本發(fā)明涉及一種鑒定口蹄疫病毒持續(xù)感染牛的分子標(biāo)志物組合及其應(yīng)用。本發(fā)明屬于生物。

背景技術(shù)：

1、口蹄疫(foot-and-mouth?disease，fmd)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouthdisease?virus，fmdv)引起的一種急性高度接觸性傳染的水皰性疾病，主要影響偶蹄哺乳動(dòng)物。在口蹄疫流行地區(qū)，每年因口蹄疫疫苗接種和獸醫(yī)措施產(chǎn)生的巨額經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，以及因?qū)嵤┵Q(mào)易限制造成的收入損失。而目前尚未發(fā)生口蹄疫的國(guó)家會(huì)投入大量資源準(zhǔn)備應(yīng)對(duì)全球口蹄疫形勢(shì)，因?yàn)榧膊∪肭謺?huì)對(duì)動(dòng)物產(chǎn)品生產(chǎn)和貿(mào)易造成毀滅性影響。此外，口蹄疫的預(yù)防和控制還受到亞臨床持續(xù)感染的影響，這種感染發(fā)生在反芻動(dòng)物急性感染之后。持續(xù)性fmdv感染通常被稱為“fmdv攜帶者狀態(tài)”，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(woah)將fmdv攜帶者定義為感染性病毒在感染后28天以上仍被檢出的動(dòng)物。臨床研究發(fā)現(xiàn)，fmdv的持續(xù)感染率超過(guò)50％，即使在完全通過(guò)疫苗接種得到保護(hù)的牛群中也是如此。fmdv攜帶者的存在不僅具有傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)，而且嚴(yán)重阻礙了口蹄疫的根除，以及世界動(dòng)物衛(wèi)生組織對(duì)無(wú)口蹄疫的官方認(rèn)可。

2、目前在本體動(dòng)物上開展的fmdv持續(xù)性感染研究大多集中在病毒排泄規(guī)律、動(dòng)物組織定位、抗體和免疫細(xì)胞消長(zhǎng)規(guī)律以及持續(xù)感染局部的分子特征等方面，提出持續(xù)性感染建立的決定因素主要是與宿主免疫反應(yīng)相關(guān)的因素，但目前仍未闡明其具體分子機(jī)制。雖然牛鼻咽粘膜上皮被確定為口蹄疫病毒持續(xù)感染的復(fù)制位點(diǎn)，但外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral?blood?mononuclear?cells,pbmcs)具有易獲取、易制備、能代表機(jī)體免疫狀況并能實(shí)現(xiàn)持續(xù)監(jiān)測(cè)動(dòng)態(tài)的優(yōu)點(diǎn)，可為篩選快速區(qū)分持續(xù)感染牛和康復(fù)牛的分子生物標(biāo)志物提供了新的見解。因此，通過(guò)高通量rna-seq持續(xù)監(jiān)測(cè)pbmcs的動(dòng)態(tài)分子特征，可快速鑒定出決定fmdv持續(xù)感染以及區(qū)分fmdv持續(xù)感染動(dòng)物的關(guān)鍵分子。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種鑒定口蹄疫病毒持續(xù)感染牛的分子標(biāo)志物組合及其應(yīng)用。

2、為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)手段：

3、本發(fā)明的一種鑒定口蹄疫病毒持續(xù)感染牛的分子標(biāo)志物組合，所述的分子標(biāo)志物組合由il-10、il-1β以及cxcl8基因組成。

4、其中，優(yōu)選的，在口蹄疫病毒持續(xù)感染牛中，il-10、il-1β以及cxcl8基因的表達(dá)水平均在攻毒后7天顯著低于康復(fù)牛，而在攻毒后14天顯著高于康復(fù)牛。

5、進(jìn)一步的，本發(fā)明還提出了所述的分子標(biāo)志物組合在制備鑒定口蹄疫病毒持續(xù)感染牛的試劑中的應(yīng)用。

6、再進(jìn)一步的，本發(fā)明還提出了一種用于鑒定口蹄疫病毒持續(xù)感染牛的引物組合物，所述的引物組合物由分別用于擴(kuò)增il-10、il-1β以及cxcl8基因轉(zhuǎn)錄本的引物組成。

7、其中，優(yōu)選的，用于擴(kuò)增il-10基因轉(zhuǎn)錄本的引物序列為：

8、上游引物：gcgaggcgaagactttcttt；

9、下游引物：gcaacccaggtaa-cccttaaagt；

10、用于擴(kuò)增il-1β基因轉(zhuǎn)錄本的引物序列為：

11、上游引物：aaaaatccctggtgctggct；

12、下游引物：atgcag-aacaccacttctcgg；

13、用于擴(kuò)增cxcl8基因轉(zhuǎn)錄本的引物序列為：

14、上游引物：ccaatggaaacgaggtctgc；

15、下游引物：ttgcttctcagctctcttcac。

16、更進(jìn)一步的，本發(fā)明還提出了所述的引物組合物在制備鑒定口蹄疫病毒持續(xù)感染牛的試劑中的應(yīng)用。

17、相較于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果是：

18、本發(fā)明提供了一種鑒定口蹄疫病毒持續(xù)感染牛的分子標(biāo)志物組合，所述的分子標(biāo)志物組合由il-10、il-1β以及cxcl8基因組成。對(duì)這三個(gè)基因進(jìn)行roc分析，計(jì)算了曲線下面積(auc)及其95％的置信區(qū)間(95％ci)，以及診斷的敏感性和特異性。結(jié)果顯示這三個(gè)基因組合的roc曲線顯示出更高的診斷準(zhǔn)確性，在7dpc時(shí)，auc為1.000(95％置信區(qū)間，0.872-1.000)，診斷的敏感性和特異性均達(dá)到了100％。在14dpc時(shí)，auc為1.000(95％置信區(qū)間，0.872-1.000)，診斷的敏感性和特異性也均達(dá)到了100％。該結(jié)果說(shuō)明il-10、il-1β、cxcl8可作為一個(gè)分子標(biāo)志物組合，在口蹄疫病毒感染早期(<14dpc)對(duì)潛在的fmdv持續(xù)感染牛進(jìn)行篩查，以便更早更快速的控制疾病的傳播。

技術(shù)特征：

1.一種鑒定口蹄疫病毒持續(xù)感染牛的分子標(biāo)志物組合，其特征在于，所述的分子標(biāo)志物組合由il-10、il-1β以及cxcl8基因組成。

2.如權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)志物組合，其特征在于，在口蹄疫病毒持續(xù)感染牛中，il-10、il-1β以及cxcl8基因的表達(dá)水平均在攻毒后7天顯著低于康復(fù)牛，而在攻毒后14天顯著高于康復(fù)牛。

3.權(quán)利要求1或2所述的分子標(biāo)志物組合在制備鑒定口蹄疫病毒持續(xù)感染牛的試劑中的應(yīng)用。

4.一種用于鑒定口蹄疫病毒持續(xù)感染牛的引物組合物，其特征在于，所述的引物組合物由分別用于擴(kuò)增il-10、il-1β以及cxcl8基因轉(zhuǎn)錄本的引物組成。

5.如權(quán)利要求4所述的引物組合物，其特征在于，用于擴(kuò)增il-10基因轉(zhuǎn)錄本的引物序列為：

6.權(quán)利要求4或5所述的引物組合物在制備鑒定口蹄疫病毒持續(xù)感染牛的試劑中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種鑒定口蹄疫病毒持續(xù)感染牛的分子標(biāo)志物組合及其應(yīng)用。所述的分子標(biāo)志物組合由IL?10、IL?1β以及CXCL8基因組成。在口蹄疫病毒持續(xù)感染牛中，IL?10、IL?1β以及CXCL8基因的表達(dá)水平均在攻毒后7天顯著低于康復(fù)牛，而在攻毒后14天顯著高于康復(fù)牛。對(duì)這三個(gè)基因進(jìn)行診斷的敏感性和特異性分析。結(jié)果顯示，在7dpc時(shí)，AUC為1.000(95％置信區(qū)間，0.872?1.000)，診斷的敏感性和特異性均達(dá)到了100％。在14dpc時(shí)，AUC為1.000(95％置信區(qū)間，0.872?1.000)，診斷的敏感性和特異性也均達(dá)到了100％。該結(jié)果說(shuō)明IL?10、IL?1β、CXCL8可作為一個(gè)分子標(biāo)志物組合，在口蹄疫病毒感染早期(<14dpc)對(duì)潛在的FMDV持續(xù)感染牛進(jìn)行篩查，以便更早更快速的控制疾病的傳播。

技術(shù)研發(fā)人員：郭慧琛,孫世琪,張智慧,位素敏,滕志東,王爽,尹雙輝,穆素雨,丁耀忠,張韻,董虎,白滿元,吳金恩,周靜靜
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所（中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心蘭州分中心）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8