本發(fā)明涉及一種微生物復(fù)合菌劑用于畜牧養(yǎng)殖的方法，屬于畜牧養(yǎng)殖領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)中，抗生素作為飼料添加劑在飼料工業(yè)中大規(guī)模應(yīng)用，雖然抗生素在預(yù)防畜禽疾病、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、提高飼料轉(zhuǎn)換率等方面發(fā)揮了積極作用，有益于畜牧養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，創(chuàng)造了可觀的經(jīng)濟(jì)效益。但抗生素也存在嚴(yán)重的濫用情況，據(jù)研究，中國(guó)每年生產(chǎn)抗生素原料大約21萬(wàn)噸，其中有9.7萬(wàn)噸用于畜牧養(yǎng)殖業(yè)，占年總產(chǎn)量的46.1％，抗生素的濫用在全世界的養(yǎng)殖業(yè)都是非常普遍的，但在中國(guó)顯得更為嚴(yán)重。歐洲及許多國(guó)家和地區(qū)已經(jīng)或正在禁止抗生素在飼料中的使用，為了保持畜牧養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，科學(xué)家正在需求無(wú)毒副作用、無(wú)殘留、安全的抗生素替代品以取代抗生素。益生菌制劑主要通過(guò)維持動(dòng)物腸道內(nèi)的正常微生態(tài)平衡，利用微生物在腸道內(nèi)的競(jìng)爭(zhēng)排斥原理，形成優(yōu)勢(shì)益生菌群，起到促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)、增強(qiáng)機(jī)體免疫力及防治疾病等作用。益生菌制劑作為新型的飼料添加劑是目前世界各國(guó)研究和應(yīng)用的熱點(diǎn)?，F(xiàn)有技術(shù)研究表明，水除以單分子形式存在外，還可形成分子團(tuán)簇結(jié)構(gòu)，即由若干水分子形成由氫鍵連起來(lái)的水的團(tuán)簇，水的團(tuán)簇結(jié)構(gòu)引起粘度、表面張力、熔點(diǎn)和沸點(diǎn)的溫度以及熱容量等數(shù)值都很高的原因，更為重要的是，水的團(tuán)簇結(jié)構(gòu)可能對(duì)生物體具有重要的影響，如在奧地利，自然學(xué)家約翰.格蘭特經(jīng)過(guò)十多年苦心研究，發(fā)明了一種稱之為“活水系統(tǒng)”的水質(zhì)處理系統(tǒng)，利用物理學(xué)原理徹底解決水的團(tuán)簇結(jié)構(gòu)問(wèn)題，據(jù)稱“活水系統(tǒng)”所生產(chǎn)出的水具有增強(qiáng)人體健康，促進(jìn)植物生長(zhǎng)以及抑制細(xì)菌繁殖等神奇功能。本發(fā)明出人意料地發(fā)現(xiàn)，使用小分子水作為培養(yǎng)基溶劑有利于菌種活力的保持以及菌種密度的提升，飼喂動(dòng)物含上述經(jīng)小分子水“活化”的微生物的飼料更有利于畜禽生長(zhǎng)、機(jī)體免疫力的提升。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種新的微生物復(fù)合菌劑用于畜牧養(yǎng)殖的用途，通過(guò)給予畜禽含有上述微生物復(fù)合菌劑的飼料能夠大大提高畜禽的機(jī)體免疫力，并有利于畜禽的生長(zhǎng)。本發(fā)明采用的方案如下：(1)微生物復(fù)合菌劑的制備地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌、巨大芽孢桿菌、酵母菌的培養(yǎng)：a菌種活化：取斜面上菌種接種于裝有培養(yǎng)基的試管內(nèi)，恒溫靜置培養(yǎng)20-30小時(shí)，作為初始培養(yǎng)物；b種子培養(yǎng)物的制備：將初始培養(yǎng)物接入種子液體培養(yǎng)基中，接種量為1-3％，置于搖床200rpm恒溫培養(yǎng)20-30小時(shí)，作為種子培養(yǎng)物。其中枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌采用lb培養(yǎng)基，酵母用土豆培養(yǎng)基；植物乳桿菌用mrs培養(yǎng)基。c單菌發(fā)酵培養(yǎng)：將種子培養(yǎng)物接入液體培養(yǎng)基中，在恒溫條件下進(jìn)行發(fā)酵罐高密度培養(yǎng)，發(fā)酵罐發(fā)酵條件為：培養(yǎng)基裝液量占發(fā)酵罐體積的50-70％，接種占培養(yǎng)基體積的1-10％的搖瓶發(fā)酵液，發(fā)酵溫度25-38℃，每升發(fā)酵液每分鐘通氣量為0.3-0.6l，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)150-200rpm，發(fā)酵時(shí)間20-40h。優(yōu)選所述培養(yǎng)基以小分子水作為溶劑，更優(yōu)選所述小分子水的半高寬為79.8(hz)；半高寬測(cè)試如下：取小分子水和普通自來(lái)水測(cè)試其17o核磁共振半高寬(nmrfwhm)來(lái)判斷其分子團(tuán)簇結(jié)構(gòu)的大小，即：測(cè)試儀器為bruker400mhz超導(dǎo)核磁共振譜儀，依據(jù)jy/007-1996超導(dǎo)脈沖傅里葉變換核磁共振譜方法通則進(jìn)行測(cè)定，測(cè)試結(jié)果顯示小分子水的半高寬(hz)為79.8，自來(lái)水的半高寬(hz)為118.4。d單菌發(fā)酵物收獲：采用離心的方式收獲發(fā)酵物，離心條件為4℃或室溫下3000-5000rpm離心10-15min，沉淀用無(wú)菌水洗滌數(shù)次，取沉淀即為單菌發(fā)酵產(chǎn)物。e微生物復(fù)合菌劑的獲得：將上述各單菌發(fā)酵產(chǎn)物按照以下比例混合(重量比)：枯草芽孢桿菌：地衣芽孢桿菌：巨大芽孢桿菌：酵母：植物乳桿菌為2-5:1-3:1-3:1-8：1-4，優(yōu)選比例為2:1:2:5:1。(2)含微生物復(fù)合菌劑的飼料添加劑的制備將上述微生物復(fù)合菌劑與殼聚糖以8-15:2-5的比例進(jìn)行混合配制，得到含微生物復(fù)合菌劑的飼料添加劑。(3)將上述飼料添加劑以0.2-0.5％的量加入到飼料中，飼喂畜禽。本發(fā)明微生物復(fù)合菌劑中采用的枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和巨大芽孢桿菌是常用的益生菌菌種，芽孢桿菌在腸道中主要通過(guò)生物奪氧維持腸道生態(tài)平衡，在腸道短時(shí)間定植后，可以消耗大量氧氣，維持腸道厭氧環(huán)境，增強(qiáng)腸道對(duì)厭氧菌的定制能力；芽孢桿菌在腸道中能將淀粉轉(zhuǎn)化為單糖，再由腸道中其他菌種將這些單糖轉(zhuǎn)化為乳酸，降低腸道的ph，從而起到抑制病原菌的作用。芽孢桿菌可以在條件不利時(shí)形成芽孢，復(fù)活率高，具有耐酸、耐鹽、耐高溫和耐擠壓等優(yōu)點(diǎn)。植物乳桿菌能夠通過(guò)微生物奪氧及在消化道內(nèi)附著定植和對(duì)營(yíng)養(yǎng)素的競(jìng)爭(zhēng)，調(diào)節(jié)腸道菌群趨于正?；?，抑制致病菌和有毒菌的生長(zhǎng)，其代謝可產(chǎn)生有機(jī)酸，降低動(dòng)物腸道內(nèi)ph，殺死不耐酸的有害菌，還可產(chǎn)生溶菌酶等物質(zhì)，殺死潛在的病原菌；產(chǎn)生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等消化酶，有益于物質(zhì)的分解；合成b族維生素、氨基酸、未明促生長(zhǎng)因子等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；細(xì)胞壁上存在著肽聚糖等刺激腸道的免疫細(xì)胞從而增加局部免疫抗體，增強(qiáng)機(jī)體抗病力。酵母菌含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其中含有20多種氨基酸和多種維生素，所具有的豐富營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)因子，提供給了動(dòng)物機(jī)體所需要的養(yǎng)分，促進(jìn)動(dòng)物的健康生長(zhǎng)和發(fā)育，提高動(dòng)物免疫力。上述復(fù)合益生菌劑中的菌種經(jīng)小分子水活化后能夠更好地協(xié)同發(fā)揮作用，有益于對(duì)畜禽的增重、預(yù)防疾病的作用。具體實(shí)施方式下面對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說(shuō)明，本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過(guò)程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。實(shí)施例1：微生物復(fù)合菌劑的制備a菌種活化：取斜面上菌種(即地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌、巨大芽孢桿菌、酵母菌)接種于裝有培養(yǎng)基的試管內(nèi)，恒溫靜置培養(yǎng)30小時(shí)，作為初始培養(yǎng)物；其中枯草芽孢桿菌的恒溫溫度為35攝氏度，地衣芽孢桿菌和酵母菌的恒溫溫度為30攝氏度，巨大芽孢桿菌和植物乳桿菌的恒溫溫度為37攝氏度。b種子培養(yǎng)物的制備：將初始培養(yǎng)物接入種子液體培養(yǎng)基中，接種量為1-3％，置于搖床200rpm恒溫培養(yǎng)20-30小時(shí)，作為種子培養(yǎng)物。其中枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌采用lb培養(yǎng)基，酵母用土豆培養(yǎng)基；植物乳桿菌用mrs培養(yǎng)基；各菌種的恒溫溫度如上。c單菌發(fā)酵培養(yǎng)：將種子培養(yǎng)物接入液體培養(yǎng)基中，在恒溫條件下進(jìn)行發(fā)酵罐高密度培養(yǎng)，發(fā)酵罐發(fā)酵條件為：培養(yǎng)基裝液量占發(fā)酵罐體積的70％，接種占培養(yǎng)基體積的3％的搖瓶發(fā)酵液，各菌種的發(fā)酵溫度如上，通氣量1:0.6，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)200rmp/min，發(fā)酵時(shí)間35h。其中所用發(fā)酵培養(yǎng)基中的溶劑為小分子水，即具有小分子團(tuán)簇結(jié)構(gòu)的水，所述小分子水的17o核磁共振半高寬(nmrfwhm)為79.8(hz)。d單菌發(fā)酵物收獲：采用離心的方式收獲發(fā)酵物，離心條件為4攝氏度下3500rpm離心10min，沉淀用無(wú)菌水洗滌數(shù)次，取沉淀即為單菌發(fā)酵產(chǎn)物。e微生物復(fù)合菌劑的獲得：將上述各單菌發(fā)酵產(chǎn)物按照以下比例混合(重量比)：枯草芽孢桿菌：地衣芽孢桿菌：巨大芽孢桿菌：酵母：植物乳桿菌為2:1:2:5:1。實(shí)施例2：含微生物復(fù)合菌劑的飼料添加劑的制備殼聚糖及其衍生物具有抗菌、防腐和保鮮等功能，對(duì)金黃色葡萄菌、大腸桿菌等有較強(qiáng)的抑制功能，因此為了進(jìn)一步增強(qiáng)微生物復(fù)合菌劑的有益作用，將上述微生物復(fù)合菌劑與殼聚糖以10:3的比例進(jìn)行混合配制，得到含微生物復(fù)合菌劑的飼料添加劑。對(duì)比例1微生物復(fù)合菌劑的制備及含微生物復(fù)合菌劑的飼料添加劑的制備微生物復(fù)合菌劑的制備步驟、參數(shù)基本同實(shí)施例1的制備步驟、參數(shù)，與實(shí)施例1的唯一區(qū)別在于使用自來(lái)水代替小分子水；含微生物復(fù)合菌劑的飼料添加劑的制備方法同實(shí)施例2。實(shí)施例4：含微生物復(fù)合菌劑的飼料添加劑對(duì)仔豬增重的作用選用20-25kg的仔豬作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，分為三組，每組各30只，組一飼喂添加實(shí)施例2制備的含微生物復(fù)合菌劑的飼料添加劑的豬飼料，添加量為0.4％；組二飼喂添加對(duì)比例1制備的含微生物復(fù)合菌劑的飼料添加劑的豬飼料，添加量為0.4％；組三飼喂不含微生物復(fù)合菌劑的飼料添加劑的豬飼料。分別采用相同的投料量(1.8kg/頭/天)飼喂15天，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下：實(shí)驗(yàn)組別組1組2組3初始體重(kg)22.222.422.4終末體重(kg)36.834.632.5頭平均增重(kg)14.612.210.1平均日增重(kg)0.970.810.67由以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，本申請(qǐng)實(shí)施例2制備的飼料添加劑相較于對(duì)比例1的飼料添加劑更有益于仔豬的增重。實(shí)施例5：含微生物復(fù)合菌劑的飼料添加劑對(duì)仔豬腹瀉的預(yù)防選用10-20kg的仔豬作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，分組及飼喂方式同實(shí)施例4，不同在于每組仔豬各50只，投料量為1.6kg/頭/天，飼喂30天。腹瀉率＝試驗(yàn)期腹瀉仔豬頭次/(實(shí)驗(yàn)仔豬頭數(shù)*實(shí)驗(yàn)天數(shù))*100％，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下：實(shí)驗(yàn)組別組1組2組3腹瀉率3.23％5.15％7.01％由以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，本申請(qǐng)實(shí)施例2制備的飼料添加劑相較于對(duì)比例1的飼料添加劑更有益于對(duì)仔豬腹瀉的預(yù)防。不受理論束縛，本申請(qǐng)實(shí)施例2制備的飼料添加劑相較于對(duì)比例1的飼料添加劑在對(duì)仔豬的增重、腹瀉的預(yù)防方面有更佳的效果，原因在于小分子水發(fā)酵能夠大大提升微生物復(fù)合菌劑的菌群活力，并增強(qiáng)微生物復(fù)合菌劑中菌種分泌/產(chǎn)生的有益于禽畜增重的促生長(zhǎng)因子、營(yíng)養(yǎng)元素如維生素和氨基酸的量，從而有益于禽畜的增重和增強(qiáng)其機(jī)體免疫力從而有助于預(yù)防腹瀉等疾病。應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的上述具體實(shí)施方式僅僅用于示例性說(shuō)明或解釋本發(fā)明的原理，而不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。因此，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍的情況下所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的專利范圍之內(nèi)。此外，本發(fā)明所附權(quán)利要求旨在涵蓋落入所附權(quán)利要求范圍和邊界、或者這種范圍和邊界的等同形式內(nèi)的全部變化和修改例。當(dāng)前第1頁(yè)12