棉花內(nèi)生真菌cef-559及其在棉花黃萎病防治中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，具體涉及棉花內(nèi)生真菌CEF?559及其在棉花黃萎病防治中的應(yīng)用。其保藏編號是：CGMCC No.11314。本發(fā)明獲得的菌株CEF?559分離自棉花，對多數(shù)的作物不致病，解決了具有生防潛力的微生物可能轉(zhuǎn)變?yōu)橹虏【膯栴}，因此對人畜、昆蟲和作物安全，環(huán)境友好。CGMCC No.1131420150914
【專利說明】
棉花內(nèi)生真菌CEF-559及其在棉花黃萎病防治中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及微生物領(lǐng)域，具體設(shè)及棉花內(nèi)生真菌CEF-559及其在棉花黃萎病防治 中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 棉花是關(guān)系國計民生的重要戰(zhàn)略物資。棉花黃萎病是由大麗輪枝菌引起的±傳維 管束真菌病害，是我國乃至世界棉花生產(chǎn)上的最主要病害，被稱為棉花的"癌癥"成為發(fā)展 棉花生產(chǎn)的主要限制因子之一。
[0003] 利用有益微生物控制植物病害的發(fā)生具有經(jīng)濟(jì)、環(huán)境友好的特點。生防菌通?？?利用競爭、抗生、寄生和交叉保護(hù)等直接的括抗機制抑制植物病害；同時某些生防菌還能促 進(jìn)植物生長，誘導(dǎo)植物對真菌、細(xì)菌和病毒引起的病害乃至對線蟲和昆蟲為害的抗性，稱為 誘導(dǎo)系統(tǒng)抗性(ISR)，又稱獲得性抗病性，是植物在一定的生物或非生物因子的刺激或作用 下，產(chǎn)生對隨后病原物侵染的抗性。誘導(dǎo)的系統(tǒng)抗病性(或免疫作用)優(yōu)于化學(xué)防治和抗病 育種，其優(yōu)點如下：（1)免疫作用能有效地防治病毒、細(xì)菌和真菌病害。（2)免疫作用是穩(wěn)定 的，它決定幾種不同的機制，而內(nèi)吸殺菌劑往往具有單一的作用位點，容易產(chǎn)生新的抗藥小 種，因而是不穩(wěn)定的。（3)免疫作用是系統(tǒng)的、持久的，瓜類中的免疫作用可通過嫁接，從化 木傳導(dǎo)到接穗。（4)在感病植物中亦具有免疫能力，說明潛在的抗病基因存在于所有的植物 中。（5)免疫物質(zhì)，可從免疫植株的化學(xué)提取物中獲得，可在田間噴施或種子處理。
[0004] 目前利用括抗微生物防治棉花黃萎病研究較多的是枯草芽抱桿菌，作用機理是產(chǎn) 生桿菌膚等多種抗菌物質(zhì)來抑制病原菌，對黃萎病的防治具有一定的效果，但是在生產(chǎn)應(yīng) 用中存在不少問題，其中最主要的問題是防治效果較低，國內(nèi)登記的枯草芽抱桿菌劑型對 棉花黃萎病的防治效果在45 %左右，且在不同年份效果不穩(wěn)定。例如2008年和2009年，由中 國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所承擔(dān)國家農(nóng)藥登記試驗中（任務(wù)來源于農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥鑒定所），黑龍 江強爾生化技術(shù)開發(fā)區(qū)有限公司生產(chǎn)的1000億活芽抱/克枯草芽抱桿菌可濕性粉劑對棉花 黃萎病的防治效果為46.0%-52.9%，但在2010年大面積試驗中防治效果只有32.7%。
[0005] 植物內(nèi)生真菌是那些在其生活史的一定階段或全部階段生活于健康植物的各種 組織和器官內(nèi)部、不引發(fā)植物產(chǎn)生明顯病癥的真菌。因為能夠產(chǎn)生次生代謝類物質(zhì)防治植 物病害，現(xiàn)已成為生物防治中重要的生防因子。棉花黃萎病是一種系統(tǒng)性維管束病害，病原 菌從植株的根部入侵，沿維管束擴展蔓延，棉花的內(nèi)生真菌與黃萎病菌同處植物體內(nèi)，具有 相同的微生態(tài)環(huán)境，內(nèi)生真菌的代謝產(chǎn)物可直接作用于黃萎病菌，因此，從棉花的內(nèi)生真菌 入手，分離篩選對黃萎病菌具有抑制活性的菌株，獲得對該病控制效果好的生防菌株，是值 得探討的棉花黃萎病防治的新途徑。本發(fā)明從健康棉花的莖桿中獲得一株內(nèi)生真菌，經(jīng)溫 室苗期試驗對棉花黃萎病的防治效果達(dá)64.63%，對棉花黃萎病的防治具有巨大的潛能。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的發(fā)明人為解決現(xiàn)有的括抗微生物防治棉花黃萎病效果較差的問題，提出 并完成本發(fā)明。
[0007] 本發(fā)明從棉花的內(nèi)生真菌入手，通過分離、篩選、鑒定、抑菌測定及溫室的生物測 定，獲得對棉花黃萎病具有顯著控制作用的菌株CEF-559。
[0008] 根據(jù)本發(fā)明的棉花內(nèi)生真菌CEF-559,該菌株是一種尖抱鑲刀菌。在分離時，首先 要選擇健康的棉株，最重要的是，在分離過程中，一定要保證樣品的表面消毒徹底，確保分 離到的是棉花的內(nèi)生真菌。
[0009] 本發(fā)明獲得的生防菌株CEF-559來自棉株體內(nèi)，將生防菌株經(jīng)過查彼克液體培養(yǎng) 基培養(yǎng)后，過濾菌絲及抱子，然后將濾液接到棉花根部，或者將生防菌的玉米沙粒培養(yǎng)物加 入基質(zhì)中培育棉苗。能夠增強棉花對黃萎病的抗病性。
[0010]該菌株經(jīng)鑒定是一株尖抱鑲刀菌(Fusarium sp.)。從棉花中可W分離到豐富的內(nèi) 生真菌。由于微生物的培養(yǎng)性狀容易受培養(yǎng)條件的影響，傳統(tǒng)的W形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)的分類鑒 定有時候會受到限制。分子生物學(xué)的發(fā)展給微生物的分類鑒定提供了新的有效措施，因此， W傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定為基礎(chǔ)，結(jié)合分子生物學(xué)的手段，對篩選到的菌株進(jìn)行鑒定，最后獲得 目的菌株。
[0011] 利用棉花的內(nèi)生真菌CEF-559來控制棉花黃萎病在W下五方面產(chǎn)生有益效果。
[0012] UCEF-559能夠在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)，容易獲得和培養(yǎng)。用于生物防治的菌株必須 能夠在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)，W利于工廠化生產(chǎn)和推廣應(yīng)用。CEF-559是一株棉花的內(nèi)生真 菌，在±壤中廣泛存在，該菌株在PDA、查彼克及玉米沙粒培養(yǎng)基上生長良好，有利于大量 繁殖和推廣應(yīng)用。
[OOK] 2、CEF-559對棉花黃萎病菌具有較好的抑制效果。在PDA培養(yǎng)基上，CEF-559產(chǎn)生的 非揮發(fā)性代謝物對黃萎病菌菌落生長的抑菌效果為100%，對分生抱子萌發(fā)的抑制率為 100%，對分生抱子產(chǎn)量的抑制率為78.2%。
[0014] 3、CEF-559對黃萎病控制效果好。在棉苗真葉初現(xiàn)時用CEF-559培養(yǎng)濾液預(yù)接種棉 花(每鉢50ml )，對黃萎病的防治效果為77.62% ;將CEF-559的玉米沙粒培養(yǎng)物按2%接入基 質(zhì)中，對棉花黃萎病的防治效果為64.72% ;兩種方法平均防治效果為71.17%。
[0015] 4XEF-559對黃萎病菌具多種作用方式，施用方法靈活。CEF-559的培養(yǎng)濾液預(yù)接 種棉花可W顯著提高棉株內(nèi)防御相關(guān)基因的表達(dá)，提高棉花的抗病性，從而有效控制黃萎 病危害，該作用方式表明CEF-559可用于研制植物疫苗，采用滴灌方式防治棉花黃萎病；同 時，將CEF-559的玉米沙粒培養(yǎng)物風(fēng)干后(有效成分為菌絲體和抱子），按2 %接入基質(zhì)后，對 棉花黃萎病具有很好的控制作用，該作用方式可用于研制微生物肥料。
[0016] 5、CEF-559為環(huán)境友好型生防菌株。CEF-559屬于半知菌亞口、肉座菌目、瘤座抱 科、鑲刀菌屬，并對±壤中的有害微生物產(chǎn)生括抗作用。本發(fā)明獲得的菌株CEF-559分離自 棉花，對多數(shù)的作物不致病，解決了具有生防潛力的微生物可能轉(zhuǎn)變?yōu)橹虏【膯栴}，因此 對人畜、昆蟲和作物安全，環(huán)境友好。
【附圖說明】
[0017] 圖1為CEF-559在PDA上的菌落形態(tài)及在顯微鏡下的菌絲和分生抱子，其中a為正 面，b為反面，C為顯微鏡下觀察到的菌絲及分生抱子。
[0018] 圖2圓盤慮膜法測定CEF-559對棉花黃萎病菌的抑制作用。曰，對照，直接在PDA平板 中央接種棉花黃萎病菌強致病力菌株Vd080(其保藏編號為:CGMCC No.5904)菌塊(直徑為 5mm)，25°C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)15d;b，在平板中央接種CEF-559的菌塊(直徑為5mm)，25°C恒 溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)7d后去玻璃紙，再在平板中央接種黃萎病菌Vd080菌塊(直徑為5mm)，25°C 恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)15d。
[0019]圖3 CEF-559對棉花黃萎病菌抱子萌發(fā)的抑制作用。a,對照，直接在PDA平板上涂 布100個Vd080分生抱子(5化L抱子懸浮液，濃度為2 X 103個/mL)，25 °C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 15d;b，在平板中央接種CEF-559的菌塊(直徑為5111111)，25°(：恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)7(1后去玻璃 紙，再在PDA平板上涂布約100個Vd080分生抱子（50化抱子懸浮液，濃度為2 X 103個/mU， 25 °C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)15d。
[0020]圖4 CEF-559對棉花黃萎病的控制作用。a,真葉初現(xiàn)(播種后18天左右），將查彼克 培養(yǎng)基(不含CEF-559)50mL薩根棉苗，4天后(一片真葉平展)接種大麗輪枝菌強致病力菌株 Vd080;b，真葉初現(xiàn)(播種后18天左右），薩根接種CEF-559的查彼克培養(yǎng)濾液50mL，4天后接 種大麗輪枝菌強致病力菌株Vd080。
[0021 ] 本發(fā)明要求保護(hù)的棉花內(nèi)生真菌:鑲抱(Fusarium sp. )CEF-559,于2015年9月14 日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中屯、(北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3 號，中國科學(xué)院微生物研究所，100101)，其保藏編號是:CGMCC No. 11314。
【具體實施方式】
[0022] 實施例1:菌株的分離
[0023] (1)樣品采集
[0024] 于6-8月份，選擇健康棉株，取主莖的中上部及果枝15cm。
[0025] (2)菌株的分離
[0026] 先將采集到的樣品（棉花莖桿)用清水洗凈，去皮，置于直徑為9cm的滅菌的培養(yǎng)皿 中，用75%的酒精消毒Imin。再用5.0%的次氯酸鋼進(jìn)行消毒60s，用滅菌水洗3次，每次時間 不少于3min。然后用滅菌的吸水紙沾干表面的水分，用消毒的剪刀剪成0.4cm長的小段，置 于9cm的培養(yǎng)皿中，25°C培養(yǎng)。用最后一遍清洗液為對照，檢查消毒是否徹底。每天檢查內(nèi)生 真菌的生長情況，發(fā)現(xiàn)有菌落長出，及時轉(zhuǎn)移至直徑為6cm的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，然后觀察其菌 落大小、顏色、表面特征、質(zhì)地。
[0027] (3)CEF-559 的特征
[00%] 1、形態(tài)特征在PDA平板上，剛開始為灰白色菌絲，甸筒生長，培養(yǎng)7天W后，菌落中 央產(chǎn)生枯紅色色素，繼續(xù)培養(yǎng)顏色變深，呈褐色。顯微鏡下(400X)該菌株菌絲體透明，有分 隔，產(chǎn)生大型分生抱子和小抱子，大型分生抱子呈鑲刀狀至紡鍵形，3-5個分隔；小包子呈楠 圓形，多數(shù)單抱，少數(shù)有1個分隔（圖1)。
[00巧]2、生理特征CEF-559在5-30°C條件下均能生長，最適生長溫度是25°C。依據(jù)CEF- 559 形態(tài)特征、 生理特征和分子鑒定結(jié)果， CEF-559 被鑒定為鑲刀菌(化 sari 皿 sp. )， 屬于屬 于半知菌亞口、肉座菌目、瘤座抱科、鑲刀菌屬(圖1)。
[0030] (4)培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件
[0031] 1. PDA培養(yǎng)基馬鈴馨200g，葡萄糖20g，瓊脂15-20g，水1000ml，自然pH。稱取削皮 的200g馬鈴馨，切成小塊置于鍋中加水煮爛(煮沸20-30min)，用紗布過濾后，濾液中加入葡 萄糖和瓊脂繼續(xù)加熱攬勻，稍冷卻后再補水至1000ml，分裝到錐形瓶，加塞包扎后滅菌 20min(0.235MPa，121°C)。25°(：，黑暗培養(yǎng)7d。
[0032] 2 .查彼克（Czapek)液體培養(yǎng)基KN03，2 . OOg;K2冊04，1.3Ig;KCI，0.50g;MgS04. 7H20，0.50g; FeS04.7H20，0.04g;薦糖，30.0 Og;加水至1000ml，分裝到錐形瓶，加塞包扎后 滅菌20min(0.235MPa，121°C)。置搖床150巧m，25°C，黑暗條件震蕩培養(yǎng)7d。
[0033] 3.玉米沙粒培養(yǎng)基玉米和沙±質(zhì)量比為1:1，混勻后，每lOOOg加入150ml水，攬拌 均勻后，裝入克氏瓶中，加塞包扎后滅菌20min(0.235MPa，121°C) d25°C，黑暗培養(yǎng)7d
[0034] 實施例2:CEF-559對棉花黃萎病菌的抑制作用
[0035] 1、試驗方法
[0036] 圓盤濾膜法測定CEF-559非揮發(fā)性代謝物對黃萎病菌的抑制作用。在直徑為9cm的 PDA平板上，平鋪上直徑略大于9cm的雙層玻璃紙(硝酸纖維素膜），在平板中央接種CEF-559 菌塊（直徑為5mm)，25°C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)7d后去玻璃紙，再在平板中央接種黃萎病菌 Vd080(直徑為5mm)，25°C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)15d。W不含CEF-559代謝產(chǎn)物的PDA平板接種棉 花黃萎病菌Vd080為對照。每個處理重復(fù)4次，用十字法測定菌落直徑，計算抑制率。
[0037] CEF-559代謝物對黃萎病菌分生抱子產(chǎn)生的影響。將CEF-559的菌塊接到經(jīng)過高溫 滅菌的查彼克培養(yǎng)液中，150巧m震蕩培養(yǎng)7天。再將混合物用Ξ層濾紙過濾，后用0.22WI1的 微孔濾膜器過濾，然后用冷凍干燥器濃縮備用。將冷凍干燥濃縮兩倍的CEF-559代謝物與 Vd080抱子懸浮液（107CFU/ml，即107個分生抱子/ml)按體積比3:1加入到2ml離屯、管中，對照 中W查彼克培養(yǎng)液代替CEF-559代謝物，液體總體積為80化1，25 °C暗處培養(yǎng)，觀察和記錄 1化的分生抱子產(chǎn)抱量。
[0038] CEF-559代謝物對黃萎病菌分生抱子萌發(fā)的影響。同樣采用圓盤濾膜法收集CEF- 559 代謝產(chǎn)物 ，然后代替 Vd080 的菌塊在平板上涂上約 100 個 Vd080 的分生抱子 (5 化 L 抱子懸 浮液，濃度為2X103個/mU，25°C培養(yǎng)3天，在體視顯微鏡下觀察抱子萌發(fā)形成菌落情況，并 記錄萌發(fā)成菌落的個數(shù)，W直接在PDA平板上涂布相同數(shù)量的Vd080的分生抱子為對照。
[0039] 2、試驗結(jié)果
[0040] 圓盤濾膜法培養(yǎng)結(jié)果表明，經(jīng)CEF-559處理的棉花黃萎病菌Vd080停止生長，菌落 直徑為0.00cm，菌塊上長有氣生菌絲和黑色微菌核，未經(jīng)CEF-559處理的對照菌落生長正 常，菌落直徑為6.46cm，CEF-559分泌的代謝產(chǎn)物對黃萎病菌的生長具有顯著的抑制作用， 抑制率達(dá)100% (表1，圖2)。
[0041 ] 添加 CEF-559代謝物的處理中黃萎病菌分生抱子產(chǎn)量為0.442 X 107C即/ml,對照 處理中的抱子產(chǎn)量為2.203 X 107CFU/ml，CEF-559代謝物對黃萎病菌分生抱子產(chǎn)生具有顯 著的抑制作用，抑制率達(dá)70.5%。
[0042] 在含有CEF-559代謝物的PDA平板上，棉花黃萎病菌Vd080分生抱子均未萌發(fā)，在對 照PDA平板上，棉花黃萎病菌Vd080分生抱子的萌發(fā)數(shù)量為72.3/皿，抑制率達(dá)100% (圖3)。
[0043] 表1 CEF-559非揮發(fā)性代謝物對棉花黃萎病菌的抑制作用
[0044]
[0045] 注：各項測量值后面的不同字母，表示不同處理之間差異達(dá)顯著水平化SD，P< 0.01)
[0046] 實施例3:CEF-559對棉花黃萎病的控制作用
[0047] 1、試驗方法試驗采用兩種方法探明CEF-559對棉花黃萎病的控制作用。
[004引預(yù)接種法。CEF-559經(jīng)查彼克液體培養(yǎng)基25°C，黑暗條件震蕩培養(yǎng)7d后，用四層紗 布過濾，后用0.22皿的微孔濾膜器過濾去除菌系、抱子，獲得CEF-559的培養(yǎng)濾液備用。
[0049] 將滅菌后的賠石和沙子按6:4混合，然后做直徑6cm的無底紙鉢，放置于45cm X 35cm的塑料盤內(nèi)。W感病品種冀棉11為供試品種，將脫絨棉巧在清水中浸泡1化后，淋干備 播。每鉢播種棉花種子8粒，出苗后留苗5株，每處理15個鉢，每5個鉢為一個重復(fù)，3次重復(fù)， 隨機排列。棉花播種后，將塑料盤置溫室中，待棉苗一片真葉初現(xiàn)時(播種后18天左右），薩 根CEF-559的培養(yǎng)濾液，每鉢50ml，4天后一片真葉平展時，接種棉花黃萎病大麗輪枝菌 Vd080抱子懸浮液，每鉢10ml，抱子濃度為1 X 107C即/ml。薩根CEF-559的培養(yǎng)濾液和接種黃 萎病菌的方法為，將一定量的CEF-559培養(yǎng)濾液或黃萎病菌抱子懸浮液倒入直徑10cm的培 養(yǎng)皿中，將紙鉢從塑料盤中取出放置在培養(yǎng)皿中40s，待培養(yǎng)濾液或抱子懸浮液被吸干后， 將紙鉢放回塑料盤中。棉苗置日光溫室中培養(yǎng)，環(huán)境溫度控制在20°C-32°C，±壤相對濕度 控制在60% W上，光照良好。棉苗發(fā)病后，按5級分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病害的分級調(diào)查。計算病株 率、病情指數(shù)和防治效果。
[0050] 基質(zhì)接種法。將滅菌后的賠石和沙子按6:4混合作為育苗基質(zhì)，處理組將CEF-559 的玉米沙粒培養(yǎng)物按質(zhì)量比2%接入賠石沙子基質(zhì)，混勻后制作營養(yǎng)鉢;對照組將玉米沙粒 培養(yǎng)基按質(zhì)量比2%接入賠石沙子基質(zhì)，混勻后制作營養(yǎng)鉢;兩組處理均于一片真葉平展時 薩根接種棉花黃萎病菌強致病力菌株Vd080。試驗用品種、播種方法、棉苗管理、Vd080接種 方法、病害調(diào)查等同上。
[0化1] 2、試驗結(jié)果
[0化2] 2014年和2015的培養(yǎng)濾液預(yù)接種法結(jié)果表明，用50ml CEF-559培養(yǎng)濾液處理的棉 苗黃萎病均顯著低于對照處理，其防治效果分別為79.46%和78.78%，平均為77.62% (表 2,圖 4)。
[0053] 2014年和2015玉米沙粒培養(yǎng)物基質(zhì)接種法結(jié)果表明，播種后35天，CEF-559對黃萎 病的控制效果分別為64.29%和65.14%，平均防治效果為64.72% (表2)
[0054] 表2 CEF-559兩種處理方法對棉花黃萎病的防治效果
[ο化5]
[0056] 注：各項測量值后面的不同字母，表示不同處理之間差異達(dá)顯著水平化SD，P< 0.01)
[0057] 實施例4:CEF-559對棉花防御基因表達(dá)的影響 [0化引1、試驗方法
[0059] 棉苗培育及接種CEF-559和Vd080的方法同實施例3中培養(yǎng)濾液預(yù)接種法。在接種 Vd080后Id、2d、3d、4d、7d取樣，每個處理隨機20棵苗，葉片進(jìn)行液氮處理后，采用RNAprep Pure Plant Kit(TIANGEN)提取棉花的總RNA，將RNA的濃度調(diào)到化g/ml，采用化ermo公司的 Reve;rtAid First Sl:rand cDNA Synthesis Kit合成cDNA第一鏈，?棉花中高度保守的基 因 ubiquitin作內(nèi)參，W0-l，3-glucanase、PAL、PPO、POD基因的特異引物(表3)，進(jìn)行巧光定 量PCR擴增，檢測上述4個基因的表達(dá)量。
[0060] 表3抗性相關(guān)基因的特異性引物序列
[0061]
[0063] 2、試驗結(jié)果
[0064] 經(jīng)CEF-559培養(yǎng)濾液處理棉花根部后，i3-l，3-glucanase、POD和PAL基因的表達(dá)量 在特定的時間點均有增加，0-1，3-旨111。曰]1曰36在3(19；[時達(dá)到最大值，是對照的5.51倍，？00和 PAL分別在2dpi和4dpi時達(dá)到最大值，分別是對照的2.06倍和2.26倍;PP0變化不明顯（表 4)。表明CEF-559培養(yǎng)濾液處理棉花根部后，可誘導(dǎo)棉苗防御性基因的表達(dá)，從而增強植株 對黃萎病菌的抗性，降低病原菌的危害。
[00化]表4 0-l，3-glucanase、POD、PPO和PAL基因的相對表達(dá)量
[0066]
[0067] 實施例4:CEF-559對棉花出苗率和棉苗生長的影響 [006引1、試驗方法
[0069] 將無菌的賠石和沙子按6 :4混合作為基質(zhì)，將CEF-559的玉米沙粒培養(yǎng)物按2%接 入基質(zhì)，混勻后制作營養(yǎng)鉢，每鉢播種冀棉11種子10粒，后用無菌的沙子覆蓋，沙子厚度約 為2cm。試驗W接種玉米沙粒培養(yǎng)基為對照，共兩個處理，均不再接種棉花黃萎病菌。播種后 7天，調(diào)查出苗數(shù)，之后每3天一次，至不再有新苗出現(xiàn)為止；出苗后20天，每處理隨機選取25 棵棉苗，現(xiàn)慢株高、根長、棉苗鮮重和根鮮重。
[0070] 2、試驗結(jié)果
[0071] 結(jié)果表明，接種CEF-559的處理出苗率為83.33 %，與對照相當(dāng)（85.67 % );接種 CEF-559CF的處理對棉苗的株高、根長和棉苗鮮重都與對照沒有顯著差異，表明接種CEF- 559 能提高棉苗的出苗率，且對棉苗的生長發(fā)育沒有負(fù)作用(表 5)。
[0072] 表5 CEF-559對棉花出苗及棉苗生長的影響
[0073]
[0075]注：各項測量值后面的不同字母，表示不同處理之間差異達(dá)顯著水平化SD，P< 0.05)。
【主權(quán)項】
1. 棉花內(nèi)生真菌CEF-559，其特征在于，其保藏編號是:CGMCC No. 11314。2. 權(quán)利要求1所述棉花內(nèi)生真菌CEF-559在棉花黃萎病防治中的應(yīng)用。3. -種防治棉花黃萎病的方法，其特征在于，所述方法包括將權(quán)利要求1所述的棉花內(nèi) 生真菌CEF-559培養(yǎng)濾液預(yù)接種棉花的步驟。4. 一種防治棉花黃萎病的方法，其特征在于，所述方法包括步驟:將權(quán)利要求1所述的 棉花內(nèi)生真菌CEF-559的玉米沙粒培養(yǎng)物風(fēng)干后，按質(zhì)量比例2%接入基質(zhì)后施與棉花。
【文檔編號】C12R1/77GK106010983SQ201610425079
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月13日
【發(fā)明人】朱荷琴, 張蕓, 馮自力, 馮鴻杰, 李志芳, 師勇強, 趙麗紅, 袁媛
【申請人】中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所