本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及3β-hydroxylup-12-en-28作為抗耐藥劑在肺癌中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、公開(kāi)該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對(duì)本發(fā)明的總體背景的理解，而不必然被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已經(jīng)成為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

2、3β-hydroxylup-12-en-28是含有tpp+的五環(huán)三萜結(jié)構(gòu)類化合物，是一種將tpp+引入齊墩果酸的新型衍生物，通過(guò)細(xì)胞活性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)3β-hydroxylup-12-en-28對(duì)于腫瘤細(xì)胞毒性較大，尤其是人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞。目前對(duì)3β-hydroxylup-12-en-28的研究尚處于啟動(dòng)階段，未見(jiàn)3β-hydroxylup-12-en-28的臨床試驗(yàn)及應(yīng)用。

3、肺癌仍然是全球癌癥死亡率最高的癌癥，非小細(xì)胞肺癌(nsclc)占所有病例的90％。因?yàn)檫@些患者中約有70-80％在診斷時(shí)由于疾病晚期而不符合根治性手術(shù)的條件,因此目前化療是nsclc的主要治療方法。然而，由于化療的反應(yīng)率低且存在毒副作用，晚期nsclc患者的預(yù)后仍然很差。紫杉醇被廣泛用作nsclc臨床化療中的標(biāo)準(zhǔn)一線化療藥物。紫杉醇可以用作nsclc早期輔助藥物，并且可以提高nsclc晚期患者的生活質(zhì)量和壽命。然而，紫杉醇耐藥是nsclc患者化療期間的一個(gè)常見(jiàn)問(wèn)題，其最終導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)。因此，紫杉醇耐藥性是成功治療的最大障礙之一，這就迫切需要發(fā)現(xiàn)和開(kāi)發(fā)針對(duì)耐藥性的藥物。

4、在癌癥化療中，化療藥物從靶細(xì)胞外排的增加會(huì)損害藥物的療效，從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)藥物化療濃度降低。abc轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是生物體中最大的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族，abc轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的典型結(jié)構(gòu)特征是四結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)，由兩個(gè)結(jié)合和水解atp的細(xì)胞質(zhì)核苷酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域(nbd)和兩個(gè)識(shí)別和運(yùn)輸?shù)孜锏目缒そY(jié)構(gòu)域(tmd)組成，其中p糖蛋白(mdr1，p-gp)、多重耐藥蛋白1(mrp1，abcc1)，和乳腺癌耐藥蛋白(bcrp,abcg2)，是最重要的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，與人類肺癌的治療耐藥性有關(guān)。這些蛋白質(zhì)將各種內(nèi)源性或外源性底物泵出細(xì)胞，產(chǎn)生解毒作用，同時(shí)，這個(gè)過(guò)程也導(dǎo)致了細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低并產(chǎn)生耐藥性。abc轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的過(guò)表達(dá)是人類肺癌耐藥的關(guān)鍵生物標(biāo)志物之一。由亞家族b成員1(abcb1)編碼的p糖蛋白(mdr1，p-gp)是abc轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白中研究最多的成員，已被證明可賦予對(duì)各種癌細(xì)胞的耐藥性。這些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白具有廣泛的底物特異性，它們介導(dǎo)對(duì)多種抗癌藥物的耐藥性。p-gp可轉(zhuǎn)運(yùn)疏水性化合物，而abcc1和abcg2可轉(zhuǎn)運(yùn)疏水性藥物和大陰離子化合物。p-gp的過(guò)表達(dá)已得到公認(rèn)，可賦予對(duì)紫杉醇的耐藥性，其水平在人肺癌a549紫杉醇耐藥細(xì)胞(a549/taxol)中明顯高于其親本細(xì)胞a549。abcc1可在各種癌癥類型中賦予化療藥物耐藥性，包括急性髓系和淋巴細(xì)胞白血病、非小細(xì)胞肺癌、前列腺癌、乳腺癌和神經(jīng)母細(xì)胞瘤。abcg2是癌癥干細(xì)胞的主要存活因子，癌癥干細(xì)胞作為獨(dú)特的化療耐藥群體存在于腫瘤中，并導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。abcg2促進(jìn)多種抗癌藥物外流以保護(hù)癌癥干細(xì)胞，在多種癌癥類型中檢測(cè)到abcg2的高表達(dá)，三種耐藥蛋白與肺癌耐紫杉醇細(xì)胞耐藥性密切相關(guān)，這鼓勵(lì)了對(duì)發(fā)現(xiàn)抑制abc轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)藥物的廣泛研究。

5、論文《齊墩果酸及其衍生物抗腫瘤作用機(jī)制研究進(jìn)展》記載了該類物質(zhì)具有逆轉(zhuǎn)多藥耐藥作用，但由于齊墩果酸及其衍生物眾多，針對(duì)紫杉醇耐藥的肺癌，行業(yè)內(nèi)目前尚未找到合適的齊墩果酸衍生物作為高效的抗耐藥劑。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供3β-hydroxylup-12-en-28作為抗耐藥劑在肺癌中的應(yīng)用。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供了3β-hydroxylup-12-en-28在制備抗紫杉醇耐藥的肺癌的藥物中應(yīng)用，所述3β-hydroxylup-12-en-28的結(jié)構(gòu)式如下：

4、

5、首先本發(fā)明采用3β-hydroxylup-12-en-28對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(a549)及其耐紫杉醇細(xì)胞(a549/taxol)以及人正常肺上皮細(xì)胞beas-2b進(jìn)行了細(xì)胞活性增殖檢測(cè)，即cck8實(shí)驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3β-hydroxylup-12-en-28對(duì)人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞a549/taxol敏感性最強(qiáng)，對(duì)人正常肺上皮細(xì)胞細(xì)胞beas-2b的細(xì)胞毒性最弱。通過(guò)cck8實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及數(shù)據(jù)分析顯示，3β-hydroxylup-12-en-28(0.5μmol/l、1μmol/l、1.5μmol/l、2μmol/l、2.5μmol/l處理a549、a549/taxol、beas-2b細(xì)胞48h后，對(duì)a549,a549/taxol,beas-2b細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(ic50)為1.14±0.23μmol/l、0.98±0.12μmol/l、2.32±0.01μmol/l，并且進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證明，3β-hydroxylup-12-en-28(0.5μmol/l、1μmol/l、1.5μmol/l、2μmol/l、2.5μmol/l處理a549、a549/taxol、beas-2b細(xì)胞24h，48h，72h后3β-hydroxylup-12-en-28對(duì)a549和a549/taxol細(xì)胞的增殖抑制作用隨著時(shí)間的增加而升高。

6、在一些實(shí)施方式中，3β-hydroxylup-12-en-28能夠抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞、非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞的增殖。

7、在一些實(shí)施方式中，3β-hydroxylup-12-en-28對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞、非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞增殖抑制作用隨著時(shí)間的增加而升高。即：3β-hydroxylup-12-en-28以時(shí)間-劑量依賴性的方式抑制人非小細(xì)胞肺癌的增殖。

8、在一些實(shí)施方式中，所述非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞包括：a549/taxol。

9、在一些實(shí)施方式中，3β-hydroxylup-12-en-28的濃度為0.5～2.5μm。

10、在一些實(shí)施方式中，采用所述3β-hydroxylup-12-en-28處理細(xì)胞24～72h。

11、本發(fā)明的第二個(gè)方面，提供了3β-hydroxylup-12-en-28在制備抑制abc轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的藥物中的應(yīng)用，3β-hydroxylup-12-en-28的結(jié)構(gòu)式如下：

12、

13、p-gp、mrp1、abcg2蛋白表達(dá)與腫瘤細(xì)胞耐藥狀態(tài)密切相關(guān)，三種的表達(dá)與細(xì)胞的耐藥能力呈正相關(guān)，首先本發(fā)明采用western?blot實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞中三種耐藥蛋白p-gp、mrp1、abcg2是高表達(dá)，使用a549細(xì)胞以及a549/taxol細(xì)胞相同密度鋪在不同的六孔板孔中，待長(zhǎng)滿后提取蛋白，使用蛋白免疫印跡法檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，三種耐藥蛋白在人非小細(xì)胞耐紫杉醇細(xì)胞高度表達(dá)，用不同濃度3β-hydroxylup-12-en-28(0.5μm,1μm,2μm)處理人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞48h，通過(guò)western?blot法和細(xì)胞免疫熒光顏色法檢測(cè)p-gp的表達(dá)，結(jié)果表明，3β-hydroxylup-12-en-28處理顯著降低了p-gp的表達(dá)，且呈濃度依賴性。

14、在一些實(shí)施方式中，所述abc轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白包括：p-gp、mrp1、abcg2。

15、在一些實(shí)施方式中，3β-hydroxylup-12-en-28的濃度為0.5～2.5μm。

16、本發(fā)明的第三個(gè)方面，提供了3β-hydroxylup-12-en-28在制備抗人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞耐藥的藥物中的應(yīng)用。

17、本發(fā)明首先采用cck8法檢驗(yàn)人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞是否達(dá)到一定的耐藥倍數(shù)以開(kāi)展實(shí)驗(yàn)，用紫杉醇(0.03μmol/l、0.06μmol/l、0.12?5μmol/l、0.025μmol/l、0.05μmol/l、0.1μmol/l)處理人非小細(xì)胞肺癌a549細(xì)胞48h后以及用紫杉醇(1μmol/l、2μmol/l、3μmol/l、4μmol/l、5μmol/l、6μmol/l)處理人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞48h后采用cck8驗(yàn)證耐紫杉醇耐藥倍數(shù)，結(jié)果表明，紫杉醇對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞半數(shù)抑制濃度(ic50)為0.03±0.01μmol/l，紫杉醇對(duì)人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞半數(shù)抑制濃度(ic50)為3.16±0.65μmol/l，耐藥倍數(shù)達(dá)到105倍，說(shuō)明人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞具有高度耐藥性，其次，使用臨床常見(jiàn)肺癌化療藥處理人非小細(xì)胞肺癌以及耐紫杉醇細(xì)胞，即使用阿霉素(adr)(0.0625μmol/l、0.125μmol/l、0.25μmol/l、0.512μmol/l)處理人非小細(xì)胞肺癌以及耐紫杉醇細(xì)胞48h后采用cck8檢測(cè)，結(jié)果顯示，阿霉素對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞半數(shù)抑制濃度(ic50)為0.17±0.14μmol/l，阿霉素對(duì)人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞半數(shù)抑制濃度(ic50)為1.10±0.24μmol/l，耐藥倍數(shù)達(dá)6.5倍。用長(zhǎng)春新堿(vcr)(0.3125μmol/l、0.0625μmol/l1.25μmol/l2.5μmol/l)處理人非小細(xì)胞肺癌以及耐紫杉醇細(xì)胞48h后采用cck8檢測(cè)，結(jié)果顯示，長(zhǎng)春新堿對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞半數(shù)抑制濃度(ic50)為0.29±0.04μmol/l，對(duì)長(zhǎng)春新堿人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞半數(shù)抑制濃度(ic50)為2.41±0.07μmol/l，耐藥倍數(shù)達(dá)9.7倍，這些結(jié)果表明人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞具有高度耐藥性，且對(duì)其他化療藥物也顯現(xiàn)出一定的耐藥性，從而表明3β-hydroxylup-12-en-28選擇性抗人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞耐藥性的能力。

18、本發(fā)明的第四個(gè)方面，提供了一種抗人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞耐藥的藥物，活性成分包括：3β-hydroxylup-12-en-28；

19、所述3β-hydroxylup-12-en-28的結(jié)構(gòu)式如下：

20、

21、所述3β-hydroxylup-12-en-28的有效量為0.5～2.5μm。

22、本發(fā)明的有益效果

23、(1)3β-hydroxylup-12-en-28可以降低高度耐藥的人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞的細(xì)胞活力，降低人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞高表達(dá)的耐藥相關(guān)蛋白p-gp、mrp1、abcg2的表達(dá)，因此發(fā)揮抗紫杉醇耐藥作用。

24、(2)人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞具有高度耐藥性并且對(duì)臨床常見(jiàn)肺癌化療藥物有具有耐藥性，3β-hydroxylup-12-en-28對(duì)人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞具有較高的細(xì)胞毒性，并且能夠以時(shí)間-劑量依賴性的方式抑制人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞以及耐紫杉醇細(xì)胞的增殖，3β-hydroxylup-12-en-28對(duì)人正常肺上皮細(xì)胞細(xì)胞beas-2b有著較小的細(xì)胞毒性，3β-hydroxylup-12-en-28能夠抑制人非小細(xì)胞肺癌耐紫杉醇細(xì)胞高表達(dá)的耐藥相關(guān)蛋白p-gp、mrp1、abcg2的表達(dá)達(dá)到在肺癌中抗紫杉醇耐藥效果。