背景技術(shù)：

1、胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素(tslp)是一種細胞因子，與多種炎癥性疾病的發(fā)病機制有關。tslp在上皮暴露于過敏原等“冒犯物”時釋放，引發(fā)下游炎癥級聯(lián)反應。tslp受體(tslpr)在多種細胞類型中表達，包括氣道平滑肌細胞(asmc)、嗜堿性粒細胞、樹突狀細胞、嗜酸性粒細胞、第2類先天淋巴細胞(ilc2)、造血祖細胞、淋巴細胞、巨噬細胞、肥大細胞和單核細胞(gauvreau等人,thymic?stromal?lymphopoietin:its?role?and?potential?asa?therapeutic?target?in?asthma[胸腺基質(zhì)淋巴生成素：作為哮喘治療靶點的作用和潛力],expert?opin?ther?targets[治療靶標專家觀點]24(8):777-92(2020))。有令人信服的證據(jù)表明，tslp表達失調(diào)可通過2型炎癥應答的發(fā)展導致過敏性疾病(ziegler等人,thebiology?of?thymic?stromal?lymphopoietin(tslp)[胸腺基質(zhì)淋巴生成素(tslp)的生物學],adv?pharmacol.[藥理學進展]66:129-55(2013))。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、迫切需要用于調(diào)節(jié)(例如，減少或中和)胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素(tslp)結(jié)合和/或活性的治療劑。本披露提供了這樣的試劑。

2、本文提供的披露內(nèi)容部分地基于以下發(fā)現(xiàn)：本文披露的多肽特異性結(jié)合tslp并表現(xiàn)出各種額外的有益特性。因此，本披露總體上涉及用于調(diào)節(jié)(例如，降低或中和)tslp功能和/或活性(例如，體內(nèi))的多肽(例如，抗體)、組合物(例如，藥物組合物)和方法。

3、此外，本文還提供了特異性結(jié)合tslp(例如，全長人tslp)或其變體的多肽(例如，抗體及其抗原結(jié)合片段)。在一些實施例中，本文披露的多肽在螺旋d的ab環(huán)區(qū)域和c末端區(qū)域處結(jié)合tslp。

4、在一些實施例中，多肽調(diào)節(jié)(例如，減少，例如抑制)tslp和tslpr之間的結(jié)合(例如，單獨或與白細胞介素7受體α(il-7rα)形成異二聚體復合物)。在一些實施例中，多肽在體外和/或體內(nèi)調(diào)節(jié)(例如，減少，例如抑制)tslp介導的信號傳導。

5、本披露除其他外提供了特異性結(jié)合tslp的多肽(例如，抗體或其抗原結(jié)合片段)，其中所述多肽具有選自以下的一種或多種特性：

6、對tslp的結(jié)合親和力，其特征在于kd為10pm或更低(例如，如通過kinexa測量的)；

7、對tslp的螺旋d的ab環(huán)區(qū)域和c末端區(qū)域的結(jié)合特異性；

8、針對tslp(例如，全長人tslp)的中和活性；或

9、針對tslp介導的信號傳導的抑制活性，

10、或前述的組合。

11、本披露除其他外還提供了多肽(例如，抗體或其抗原結(jié)合片段)，其包含與包含選自以下的免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(vh)/免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(vl)組合的抗體的互補位基本上相似的互補位：

12、seq?id?no:4和seq?id?no:20(ab-1)；

13、seq?id?no:5和seq?id?no:21(ab-2)；

14、seq?id?no:6和seq?id?no:20(ab-3)；

15、seq?id?no:7和seq?id?no:22(ab-4)；

16、seq?id?no:8和seq?id?no:23(ab-5)；

17、seq?id?no:9和seq?id?no:24(ab-6)；

18、seq?id?no:10和seq?id?no:25(ab-7)；

19、seq?id?no:11和seq?id?no:20(ab-8)；

20、seq?id?no:12和seq?id?no:20(ab-9)；

21、seq?id?no:13和seq?id?no:26(ab-10)；

22、seq?id?no:14和seq?id?no:27(ab-11)；

23、seq?id?no:15和seq?id?no:28(ab-12)；

24、seq?id?no:16和seq?id?no:29(ab-13)；或

25、seq?id?no:17和seq?id?no:30(ab-14)，或

26、前述的組合，

27、其中該多肽不包含含有seq?id?no:81的重鏈和含有seq?id?no:82的輕鏈。

28、在一些實施例中，多肽包含與包含選自以下的vh/vl組合的抗體的互補位基本相似的互補位：

29、seq?id?no:4和seq?id?no:20(ab-1)；

30、seq?id?no:5和seq?id?no:21(ab-2)；

31、seq?id?no:6和seq?id?no:20(ab-3)；或

32、seq?id?no:7和seq?id?no:22(ab-4)，或

33、前述的組合，

34、其中該多肽不包含含有seq?id?no:81的重鏈和含有seq?id?no:82的輕鏈。

35、本披露除其他外還提供了一種多肽(例如，抗體或其抗原結(jié)合片段)，該多肽包含：

36、vh氨基酸序列，其包含分別與seq?id?no:4-17中任一個的氨基酸序列的hcdr1、hcdr2和hcdr3基本相似的重鏈互補決定區(qū)1(hcdr1)、重鏈互補決定區(qū)2(hcdr2)和重鏈互補決定區(qū)3(hcdr3)；以及

37、vl氨基酸序列，其包含分別與seq?id?no:20-30中任一個的氨基酸序列的lcdr1、lcdr2和lcdr3基本相似的輕鏈互補決定區(qū)1(lcdr1)、輕鏈互補決定區(qū)2(lcdr2)和輕鏈互補決定區(qū)3(lcdr3)，

38、其中該多肽不包含含有seq?id?no:81的重鏈和含有seq?id?no:82的輕鏈。

39、在一些實施例中，多肽包含：

40、vh氨基酸序列，其包含分別與seq?id?no:4-7中任一個的氨基酸序列的hcdr1、hcdr2和hcdr3基本相似的hcdr1、hcdr2和hcdr3；以及

41、vl氨基酸序列，其包含分別與seq?id?no:20-22中任一個的氨基酸序列的lcdr1、lcdr2和lcdr3基本相似的lcdr1、lcdr2和lcdr3。

42、在一些實施例中，多肽包含抗體的hcdr1、hcdr2和hcdr3，以及l(fā)cdr1、lcdr2和lcdr3，該抗體包含選自以下的vh/vl組合：

43、seq?id?no:4和seq?id?no:20(ab-1)；

44、seq?id?no:5和seq?id?no:21(ab-2)；

45、seq?id?no:6和seq?id?no:20(ab-3)；

46、seq?id?no:7和seq?id?no:22(ab-4)；

47、seq?id?no:8和seq?id?no:23(ab-5)；

48、seq?id?no:9和seq?id?no:24(ab-6)；

49、seq?id?no:10和seq?id?no:25(ab-7)；

50、seq?id?no:11和seq?id?no:20(ab-8)；

51、seq?id?no:12和seq?id?no:20(ab-9)；

52、seq?id?no:13和seq?id?no:26(ab-10)；

53、seq?id?no:14和seq?id?no:27(ab-11)；

54、seq?id?no:15和seq?id?no:28(ab-12)；

55、seq?id?no:16和seq?id?no:29(ab-13)；或

56、seq?id?no:17和seq?id?no:30(ab-14)。

57、在一些實施例中，多肽進一步包含與包含選自以下的vh/vl組合的抗體的互補位具有100％序列同一性的互補位：

58、seq?id?no:4和seq?id?no:20(ab-1)；

59、seq?id?no:5和seq?id?no:21(ab-2)；

60、seq?id?no:6和seq?id?no:20(ab-3)；

61、seq?id?no:7和seq?id?no:22(ab-4)；

62、seq?id?no:8和seq?id?no:23(ab-5)；

63、seq?id?no:9和seq?id?no:24(ab-6)；

64、seq?id?no:10和seq?id?no:25(ab-7)；

65、seq?id?no:11和seq?id?no:20(ab-8)；

66、seq?id?no:12和seq?id?no:20(ab-9)；

67、seq?id?no:13和seq?id?no:26(ab-10)；

68、seq?id?no:14和seq?id?no:27(ab-11)；

69、seq?id?no:15和seq?id?no:28(ab-12)；

70、seq?id?no:16和seq?id?no:29(ab-13)；或

71、seq?id?no:17和seq?id?no:30(ab-14)。

72、在一些實施例中，多肽包含抗體的hcdr1、hcdr2和hcdr3，以及l(fā)cdr1、lcdr2和lcdr3，該抗體包含選自以下的vh/vl組合：

73、seq?id?no:4和seq?id?no:20(ab-1)；

74、seq?id?no:5和seq?id?no:21(ab-2)；

75、seq?id?no:6和seq?id?no:20(ab-3)；或

76、seq?id?no:7和seq?id?no:22(ab-4)。

77、在一些實施例中，多肽包含與包含選自以下的vh/vl組合的抗體的互補位具有100％序列同一性的互補位：

78、seq?id?no:4和seq?id?no:20(ab-1)；

79、seq?id?no:5和seq?id?no:21(ab-2)；

80、seq?id?no:6和seq?id?no:20(ab-3)；或

81、seq?id?no:7和seq?id?no:22(ab-4)。

82、本披露除其他外還提供了一種多肽(例如，抗體或其抗原結(jié)合片段)，該多肽包含含有seq?id?no:2的vh，其中：

83、x1不是i；

84、x2不是w；

85、x3不是d；

86、x4不是s；

87、x5不是n；

88、x6不是k；

89、x7不是a；

90、x8不是a；

91、x9不是l；

92、x10不是v；

93、x11不是h，

94、x12不是a；

95、x13不是f；

96、x14不是i，

97、或前述的任何組合。

98、在一些實施例中，多肽包含含有seq?id?no:18的vl，其中：

99、x15不是n；

100、x16不是l；

101、x17不是s；

102、x18不是k；

103、x19不是s；

104、x20不是v；

105、x21不是w；

106、x22不是d；

107、x23不是s；

108、x24不是s；

109、x25不是s；

110、x26不是d；

111、x27不是h，

112、或前述的任何組合。

113、此外，本披露還提供了一種多肽(例如，抗體或其抗原結(jié)合片段)，該多肽包含與seq?id?no:3具有至少70％序列同一性的vh序列，與seq?id?no:19具有至少70％序列同一性的vl序列，或兩者，其中該vh序列不包含seq?id?no:3，該vl序列不包含seq?id?no:19，或兩者。

114、本披露除其他外還提供了一種多肽，該多肽包含：

115、a)包含seq?id?no:31的氨基酸序列的hcdr?1，包含seq?id?no:35的氨基酸序列的hcdr2，以及包含seq?id?no:50的氨基酸序列的hcdr3；以及

116、b)包含seq?id?no:60的氨基酸序列的lcdr?1，包含seq?id?no:67的氨基酸序列的lcdr2，以及包含seq?id?no:71的氨基酸序列的lcdr3，

117、其中該多肽是抗體或其抗原結(jié)合片段。

118、本披露除其他外還提供了一種多肽，該多肽包含：

119、a)由seq?id?no:31的氨基酸序列組成的hcdr?1、由seq?id?no:35的氨基酸序列組成的hcdr2、以及由seq?id?no:50的氨基酸序列組成的hcdr3；以及

120、b)由seq?id?no:60的氨基酸序列組成的lcdr?1、由seq?id?no:67的氨基酸序列組成的lcdr2、以及由seq?id?no:71的氨基酸序列組成的lcdr3，

121、其中該多肽是抗體或其抗原結(jié)合片段。

122、在一些實施例中，多肽包含：

123、a)vh，其是人源化的，包含人框架區(qū)，或其組合；

124、b)vl，其是人源化的，包含人框架區(qū)，或其組合，或

125、a)和b)兩者。

126、在一些實施例中，多肽包含：

127、a)vh，其包含seq?id?no:5的氨基酸序列；

128、b)vl，其包含seq?id?no:21的氨基酸序列，或

129、a)和b)兩者。

130、在一些實施例中，抗原結(jié)合片段包含單鏈可變片段(scfv)、重鏈可變重結(jié)構(gòu)域(vhh)、抗原結(jié)合片段(fab)、fab'或f(ab’)2。

131、在一些實施例中，多肽包含：

132、a)抗體重鏈恒定結(jié)構(gòu)域；

133、b)抗體輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域，

134、或a)和b)兩者。

135、在一些實施例中，抗體重鏈恒定結(jié)構(gòu)域是igg1、igg2、igg3或igg4恒定結(jié)構(gòu)域。

136、在一些實施例中，抗體重鏈恒定結(jié)構(gòu)域是igg1或igg2恒定結(jié)構(gòu)域。

137、在一些實施例中，抗體重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含增加抗體或其抗原結(jié)合片段在人中的血清半衰期的一個或多個突變。在一些實施例中，相對于野生型人igg恒定結(jié)構(gòu)域，抗體重鏈恒定結(jié)構(gòu)域分別在氨基酸殘基252、254和256處包含用酪氨酸、蘇氨酸和谷氨酸進行的氨基酸取代，其中這些氨基酸殘基根據(jù)kabat中的eu索引進行編號。

138、在一些實施例中，多肽包含：

139、a)包含seq?id?no:92的氨基酸序列的抗體重鏈(hc)；

140、b)包含seq?id?no:120的氨基酸序列的抗體輕鏈(lc)，或

141、a)和b)兩者。

142、在一些實施例中，多肽包含：

143、a)包含seq?id?no:106的氨基酸序列的抗體重鏈(hc)；

144、b)包含seq?id?no:120的氨基酸序列的抗體輕鏈(lc)，或

145、a)和b)兩者。

146、在一些實施例中，多肽特異性結(jié)合tslp。

147、在一些實施例中，多肽是融合蛋白。

148、在一些實施例中，本披露提供了編碼本文披露的多肽的多核苷酸、包含此類多核苷酸的載體和/或包含此類多核苷酸和/或載體的宿主細胞。

149、在一些實施例中，本披露提供了包含本文披露的多肽的組合物(例如，藥物組合物)。在一些實施例中，組合物進一步包含一種或多種藥物賦形劑、稀釋劑或載劑。在一些實施例中，組合物進一步包含一種或多種另外的治療劑(例如，抗炎劑)。在一些實施例中，多肽與一種或多種另外的治療劑(例如，抗炎劑)綴合(直接或通過接頭)。在一些實施例中，一種或多種另外的治療劑包括皮質(zhì)類固醇、β-激動劑、毒蕈堿拮抗劑、抗炎劑、il-4和/或il-13拮抗劑(例如，靶向il-13、il-4或il-4r的抗體或其抗原結(jié)合片段)或其組合。

150、本披露還提供了治療有需要的受試者(例如，患有tslp相關疾病或病癥的受試者)的方法，該方法包括向受試者施用有效量的本文披露的多肽和/或包含一種或多種本文披露的多肽的組合物(例如，藥物組合物)。

151、本披露還提供了調(diào)節(jié)(例如，減少)細胞(例如，受試者中的細胞)中tslp介導的信號傳導的方法，該方法包括將細胞與本文披露的多肽和/或包含一種或多種本文披露的多肽的組合物(例如，藥物組合物)接觸。

152、在一些實施例中，受試者患有哮喘、特應性皮炎(ad)、過敏性結(jié)膜炎、慢性阻塞性肺病(copd)、慢性自發(fā)性蕁麻疹(csu)、類風濕性關節(jié)炎(ra)、鼻竇炎(rs)、嗜酸性粒細胞性食管炎(ee)、或食物過敏反應。在一些實施例中，受試者患有中度哮喘。在一些實施例中，受試者患有嚴重哮喘。在一些實施例中，受試者患有copd。在一些實施例中，受試者患有copd和/或中度哮喘或重度哮喘。

153、本披露除其他外還提供了一種減少tslp與受試者細胞上的tslp受體(tslpr)結(jié)合的方法，該方法包括使細胞與有效量的包含本文披露的一種或多種多肽的組合物(例如，藥物組合物)接觸。

154、本披露除其他外還提供了制備本文披露的多肽的方法，該方法包括在該多肽在宿主細胞中表達的條件下培養(yǎng)包含編碼該多肽的核苷酸序列的宿主細胞。

155、本披露除其他外還提供了計算機實施的方法等，該方法包括用計算結(jié)合優(yōu)化(cbo)模型對包含氨基酸序列的多肽進行評分。對于多肽的氨基酸序列的每個氨基酸位置，cbo模型計算多個能量得分，多個能量得分基于用多個不同氨基酸中的每一個取代氨基酸序列中給定位置的氨基酸。cbo模型進一步將計算的每個能量得分添加到陣列中。cbo模型進一步生成每個位置的能量得分的歸一化總和。cbo模型進一步計算所計算的每個能量得分的對數(shù)。cbo模型進一步通過將計算的每個能量得分的對數(shù)求和來生成多肽的得分，該得分代表多肽的功能特性。

156、本披露除其他外還提供了一種系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括處理器和其上存儲有計算機代碼指令的存儲器。具有計算機代碼指令的處理器和存儲器被配置為使得系統(tǒng)利用cbo模型對多肽序列進行評分。對于多肽的氨基酸序列的每個氨基酸位置，cbo模型計算多個能量得分，多個能量得分基于用多個不同氨基酸中的每一個取代氨基酸序列中給定位置的氨基酸。cbo模型進一步將計算的每個能量得分添加到陣列中。cbo模型進一步生成每個位置的能量得分的歸一化總和。cbo模型進一步計算所計算的每個能量得分的對數(shù)。cbo模型進一步通過將計算的每個能量得分的對數(shù)求和來生成多肽的得分，該得分代表多肽的功能特性。

157、本披露除其他外還提供了特異性結(jié)合胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素(tslp)的多肽，并且包含氨基酸序列，在對多肽的氨基酸序列評分后，通過計算結(jié)合優(yōu)化(cbo)模型給該氨基酸序列賦予高于預定閾值的得分。

158、本披露還提供了多肽，該多肽結(jié)合人胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素(tslp)，并且通過包括用cbo模型生成多肽序列的方法來設計。在一些實施例中，通過使用cbo模型驗證生成的多肽序列，通過對于多肽序列的每個氨基酸位置計算多個能量得分來進一步設計多肽。能量得分可以基于用多個不同氨基酸中的每一個取代多肽序列中給定位置處的氨基酸。在一些實施例中，通過將計算的每個能量得分添加至陣列來進一步驗證多肽。在一些實施例中，通過生成每個位置的能量得分的歸一化總和來進一步驗證多肽。在一些實施例中，通過計算所計算的每個能量得分的對數(shù)來進一步驗證多肽。在一些實施例中，通過將計算的每個能量得分的對數(shù)求和來生成多肽序列的得分來進一步驗證多肽。該得分代表多肽結(jié)合人tslp的能力的功能特性。在一些實施例中，如果多肽得分高于特定閾值，則驗證多肽序列。