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微生物麥角硫因生物合成的制作方法

文檔序號(hào):11109522閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.用于生產(chǎn)麥角硫因的工程改造的宿主細(xì)胞,其包含編碼EgtB的核酸序列、編碼EgtC的核酸序列、編碼EgtD的核酸序列和編碼EgtE的核酸序列。

2.權(quán)利要求1的工程改造的宿主細(xì)胞,其中所述編碼EgtB的核酸序列編碼與SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

3.權(quán)利要求1的工程改造的宿主細(xì)胞,其中所述編碼EgtC的核酸序列編碼與SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

4.權(quán)利要求1的工程改造的宿主細(xì)胞,其中所述編碼EgtD的核酸序列編碼與SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

5.權(quán)利要求1的工程改造的宿主細(xì)胞,其中所述編碼EgtE的核酸序列編碼與SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

6.權(quán)利要求1的工程改造的宿主細(xì)胞,其中所述宿主細(xì)胞選自細(xì)菌細(xì)胞和酵母細(xì)胞。

7.權(quán)利要求6的工程改造的宿主細(xì)胞,其中所述宿主細(xì)胞是大腸桿菌(Escherichia coli)細(xì)胞。

8.權(quán)利要求6的工程改造的宿主細(xì)胞,其中所述宿主細(xì)胞選自酵母(Saccharomyces)細(xì)胞和畢赤酵母(Pichia)細(xì)胞。

9.權(quán)利要求8的工程改造的宿主細(xì)胞,其中所述宿主細(xì)胞選自釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)細(xì)胞和巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)細(xì)胞。

10.生產(chǎn)麥角硫因的方法,所述方法包括:

培養(yǎng)宿主細(xì)胞,其中所述宿主細(xì)胞用編碼EgtB的核酸序列、編碼EgtC的核酸序列、編碼EgtD的核酸序列和編碼EgtE的核酸序列轉(zhuǎn)化;

誘導(dǎo)所述宿主細(xì)胞以表達(dá)編碼EgtB的核酸序列、編碼EgtC的核酸序列、編碼EgtD的核酸序列和編碼EgtE的核酸序列;和

收集麥角硫因。

11.權(quán)利要求10的方法,其中向培養(yǎng)物中添加選自組氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、γ-谷氨酰半胱氨酸及其組合的底物。

12.權(quán)利要求10的方法,其中向培養(yǎng)物中添加鐵(II)。

13.權(quán)利要求10的方法,其中所述宿主細(xì)胞選自細(xì)菌細(xì)胞和酵母細(xì)胞。

14.權(quán)利要求10的方法,其中所述宿主細(xì)胞是大腸桿菌細(xì)胞。

15.權(quán)利要求13的方法,其中所述宿主細(xì)胞選自酵母細(xì)胞和畢赤酵母細(xì)胞。

16.權(quán)利要求15的方法,其中所述宿主細(xì)胞選自釀酒酵母細(xì)胞和巴斯德畢赤酵母細(xì)胞。

17.用于生產(chǎn)麥角硫因的表達(dá)載體,其包含編碼選自EgtB、EgtC、EgtD和EgtE的氨基酸序列的核酸序列。

18.權(quán)利要求17的表達(dá)載體,其中所述核酸序列編碼選自以下的氨基酸序列:與SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的氨基酸序列;與SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的氨基酸序列;與SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的氨基酸序列;和與SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的氨基酸序列。

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