小時，反應(yīng)結(jié)束后，得到顆粒2 ；
[0089]S8、將顆粒2進(jìn)行磁分離技術(shù)出表面經(jīng)過硅羥基修飾的顆粒，用超純水清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散硅羥基磁性納米微球；
[0090]S9、將單分散硅羥基磁性納米微球分散在50毫升的乙醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液5;
[0091]S10、在混合液5中加入10微升3-氨丙基三乙氧基硅烷或硅烷偶聯(lián)劑KH-550，使其在25°C的溫度下反應(yīng)I小時，反應(yīng)結(jié)束后，得到顆粒3;
[0092]Sll、將顆粒3進(jìn)行磁分離技術(shù)，無水乙醇清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散氨基化磁性納米微球；
[0093]S12、將單分散氨基化磁性納米微球分散在I毫升0.5mol/L丁二酸酐溶液中，充分混合均勻，得到混合液6，使混合液6在通氮的條件下持續(xù)反應(yīng)I小時，得到顆粒4，使顆粒4經(jīng)過磁分離技術(shù)，待顆粒4完全吸附后，將含有顆粒4的混合液6的上清液去除；
[0094]S13、將上述顆粒4分散在10毫升濃度為0.5mol/L的嗎啉乙磺酸溶液中，充分分散后，加入10毫升濃度為0.5mol/L的N-羥基丁二酰亞胺，持續(xù)反應(yīng)3小時，即得到顆粒5;
[0095]S14、將顆粒5在5mL PBS緩沖溶液中充分分散，得到混合液7，取I毫升混合液7與10微升待檢測物的相應(yīng)抗體充分混合均勻，孵育I小時，得到顆粒5;
[0096]S15、將顆粒5經(jīng)過磁分離技術(shù)，2mL PBS溶液洗2次，即得到單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球。
[0097]實(shí)施例二:
[0098]S1、取物質(zhì)量比均為3的Fe3+的鹽溶液和Fe2+的鹽溶液，按體積比1:1混合均勻，取10毫升加入到含有0.1 %的乳化劑的水溶液中，充分混合均勻，得到混合液I;
[0099]S2、在混合液I中加入20%的聚乙二醇6000水溶液20毫升，得到混合液2;
[0100]S3、將混合液2加熱至50 0C，同時緩慢滴加濃度為75 %的氨水稀釋液0.5毫升，保持溫度持續(xù)反應(yīng)3小時，得到顆粒I;
[0101]S4、分別用無水乙醇和超純水各清洗3次顆粒I，將顆粒I進(jìn)行磁分離技術(shù)，在65°C的溫度下干燥2小時，即得到了所述四氧化三鐵納米顆粒；
[0102]S5、將所述四氧化三鐵納米顆粒分散在含有I %的十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，再加入20毫升20 %的正乙醇溶液，充分混合均勻，得到混合液3;
[0103]S6、在混合液3中緩慢滴加30毫升濃度為lmol/L的四乙氧基硅烷溶液，反應(yīng)10小時后再次加入濃度為0.5mol/L的氨水溶液調(diào)節(jié)PH值到12，得到混合液4;
[0104]S7、將混合液4繼續(xù)加熱到70 °C持續(xù)反應(yīng)5小時，反應(yīng)結(jié)束后，得到顆粒2;
[0105]S8、將顆粒2進(jìn)行磁分離技術(shù)出表面經(jīng)過硅羥基修飾的顆粒，用超純水清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散硅羥基磁性納米微球；
[0106]S9、將單分散硅羥基磁性納米微球分散在500毫升的20%的乙醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液5;
[0107]S10、在混合液5中加入100微升3-氨丙基三乙氧基硅烷或硅烷偶聯(lián)劑KH-550，使其在60°C的溫度下反應(yīng)10小時，反應(yīng)結(jié)束后，得到顆粒3;
[0108]SI 1、將顆粒3進(jìn)行磁分離技術(shù)，用75 %的乙醇溶液清洗3次，在65 °C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散氨基化磁性納米微球；
[0109]S12、將單分散氨基化磁性納米微球分散在I毫升濃度為0.lmol/L的丁二酸酐溶液中，充分混合均勻，得到混合液6，使混合液6在通氮的條件下持續(xù)反應(yīng)I小時，得到顆粒4，使顆粒4經(jīng)過磁分離技術(shù)，待顆粒4完全吸附后，將含有顆粒4的混合液6的上清液去除；
[0110]S13、將上述顆粒4分散在I毫升濃度為0.lmol/L的嗎啉乙磺酸溶液中，充分分散后，加入I毫升濃度為0.lmol/L的N-羥基丁二酰亞胺，持續(xù)反應(yīng)I小時，即得到顆粒5;
[0111]S14、將顆粒5在0.1毫升I3BS緩沖溶液中充分分散，得到混合液7，取I毫升混合液7與I微升待檢測物的相應(yīng)抗體充分混合均勻，孵育I小時，得到顆粒5;
[0112]S15、將顆粒5經(jīng)過磁分離技術(shù)，PBS溶液清洗2次，即得到單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球。
[0113]實(shí)施例三:
[0114]S1、取濃度均為0.lmol/L的Fe3+的鹽溶液和Fe2+的鹽溶液，按體積比為I: I混合，取混合液10mL，加入5mL含有0.1%乳化劑的水溶液中，充分混合均勻，得到混合液I ；
[0115]S2、在混合液I中加入20 %的聚乙二醇-6000水溶液20mL，得到混合液2 ；
[0116]S3、將混合液2加熱至20°C，同時緩慢滴加濃度為20%的氨水稀釋液0.1毫升，保持溫度持續(xù)反應(yīng)I小時，得到顆粒I;
[0117]S4、分別用無水乙醇和超純水各清洗3次顆粒I，將顆粒I進(jìn)行磁分離技術(shù)，在65°C的溫度下干燥2小時，即得到了所述四氧化三鐵納米顆粒；
[0118]S5、將所述四氧化三鐵納米顆粒分散在含有I %十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，再加入20mL濃度為20%的醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液3;
[0119]S6、在混合液3中緩慢滴加5毫升濃度為0.lmol/1的四乙氧基硅烷溶液，反應(yīng)I小時后再次加入濃度為0.lmol/1的氨水溶液調(diào)節(jié)PH值到8，得到混合液4;
[0120]S7、將混合液4繼續(xù)加熱到20 °C持續(xù)反應(yīng)3小時，反應(yīng)結(jié)束后，得到顆粒2 ；
[0121 ] S8、將顆粒2進(jìn)行磁分離技術(shù)出表面經(jīng)過硅羥基修飾的顆粒，用超純水清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散硅羥基磁性納米微球；
[0122]S9、將單分散硅羥基磁性納米微球分散在濃度為50毫升20%的乙醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液5;
[0123]S10、在混合液5中加入10微升3-氨丙基三乙氧基硅烷或硅烷偶聯(lián)劑KH-550，使其在25°C的溫度下反應(yīng)I小時，反應(yīng)結(jié)束后，得到顆粒3;
[0124]SI 1、將顆粒3進(jìn)行磁分離技術(shù)，用75 %的乙醇溶液清洗3次，在65 °C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散氨基化磁性納米微球；
[0125]S12、將單分散氨基化磁性納米微球分散在0.1毫升I3BS溶液中，加入0.1毫升質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10 %的戊二醛溶液，充分混合均勻，得到混合液8，讓混合液8持續(xù)反應(yīng)I小時，即可得顆粒6;
[0126]S13、將顆粒6再次分散在0.1毫升PBS溶液中，加入I微升待檢測物的相應(yīng)抗體，進(jìn)行孵育I小時，得到顆粒7;
[0127]S14、將顆粒7用PBS清洗2次后，加入到甘氨酸溶液中，使其混合反應(yīng)，得到顆粒8，將顆粒8用PBS清洗2次后，再經(jīng)過磁分離技術(shù)，既可以得到單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球。
[0128]實(shí)施例四
[0129]S1、取濃度均為3mol/L的Fe3+的鹽溶液和Fe2+的鹽溶液，按體積比為10:1混合，取混合液10mL，加入500mL含有10%乳化劑的水溶液中，充分混合均勻，得到混合液I ；
[0130]S2、在混合液I中加入80%的聚乙二醇-6000水溶液100mL，得到混合液2 ；
[0131 ] S3、將混合液2加熱至50 0C，同時緩慢滴加濃度為75 %的氨水稀釋液0.5毫升，保持溫度持續(xù)反應(yīng)3小時，得到顆粒I;
[0132]S4、分別用無水乙醇和超純水各清洗3次顆粒I，將顆粒I進(jìn)行磁分離技術(shù)，在65°C的溫度下干燥2小時，即得到了所述四氧化三鐵納米顆粒；
[0133]S5、將所述四氧化三鐵納米顆粒分散在含有10%十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，再加入200mL濃度為80%的醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液3;
[0134]S6、在混合液3中緩慢滴加30毫升濃度為Imo I /I的四乙氧基硅烷溶液，反應(yīng)1小時后再次加入濃度為0.5mol/l的氨水溶液調(diào)節(jié)PH值到12，得到混合液4;
[0135]S7、將混合液4繼續(xù)加熱到70 °C持續(xù)反應(yīng)5小時，反應(yīng)結(jié)束后，得到顆粒2;
[0136]S8、將顆粒2進(jìn)行磁分離技術(shù)出表面經(jīng)過硅羥基修飾的顆粒，用超純水清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散硅羥基磁性納米微球；
[0137]S9、將單分散硅羥基磁性納米微球分散在濃度為500毫升80%的的乙醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液5;
[0138]S10、在混合液5中加入100微升3-氨丙基三乙氧基硅烷或硅烷偶聯(lián)劑KH-550，使其在60°C的溫度下反應(yīng)10小時，反應(yīng)結(jié)束后，得到顆粒3;
[0139]SI 1、將顆粒3進(jìn)行磁分離技術(shù)，用75 %的乙醇溶液清洗3次，在65 °C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散氨基化磁性納米微球；
[0140]S12、將單分散氨基化磁性納米微球分散在10毫升I3BS溶液中，加入10毫升質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的戊二醛溶液，充分混合均勻，得到混合液8，讓混合液8持續(xù)反應(yīng)3小時，即可得顆粒6;
[0141]S13、將顆粒6再次分散在10毫升PBS溶液中，加入100微升待檢測物的相應(yīng)抗體，進(jìn)行孵育3小時，得到顆粒7;
[0142]S14、將顆粒7用PBS清洗2次后，加入到甘氨酸溶液中，使其混合反應(yīng)，得到顆粒8，將顆粒8用PBS清洗2次后，再經(jīng)過磁分離技術(shù)，既可以得到單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球。
[0143]在本說明書的描述中，參考術(shù)語“一個實(shí)施例”、“一個實(shí)施例或示例中。在本說明書中，對上述術(shù)語的示意性表述不必須針對的是相同的實(shí)施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)可以些實(shí)施例”、“示例”、“具體示例”、或“一些示例”等的描述意指結(jié)合該實(shí)施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)包含于本發(fā)明的至少在任一個或多個實(shí)施例或示例中以合適的方式結(jié)合。此外，在不相互矛盾的情況下，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以將本說明書中描述的不同實(shí)施例或以示例及不同實(shí)施例或示例的特征進(jìn)行結(jié)合和組合。
[0144]盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，可以理解的是，上述實(shí)施例是示例性的，不能理解為對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對上述實(shí)施例進(jìn)行變化、修改、替換和變型。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球，其特征在于，所述單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的粒徑為5nm_5um02.—種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟一、四氧化三鐵納米顆粒的制備； 步驟二、單分散硅羥基磁性納米微球的制備； 步驟三、單分散氨基化磁性納米微球的制備； 步驟四、單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的制備。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述步驟一包括以下步驟: 51、取濃度均為0.1?3mol/L的Fe3+的鹽溶液和Fe2+的鹽溶液，按體積比為1:1?10:1混合，取混合液lO-lOOmL，加入5-500mL含有0.1 %_10%乳化劑的水溶液中，充分混合均勻，得到混合液I; 52、在混合液I中加入20%-80 %的聚乙二醇-6000水溶液20-1OOmL，得到混合液2 ； 53、將混合液2加熱至20?50°C，同時緩慢滴加濃度為20%?75%的氨水稀釋液0.1?0.5毫升，保持溫度持續(xù)反應(yīng)I?3小時，得到顆粒I; 54、分別用無水乙醇和超純水各清洗3次顆粒I，將顆粒I進(jìn)行磁分離技術(shù)，在65°C的溫度下干燥2小時，即得到了所述四氧化三鐵納米顆粒。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述步驟二包括以下步驟: 51、將所述四氧化三鐵納米顆粒分散在含有I%-10%十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，再加入20-200mL濃度為20%-80%的醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液3; 52、在混合液3中緩慢滴加5?30毫升濃度為0.1?lmol/1的四乙氧基硅烷溶液，反應(yīng)I?10小時后再次加入濃度為0.1?0.5mol/l的氨水溶液調(diào)節(jié)PH值到8?12，得到混合液4; 53、將混合液4繼續(xù)加熱到20?700C持續(xù)反應(yīng)3?5小時，反應(yīng)結(jié)束后，得到顆粒2 ； 54、將顆粒2進(jìn)行磁分離技術(shù)出表面經(jīng)過硅羥基修飾的顆粒，用超純水清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散硅羥基磁性納米微球。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述步驟三包括以下步驟: 51、將單分散硅羥基磁性納米微球分散在濃度為50?500毫升20% -80 %的的乙醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液5; 52、在混合液5中加入10?100微升3-氨丙基三乙氧基硅烷或硅烷偶聯(lián)劑KH-550，使其在25?60°C的溫度下反應(yīng)I?10小時，反應(yīng)結(jié)束后，得到顆粒3; 53、將顆粒3進(jìn)行磁分離技術(shù)，用75%的乙醇溶液清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散氨基化磁性納米微球。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述步驟四包括以下步驟: S1、將單分散氨基化磁性納米微球分散在I?10毫升濃度為0.1?3mol/L的丁二酸酐溶液中，充分混合均勻，得到混合液6，使混合液6在通氮的條件下持續(xù)反應(yīng)I?10小時，得到顆粒4，使顆粒4經(jīng)過磁分離技術(shù)，待顆粒4完全吸附后，將含有顆粒4的混合液6的上清液去除； 52、將上述顆粒4分散在I?10毫升濃度為0.1?lmol/L的嗎啉乙磺酸溶液中，充分分散后，加入I?10毫升濃度為0.1?lmol/L的N-羥基丁二酰亞胺，持續(xù)反應(yīng)1-3小時，即得到顆粒5; 53、將顆粒5在0.1?10毫升PBS緩沖溶液中充分分散，得到混合液7，取I?20毫升混合液7與I?100微升待檢測物的相應(yīng)抗體充分混合均勻，孵育I?5小時，得到顆粒5; 54、將顆粒5經(jīng)過磁分離技術(shù)，PBS溶液清洗2次，即得到單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球。7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述步驟四包括以下步驟: 51、將單分散氨基化磁性納米微球分散在0.1-10毫升I3BS溶液中，加入0.1-10毫升質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10 %的戊二醛溶液，充分混合均勻，得到混合液8，讓混合液8持續(xù)反應(yīng)I?3小時，即可得顆粒6; 52、將顆粒6再次分散在0.1-10毫升I3BS溶液中，加入I?100微升待檢測物的相應(yīng)抗體，進(jìn)行孵育1-3小時，得到顆粒7; 53、將顆粒7用PBS清洗2次后，加入到甘氨酸溶液中，使其混合反應(yīng)，得到顆粒8，將顆粒8用PBS清洗2次后，再經(jīng)過磁分離技術(shù)，既可以得到單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球。8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的粒徑為5nm-5um09.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述醇溶液為異丙醇、乙醇、正己醇溶液中的一種或多種的混合物。10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述待檢測物的相應(yīng)抗體為任意一種可用所述單分散強(qiáng)磁性免疫納米微球檢測的致病菌的相對應(yīng)的抗體。
【文檔編號】H01F1/01GK105869813SQ201610392204
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年6月3日
【發(fā)明人】楊磊
【申請人】杭州卓立納米科技有限公司