本發(fā)明涉及醫(yī)用生物材料
技術領域：
，具體為一種神經修復材料，用于將生長因子復合于小腸粘膜下層免疫原去除基質中，保護受損、缺損周圍神經，防組織粘連并誘導神經修復。
背景技術：
：周圍神經遍及全身皮膚、粘膜、肌肉、骨關節(jié)、血管及內臟等，因此人體組織因牽拉、切割、壓迫、燒傷、缺血等原因都會累及周圍神經造成神經損傷。周圍神經是神經元的細胞突起，又稱神經纖維，由軸索、髓鞘和施萬鞘組成。軸索功能是神經元和神經終末結構之間神經沖動傳導，髓鞘防止興奮擴散作用，施萬鞘由schwann細胞組成，是神經再生的通道。周圍神經鞘受損后即會造成神經難以再生，與周圍組織粘連形成瘢痕組織。因此在神經損傷修復過程中，應首先保護受損神經，將神經與周圍組織隔離，防止肌肉、肌腱、筋膜等周圍組織長入形成瘢痕組織，并為神經再生提供營養(yǎng)物質，引導神經軸索再生恢復功能。傳統(tǒng)修復神經局限于縫線縫合的方法，并未采用生物材料進行損傷保護，縫線縫合后吻合口處會出現水腫，大量成纖維細胞的過度增生會導致吻合口處發(fā)生纖維化，若局部瘢痕或組織粘連，則會嚴重的影響到神經功能的恢復。同時，神經損傷時大多伴有肌肉、肌腱、筋膜損傷，這些組織的修復主要以瘢痕修復為主，這也會導致神經吻合口周圍過多的瘢痕形成從而影響神經再生。而且最重要的是未考慮到施萬鞘的修復，只有修復施萬鞘才能防止周圍纖維細胞長入，控制局部瘢痕，減少粘連組織的形成，并為神經再生提供生長微環(huán)境與營養(yǎng)成分，有利于神經再生。因此，臨床上迫切需要一種可以代替縫合方法的免縫合技術用于修復周圍神經的損傷。技術實現要素：本發(fā)明針對現有技術的上述不足，提供一種將生長因子復合于小腸粘膜下層免疫原去除基質中，保護受損、缺損周圍神經，防組織粘連并誘導神經修復的神經修復材料。為了解決上述技術問題，本發(fā)明采用的技術方案為：一種神經修復材料，其特征在于：所述神經修復材料包含膠原蛋白、多糖物質、活性因子和促進神經再生因子。本發(fā)明所述的神經修復材料具有三維網狀多孔結構，無免疫原性、可體內降解，并且可以是片狀或中空管狀。神經損傷可以分為斷裂損傷和非斷裂損傷，其中非斷裂傷如神經纖維的一部分受損或挫傷，這種情況下是神經沒有斷裂，中空管可直接用于修補斷裂損傷，神經細胞在中空管中生長并與其它組織相隔離，從而控制局部瘢痕并減少神經與其它組織粘連；片狀材料用于處理非斷裂損傷，對神經包裹并隔離。本發(fā)明所述的神經修復材料由哺乳動物小腸粘膜下層組織材料制備，優(yōu)選豬或牛的小腸粘膜下層組織材料。本發(fā)明所述的膠原蛋白為包含i型、iii型、iv型和vi型膠原蛋白的組合物。本發(fā)明所述的多糖物質為包含硫酸軟骨素和透明質酸的組合物。本發(fā)明所述的活性因子為包含纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、整合素及生長因子的組合物。本發(fā)明所述的促進神經再生因子包括誘導神經再生的活性物質，優(yōu)選神經生長因子。本發(fā)明所述的無免疫原性指細胞殘留量為0-10個、dna殘留量小于10ng/mg、半乳糖苷酶(α-gal)清除率為99％以上。本發(fā)明所述的三維網狀多孔結構的孔隙率為75～90％。本發(fā)明所述的體內降解的時間為1-3個月。本發(fā)明所述的片狀的神經修復材料長1-8cm，寬1-8cm，厚度0.1-1mm。本發(fā)明所述的中空管狀神經修復材料，長1-5cm，直徑0.2-0.9cm，厚度0.1-1mm的中空管狀。本發(fā)明要解決的另一個技術問題是，提供一種上述神經修復材料的制備方法，其特征在于：包括采用動物小腸粘膜下層組織材料作為原料，通過組織前置處理，病毒滅活，免疫原消除，復合生長因子和冷凍干燥步驟；獲得清除動物源病毒風險、細胞成分、dna成分和α-gal抗原，保留細胞外基質成分。本發(fā)明上述神經修復材料的制備方法，具體步驟包括：(1)組織前置處理；(2)病毒滅活：采用過氧乙酸-乙醇溶液浸泡小腸粘膜下層組織材料進行病毒滅活；(3)清洗；(4)免疫原去除：免疫原去除液為含有胰蛋白酶和edta的ph值6-8的pbs溶液，免疫原去除過程在多頻超聲波裝置中進行；(5)清洗；(6)復合生長因子：將小腸粘膜下層基質材料固定于模具上，加入神經生長因子水溶液；(7)真空冷凍干燥：在真空冷凍干燥機中進行。本發(fā)明步驟(2)病毒滅活中，過氧乙酸-乙醇溶液中過氧乙酸的體積百分比濃度為0.1％-5％、乙醇的體積百分比濃度為5％-40％(用水配置成溶液)，過氧乙酸-乙醇溶液與小腸粘膜下層組織材料的體積比為(3-20)︰1，滅活時間2-4小時，溫度范圍為10-40℃。本發(fā)明步驟(3)清洗中，清洗液為ph值為6-8的pbs溶液，pbs溶液溫度為20℃，pbs溶液與小腸粘膜下層組織材料的比例(體積比)為(20-40)︰1，優(yōu)選清洗2-6次；然后用純化水清洗，純化水與小腸粘膜下層組織材料比例為(20-40)︰1，至檢測電導率為10μs/cm以下終止；清洗過程可在超聲波清洗機中進行，頻率為20-80khz，優(yōu)選40khz，功率優(yōu)選3000w以上。步驟(4)免疫原去除中，免疫原去除液的ph值為6.0-8.0，優(yōu)選為7.2-7.5；其中包括質量百分比濃度為0.01-0.2％的胰蛋白酶和摩爾濃度為0.1-1mmol/l的edta；所述免疫原去除液與小腸粘膜下層組織材料體積比為(20-40)︰1，優(yōu)選30:1，脫細胞過程在包含至少兩個超聲頻率的多頻超聲裝置中進行，其中低頻頻率范圍為20-40khz，高頻頻率為60-90khz，其中低頻處理5-40min，高頻處理5-40min，溫度范圍為20-35℃；超聲功率5000w以上。采用胰蛋白酶和edta，使細胞與細胞外基質之間的連接被破壞；采用低頻超聲對細胞進行破碎，同時使用高頻超聲作用于破碎的細胞及細胞外基質，進一步使細胞脫離細胞外基質，達到脫細胞目的。采用上述方式，對整個細胞脫離基質過程中的各個步驟進行強化，使細胞被從基質上完全脫離。到達最佳的免疫原去除效果。本發(fā)明步驟(5)清洗中，清洗液為ph值為6-8的pbs溶液，pbs溶液溫度為20℃，pbs溶液與小腸粘膜下層組織材料的比例(體積比)為(20-40)︰1，優(yōu)選清洗2-6次；然后用降溫的注射用水清洗，注射用水與小腸粘膜下層組織材料比例為(20-40)︰1，至檢測清洗前后注射用水電導率差為1μs/cm以下終止；清洗過程可在超聲波清洗機中進行，頻率為20-80khz，優(yōu)選40khz，功率優(yōu)選5000w以上。本發(fā)明步驟(6)所述含促進神經再生活性因子的水溶液即神經生長因子水溶液的質量百分比濃度為0.01％-0.02％。所述含促進神經再生活性因子的溶液按照神經生長因子與組織材料質量比1-2:10000加入。本發(fā)明上述所述的動物優(yōu)選為豬或牛。本發(fā)明步驟(6)所述的模具為直徑0.2-0.9cm、長度1-10cm的不銹鋼棒，或者長1-8cm、寬1-8cm的不銹鋼盤。本發(fā)明步驟(7)所述真空冷凍干燥具體為：將復合生長因的小腸粘膜下層基質材料放置于真空冷凍干燥機中，關閉凍干室的門，打開循環(huán)泵約1min，開啟壓縮機對凍干箱致冷，預凍至-45℃，保溫2小時，然后開啟真空泵，調節(jié)溫度至-15℃，保溫6小時，再調節(jié)溫度至0℃，保溫2小時，最后調節(jié)溫度至25℃，保溫4h，真空冷凍干燥完成，凍干室氣壓為1-50pa。本發(fā)明上述的神經修復材料的制備方法，具體步驟還包括：(8)切割包裝：將圓筒狀神經修復材料從不銹鋼棒上取出，切割為長度5cm的中空圓筒狀樣品；或者將片狀神經修復材料根據使用范圍進行切割；采用雙層特衛(wèi)強包裝袋包裝，該過程需要無菌轉運與操作；(9)滅菌解析：采用環(huán)氧乙烷進行滅菌，滅菌條件為：先溫度40℃保溫4小時，濕度70％，然后通入濃度600mg/l環(huán)氧乙烷，滅菌6小時；解析過程在通風的解析室中進行，溫度控制在20℃之間，時間14天。本發(fā)明進一步提供上述神經修復材料的應用，具體為：一種神經修復材料的應用，用于周圍神經損傷的隔離保護。一種神經修復材料的應用，用于神經缺損的橋接。與現有技術相比，本發(fā)明具有以下顯著優(yōu)點和有益效果：(1)采用胰蛋白酶和edta，使細胞與細胞外基質之間的連接被破壞；采用低頻超聲對細胞進行破碎，同時使用高頻超聲作用于破碎的細胞及細胞外基質，進一步使細胞脫離細胞外基質，達到脫細胞目的。采用上述方式，對整個細胞脫離基質過程中的各個步驟進行強化，使細胞被從基質上完全脫離。到達最佳的免疫原去除效果；(2)成型工藝技術：采用模具法、冷凍干燥工藝制備中空圓筒狀或片狀結構，有效保護受損神經，形成神經再生保護微環(huán)境；(3)添加神經生長因子：添加神經生長因子，冷凍干燥工藝有效保存生長因子活力，促進受損神經再生；(4)滅菌工藝：通過滅菌過程調整產品體內降解過程，使免疫原去除基質修復材料逐步降解，與重建組織再生過程基本同步，最終免疫原去除基質修復材料完全被宿主組織代替；(5)用于周圍神經損傷與缺損修復：既能起到屏障作用，可將神經損傷部位與周圍組織有效隔離，防止周圍組織中的成纖維細胞侵入神經損傷部位，又能引導施萬鞘組織再生修復，為受損神經的恢復、定向生長、再生提供微環(huán)境。附圖說明圖1所示的是根據本發(fā)明實施方式的圓筒形(中空管狀)神經修復材料的示意圖；圖2所示的是根據本發(fā)明實施方式的片狀神經修復材料的示意圖；圖3所示的是本發(fā)明神經修復材料的微觀結構sem照片。具體實施方式以下結合實施例對本發(fā)明作進一步具體描述，但不局限于此。實施例1：本實施例神經修復材料的制備方法，包括以下操作步驟：(1)組織前置處理：取小腸粘膜下層組織材料分割成規(guī)定尺寸，寬10cm，長15cm，剔除淋巴組織，用自來水沖洗3次，再用純化水沖洗至表面無污漬，然后將清洗后的小腸粘膜下層組織材料置于篩網等濾水裝置上，靜置五分鐘以上，以將水濾干；(2)病毒滅活：采用過氧乙酸-乙醇溶液(過氧乙酸和乙醇溶解于水中構成)浸泡小腸粘膜下層組織材料進行病毒滅活，該過程可在不銹鋼桶中進行。過氧乙酸-乙醇溶液中過氧乙酸的濃度(體積百分比)為1％、乙醇的濃度(體積百分比)為24％，過氧乙酸-乙醇溶液與小腸粘膜下層組織材料的比例(體積比)為9︰1，滅活時間2小時，溫度范圍為20℃；(3)清洗過程：完成后在超聲波清洗機中用ph值為7的pbs溶液清洗，然后用純化水清洗至檢測電導率為10μs/cm以下終止，清洗過程在超聲波清洗機中進行，頻率為20-80khz，優(yōu)選30-40khz，超聲波功率至少3000w以上，所用的pbs溶液和純化水體積與小腸粘膜下層組織材料體積比為30:1。(4)免疫原去除：免疫原去除液為含有質量百分濃度0.02％胰蛋白酶和濃度為0.5mmol/l的edta的ph值為7.0的pbs溶液，免疫原去除液與小腸粘膜下層組織材料混合比例(體積比)為30︰1，免疫原去除過程在超雙頻聲波清洗機中進行，其中低頻頻率范圍為35khz，高頻頻率為85khz，其中低頻處理8min，高頻處理10min，免疫原去除液的溫度范圍為20-35℃，超聲波功率至少在5000w以上。采用胰蛋白酶和edta，使細胞與細胞外基質之間的連接被破壞；采用低頻超聲對細胞進行破碎，同時使用高頻超聲作用于破碎的細胞及細胞外基質，進一步使細胞脫離細胞外基質，達到脫細胞目的。采用上述方式，對整個細胞脫離基質過程中的各個步驟進行強化，使細胞被從基質上完全脫離。到達最佳的免疫原去除效果。(5)清洗過程：免疫原去除完成后在超聲波清洗機中用ph值為7的pbs溶液清洗，然后用24℃注射用水清洗至檢測清洗前后注射用水電導率差為1μs/cm以下終止，清洗過程在超聲波清洗機中進行，頻率為20-80khz，優(yōu)選30-40khz，更優(yōu)選40khz，超聲波功率至少3000w以上，所用的pbs溶液和注射用水體積與小腸粘膜下層組織材料體積比為30:1，得到小腸粘膜下層基質材料；(6)復合生長因子：將小腸粘膜下層基質材料包裹于不銹鋼棒上，不銹鋼棒的直徑可為0.1-0.7cm、長度1-10cm，例如7cm，固定，然后加入質量百分比濃度為0.02％的神經生長因子水溶液。或者，小腸粘膜下層基質材料放置于不銹鋼盤中，然后加入質量百分比濃度為0.02％的神經生長因子水溶液。使神經生長因子水溶液完全浸沒小腸粘膜下層基質材料，混合后靜置24小時；使神經生長因子附著至小腸粘膜下層材料。(7)真空冷凍干燥：在真空冷凍干燥機中進行，產品的冷凍干燥工藝需要根據不同的設備重新確認，將模具平鋪于真空冷凍干燥機中，關閉凍干室的門，打開循環(huán)泵約1min，開啟壓縮機對凍干箱致冷，將步驟(6)材料預凍至-45℃，保溫2小時，然后開啟真空泵，調節(jié)溫度至-15℃，保溫6小時，再調節(jié)溫度至0℃，保溫2小時，最后調節(jié)溫度至25℃，保溫4h，真空冷凍干燥完成。凍干室氣壓為1-50pa。實施例1的制備方法中還可以包括：(8)切割包裝：將圓筒狀神經修復材料從不銹鋼棒上取出，切割為長度5cm的中空圓筒狀樣品；或者將片狀神經修復材料根據使用范圍進行切割；采用雙層特衛(wèi)強包裝袋包裝，該過程需要無菌轉運與操作。(9)滅菌解析：采用環(huán)氧乙烷進行滅菌，滅菌條件為：先溫度40℃保溫4小時，濕度70％，然后通入濃度600mg/l環(huán)氧乙烷，滅菌6小時；解析過程在通風的解析室中進行，溫度控制在20℃之間，時間14天。本發(fā)明所得產品結構如圖1、圖2所示，具體微觀結構如圖3所示，為三維網狀多孔結構。對本發(fā)明所得材料的化學成分進行檢測，如下表1所示：表1實施例樣品化學成分蛋白(％)碳水化合物(％)脂類(％)水分灰分生長因子75％-85％15％-25％<1％<5％<1％0.01-2％對實施例中樣品進行性能檢測，檢測項目與結果如下：1)膠原蛋白亞型鑒別：采用免疫組化染色法檢測i、iii、iv型和vi型膠原蛋白，3μm厚連續(xù)切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水。將切片移入電飯煲水浴中(內含0.01mol/l，ph6.0的枸櫞酸三鈉緩沖液)，溫度保持在95-100℃，煮20min，進行抗原修復，取出后在室溫下自然冷卻。磷酸鹽緩沖液(pbs)洗滌，5min×3次。二步法免疫組化：分別滴加i、iii、iv型和vi型膠原蛋白單克隆抗體一抗，濃度1：100，4℃冰箱過夜室溫下孵育60min，pbs洗滌3次。滴加envision反應液，室溫下孵育30min。pbs洗滌3次。0.05％的3，3一二氨基聯苯胺+0.03％的h2o2顯色5-10min。流水洗，蘇木精襯染。遞增梯度乙醇脫水，二甲苯透明，常規(guī)樹脂封固。結果表明，顯微鏡下觀察四種染色標本皆可見棕黃染色，為陽性，表明樣品中可檢測到i、iii、iv型和vi型膠原蛋白。2)多糖物質含量檢測：取10個樣品，取樣，浸提，用biocolor硫酸軟骨素檢測試劑盒測試硫酸軟骨素含量，樣品中硫酸軟骨素含量平均值為4512±524μg/g；用透明質酸檢測試劑盒測試透明質酸(ha)含量，結果顯示，樣品的透明質酸(ha)保留量平均值為187±45μg/g。3)活性因子種類鑒別：將樣品浸泡pbs24h后，固定于4％多聚甲醛5-10min，用0.1mol/lpbs洗3次，每次5min，然后用玻璃細管轉至涂有多聚賴氨酸的玻片上,進行免疫組織化學染色。ln抗體、fn抗體和整合素效價均為1∶100，0.5％胰酶消化3-5min暴露抗原，0.1％tritonx100作用10min增加抗體的穿透性。免疫組織化學染色顯陽性，表面樣品中包含纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、整合素及其配體的等物質。4)生長因子含量檢測：采用elisa法檢測樣品中堿性生長因子(bfgf，見圖1)和血管內皮生長因子(vegf，見圖2)含量，并對免疫原去除前動物組織作為對照。結果發(fā)現堿性生長因子(bfgf)免疫原去除前后含量分別為2035±178ng/l、1199±130ng/l，保留生長因子55％以上；血管內皮生長因子(vegf)含量免疫原去除前后含量分別為731±58ng/l、358±24ng/l，保留生長因子50％以上。5)病毒檢測：選擇偽狂犬病毒為指示病毒，采用實時定量pcr法檢測病毒的dna拷貝數，檢測3批樣品。結果：病毒dna拷貝數為0。6)dna殘留：依據生物制劑殘留dna檢測方法《中國藥典》2015年版第四部，采用熒光染色法檢測實施例所提供的樣品dna殘留量，結果：實施例所提供的樣品的dna殘留量平均為4.00±0.42ng/mg。7)半乳糖苷酶(α-gal)清除率：取動物源性生物材料gal陽性參考品，gal抗原陰性參考品各2mg，加裂解液1ml，裂解30-90min，配制成20、10、5、2.5、1.25、0.625μg的gal標準曲線樣品，測試免疫原去除前后的測試品各取50mg，加裂解液2ml，裂解30-90min；取裂解液與m86抗體反應后的上清液，加入96孔板，加二抗，加顯色劑，采用elisa方法450nm檢測吸光度值，按標準曲線計算出樣品的gal值，免疫原去除處理前材料的gal值為23.74±2.52×1014/mg，實施例中樣品的gal值為0.11±0.01×1014/mg，半乳糖苷酶(α-gal)清除率在99.52％以上。8)細菌內毒：按照gb/t14233.2-2005《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗方法第2部分：生物學試驗方法》進行檢測，共3批樣品，結果：細菌內毒小于20eu/包裝。9)孔隙率：按照阿基米德原理，以乙醇作為浸提介質，計算樣品孔隙率為84.52±8.24％。10)縫合抗拉強度：按照實施例制備樣品，用3-0非吸收縫合線在修修復材料一端邊緣2mm處，將縫合線與修修復材料的另一端固定在拉力儀上，以20mm/min的速度進行拉伸，直到縫合點被撕裂，記錄最大力值，結果顯示，最大值可達10n。11)抗張強度：按照實施例制備樣品，在相對濕度為40％-60％，溫度為22℃±2℃的條件下放置2h后立即進行試驗。將試樣兩端固定在拉伸試驗機的夾頭上，以100mm/min的速度依次向外拉伸直到試樣斷裂，縱向試樣和橫向試樣分別進行試驗。最后的測定結果顯示縱向抗張強度可達55n/cm。12)環(huán)氧乙烷殘留量：按gb/t14233.1-2008《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗方法第1部分：化學分析法》中9的規(guī)定的方法試驗，結果：產品環(huán)氧乙烷殘留量不超過10μg/包裝。13)重金屬檢查：鉛、鉻按gb/t14233.1-2008中5.9.1《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗方法第1部分：化學分析法》規(guī)定的方法試驗，汞、砷按gb/t14233.1-2008中5.9.3《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗方法第1部分：化學分析法》規(guī)定的方法試驗，產品檢驗液中鉛、鉻、汞、砷總重金屬含量少于1μg/g。對實施例中樣品進行生物相容性實驗，檢測項目包括：熱原、細胞毒性、遲發(fā)型超敏反應、皮內反應、急性全身毒性、ames試驗、小鼠淋巴瘤細胞突變試驗、染色體畸變、植入、亞慢性毒性。1)熱原按質量比1：5浸提介質的比例，37±1℃，72±2hr制備試驗液，浸提介質：生理鹽水。按gb/t14233.2-2005規(guī)定的方法進行，產品無熱原反應。2)細胞毒性按質量比1：5浸提介質的比例，37±1℃，24±2hr制備試驗液，浸提介質：含血清的mem培養(yǎng)基。取試驗液按照gb/t16886.5-2003中規(guī)定的試驗方法進行試驗，結果產品的細胞毒性反應不大于1級。3)遲發(fā)型超敏反應按質量比1：5浸提介質的比例，37±1℃，72±2hr制備試驗液，浸提介質：生理鹽水和棉籽油。按照gb/t16886.10-2005第10部分:刺激與遲發(fā)型超敏反應試驗方法規(guī)定進行試驗，結果產品無遲發(fā)型超敏反應。4)皮內反應按質量比1：5浸提介質的比例，37±1℃，72±2hr制備試驗液，浸提介質：生理鹽水和棉籽油。按照gb/t16886.10-2005第10部分:刺激與遲發(fā)型超敏反應試驗試驗方法規(guī)定進行試驗，結果：試驗樣品與溶劑對照平均記分之差小于1.0。5)急性全身毒性按質量比1：5浸提介質的比例，37±1℃，72±2hr制備試驗液，浸提介質：生理鹽水和棉籽油。取試驗液按照gb/t16886.11-2011規(guī)定的試驗方法進行試驗，結果：產品無急性全身毒性反應。6)ames試驗按質量比1：5浸提介質的比例，37±1℃，72±2hr制備試驗液，浸提介質：生理鹽水和dmso。按gb/t16886.3-2008規(guī)定的方法進行，結果：產品的ames試驗為陰性。7)小鼠淋巴瘤細胞突變試驗按質量比1：5浸提介質的比例，37±1℃，72±2hr制備試驗液，浸提介質：生理鹽水和dmso。按gb/t16886.3-2008規(guī)定的方法進行，結果：產品的小鼠淋巴瘤細胞突變試驗為陰性結果。8)染色體畸變試驗按質量比1：5浸提介質的比例，37±1℃，72±2hr制備試驗液，浸提介質：生理鹽水和dmso，按gb/t16886.3-2008規(guī)定的方法進行，結果：產品的染色體畸變試驗為陰性。9)植入按gb/t16886.6-1997規(guī)定的方法進行，結果：肌肉植入1周：樣品周圍可見嗜中性粒細胞、淋巴細胞和巨噬細胞浸潤，應無囊腔形成；肌肉植入4周：樣品周圍可見少量巨噬細胞和淋巴細胞，膠原纖維和纖維母細胞增生，有纖維囊腔形成；肌肉植入12周：樣品周圍可見少量淋巴細胞、膠原纖維、纖維囊腔較致密規(guī)整。10)亞慢性毒性按gb/t16886.11規(guī)定的方法進行，結果：無亞慢性毒性反應。48只同種屬新西蘭大白兔，雌雄不拘，體重2.5-3kg，隨機分成3組。a試驗組采用實施例1所制中空管形樣品，b對照組自體神經倒置修復，c組為造成神經缺損未修復組。以3％的戊巴比妥鈉1ml/kg耳緣靜脈緩慢注射麻醉兔，無菌壞境下顯露右側坐骨神經，于梨狀肌下緣1cm以遠造成坐骨神經1.5cm缺損模型。各組分籠飼養(yǎng)，術后應用抗生素預防感染。48只兔全部進入結果分析，各組兔術后均出現活動困難，精神萎靡，進食、活動少，行走時術肢拖行。數天后兔飲食逐漸恢復正常。a、b組8周后潰瘍愈合；針刺各組兔術側足部時出現掙扎、逃避反應，表明已有痛覺；c組潰瘍愈合時間較遲，約10-12周時愈合(部分未愈合)，且反應較遲鈍。術后10周，a、b組步態(tài)逐漸恢復正常，肌肉萎縮有所恢復，但c組肌肉恢復不明顯，且反應較遲鈍。各組兔術側脛骨前肌均有不同程度的萎縮，且彈性差、關節(jié)僵直，c組肌肉萎縮最明顯，肌肉光澤與彈性均不及a、b組。各組胚骨前肌濕重分別為2.56±0.16g、2.45±0.18g、1.50±0.11g，肌肉萎縮率分別為20.83％、17.45％、43.40％。a組和b組的濕重恢復率與c組相比，差異有顯著性意義。a組和b組肌肉萎縮較輕，兩組肌肉萎縮程度相當，其脛骨前肌濕重的恢復率差異無顯著性意義。各組兔術側坐骨神經傳導速度a組33.151±1.434m/s、b組34.081±1.116m/s、c組16.028±1.333m/s，c組的神經傳導速度要小于a、b組，差異有顯著性意義(p<0.05)；a組的神經傳導速度與b組相近，差異無顯著性意義(p>0.05)。綜上，本發(fā)明神經修復材料：(1)保留細胞外基質中膠原蛋白纖維的三維空間結構；(2)起到物理隔離作用，為周圍神經再生提供微環(huán)境；(3)力學強度高，可控降解，與神經組織再生周期同步；(4)生物相容性好，促進周圍神經缺損的修復，降低引起感染、炎癥或纖維包裹的風險；(5)dna殘留能夠達到10ng/mg以下，較同類產品低30-50ng/mg、半乳糖苷酶去除率較高，能夠達到99％以上；(6)保留細胞外基質中活性生長因子；(7)添加促進神經損傷恢復的活性因子神經生長因子(ngf)。本發(fā)明的上述實施例是對本發(fā)明的說明而不能用于限制本發(fā)明，與本發(fā)明的權利要求書相當的含義和范圍內的任何改變，都應認為是包括在權利要求書的范圍內。當前第1頁12