本技術(shù)涉及生物領(lǐng)域，更具體的涉及一種益生菌的制備方法及其在應(yīng)用于清除口腔中幽門螺桿菌中的用途。

背景技術(shù)：

1、幽門螺桿菌(helicobacterpylori，h.pylori)是一種單極、多鞭毛、螺旋形彎曲的革蘭陰性細(xì)菌，大小為(0.3-1.0)μm×(2.0-5.0)μm。幽門螺桿菌在胃黏膜上皮細(xì)胞表面常呈典型的螺旋狀或弧形，在不利環(huán)境下可變成桿狀或球形。幽門螺桿菌為微需氧菌，對(duì)環(huán)境氧的要求為5％～8％。人類是幽門螺桿菌的主要宿主，幽門螺桿菌也是目前所知唯一的一種能從人的胃中分離培養(yǎng)出來的微生物。要防治幽門螺桿菌，了解其傳播過程是必不可少的。

2、研究表明口腔幽門螺桿菌在幽門螺桿菌傳播的過程中起到重要的作用。流行病學(xué)調(diào)查顯示，在擁擠的生活條件下人群有更高的幽門螺桿菌感染率，說明幽門螺桿菌很可能是直接從一個(gè)個(gè)體傳播到另一個(gè)個(gè)體的。口-口途徑和糞-口途徑被認(rèn)為是最有可能的幽門螺桿菌傳播途徑。除了對(duì)幽門螺桿菌的直接檢測外，對(duì)唾液中幽門螺桿菌抗原和抗體檢測亦可能對(duì)胃病的診斷提供依據(jù)。研究表明對(duì)不同類型胃病的口腔幽門螺桿菌進(jìn)行了抗原檢測，發(fā)現(xiàn)口腔幽門螺桿菌存在與否與胃炎活動(dòng)程度及部分胃黏膜癌前病變有關(guān)。慢性活動(dòng)性胃炎或伴中重度腸化或不典型增生患者口腔幽門螺桿菌抗原檢出率明顯增高。因此，有效清除口腔中的幽門螺桿菌也是徹底治療幽門螺桿菌感染的必備步驟。

3、幽門螺桿菌的治療最常規(guī)的是三聯(lián)療法即質(zhì)子泵抑制劑加兩種抗生素，是目前最常用和最有效的根除幽門螺桿菌的治療方法，但治療后疾病復(fù)發(fā)概率較高。這可能是治療后幽門螺桿菌仍存在于口腔，隨唾液吞入胃內(nèi)而引起的。研究發(fā)現(xiàn)，上消化道疾病患者經(jīng)抗幽門螺桿菌治療后，幽門螺桿菌雖在胃內(nèi)已被根除，但卻仍然存在于口腔中。這可能與口腔幽門螺桿菌存在于具有獨(dú)特的生物膜結(jié)構(gòu)菌斑中難以與藥物作用有關(guān)。

4、既然口腔幽門螺桿菌是胃幽門螺桿菌感染復(fù)發(fā)或再感染的潛在來源，有學(xué)者提出使用藥物聯(lián)合牙周基礎(chǔ)治療來降低胃幽門螺桿菌感染的復(fù)發(fā)率。經(jīng)過牙周基礎(chǔ)治療和使用漱口水的患者的胃幽門螺桿菌根除率顯著高于未做牙周基礎(chǔ)治療及未使用漱口水的患者。這提示藥物治療幽門螺桿菌的根除率與患者的牙周狀況和口腔衛(wèi)生狀況有關(guān)。研究結(jié)果顯示，牙周炎患者的牙齦液及牙周袋滲出物中確實(shí)有hp感染，且hp感染陽性率與炎癥程度和活動(dòng)性呈正相關(guān)，表明hp感染與牙周炎有直接關(guān)系；對(duì)hp陽性的144例牙周炎患者追問病史，結(jié)果表明有hp感染的牙周炎同胃、十二指腸的hp感染有著密切關(guān)系。大多數(shù)研究表明，口腔是hp的長期聚集地，且與胃內(nèi)hp有一定相關(guān)性,兩者具有同源性，口腔hp可能是胃內(nèi)hp感染的重要儲(chǔ)存庫?？谇籬p可能起到傳播作用，特別是其在牙菌斑中可持續(xù)存在。通過對(duì)hp與牙周炎組和對(duì)照組的相關(guān)性研究，證實(shí)hp與牙周炎有顯著的相關(guān)性，目hp感染的陽性率與炎癥的程度和活動(dòng)性呈正相關(guān)，對(duì)hp在口腔及消化道多處寄居的忽視是成為消化道疾病及牙周炎反復(fù)發(fā)作的原因。由此可見，在根除胃內(nèi)hp感染的同時(shí)，還應(yīng)考慮口腔內(nèi)hp感染的可能，有必要加強(qiáng)口腔衛(wèi)生的宣教，同時(shí)積極治療口腔疾病，抑制牙菌斑的形成，從而大大降低hp的高發(fā)率及再感染率。

5、因此，開發(fā)出能夠用于清除口腔中幽門螺桿菌的藥物是目前研究的重要方向，有利于根治胃部中幽門螺桿菌的感染。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供了一種用于清除口腔中幽門螺桿菌的益生菌組合物。

2、具體的，所述的益生菌組合物是嗜酸乳桿菌cgmcc?no.23546和植物乳桿菌gdmccno：62256按照2:1的同濃度體積比配置的。

3、具體的，所述的嗜酸乳桿菌la05保藏編號(hào)為cgmcc?no.23546菌懸液的制備：將嗜酸乳桿菌la05接種于改良的mrs液體培養(yǎng)基中，38℃下培養(yǎng)進(jìn)行活化，連續(xù)活化2次，得到活化液；將活化液按2％(v/v)的接種量接種于mrs液體培養(yǎng)基中，38℃下培養(yǎng)，菌液濃度為108cfu即停止發(fā)酵。所述的植物乳桿菌保藏編號(hào)為gdmcc?no：62256菌懸液的制備：將植物乳桿菌lp1z從甘油管中接種至改良mrs富銳瓊脂平板上，于37℃厭氧培養(yǎng)48h，挑取植物乳桿菌lp1z單菌落接入改良mrs培養(yǎng)基中，于37℃厭氧培養(yǎng)，菌液濃度為108cfu即停止發(fā)酵。將嗜酸乳桿菌la05發(fā)酵液和植物乳桿菌lp1z發(fā)酵液按照優(yōu)化的2:1的體積比進(jìn)行混合后，冷凍干燥，即得到含有益生菌的藥物組合物。

4、更具體的，本發(fā)明還提供了一種抗幽門螺桿菌多肽hp-si-125。

5、更具體的，本發(fā)明還提供了抗幽門螺桿菌多肽hp-si-125在制備用于治療抗幽門螺桿菌的藥物中的用途。

6、進(jìn)一步的，本發(fā)明還提供了抗幽門螺桿菌多肽hp-si-125和益生菌組合物在制備用于治療抗幽門螺桿菌的藥盒中的用途；所述的益生菌組合物是嗜酸乳桿菌cgmccno.23546和植物乳桿菌gdmcc?no：62256在同樣菌濃條件下按照2:1的體積比配置的。

7、更進(jìn)一步的，本發(fā)明還提供了一種治療口腔幽門螺桿菌的漱口水。

8、具體的，其特征在于所述漱口水由以下重量份數(shù)的組分組成：水90-110份，山梨醇2-15份，丙二醇1-8份，木糖醇1-8份，peg-400聚乙二醇1-5份，甘草酸二甲0.5-2份，苯甲酸鈉1-5份，香精0.1-1份，hp-si-125多肽0.5-5份；益生菌組合物凍干粉1-5份；其中，所述的hp-si-125多肽的氨基酸序列如seq?id?no：8所示；益生菌組合物凍干粉是嗜酸乳桿菌cgmcc?no.23546和植物乳桿菌gdmcc?no：62256在同樣菌濃條件下按照2:1的體積比配置后凍干制備的。

9、更具體的，所述漱口水由以下重量份數(shù)的組分組成：水90份，山梨醇10份，丙二醇5份，木糖醇5份，peg-400聚乙二醇5份，甘草酸二甲1份，苯甲酸鈉3份，香精1份，hp-si-125多肽1份；益生菌組合物凍干粉3份。

10、具體的，本發(fā)明的藥物或者藥盒含有藥學(xué)上可接受的載體。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”或“藥學(xué)上可接受的賦形劑”包括任何和所有溶劑，分散介質(zhì)，涂層，抗菌劑和抗真菌劑，等滲劑和吸收延遲劑等。這種介質(zhì)和試劑用于藥物活性物質(zhì)的用途在本領(lǐng)域中是眾所周知的。除了任何常規(guī)的介質(zhì)或試劑與活性成分不相容之外，本發(fā)明還涉及其在本文所公開的治療組合物中的用途。補(bǔ)充活性成分也可以被摻入到藥物組合物中。

11、另一方面，本發(fā)明還涉及一種或多種所公開的多肽在制備抗幽門螺桿菌藥物中的用途。在一些實(shí)施方案中，使用合適的遞送方法，單獨(dú)或與任何其它所需治療劑聯(lián)合給予多肽。所公開的治療有用的藥劑可以通過例如以下途徑之一給藥：口服，例如以糖衣，包衣片劑，丸劑，半固體物質(zhì)，軟膠囊或硬膠囊，溶液，乳劑或懸浮液的形式；胃腸外，例如，以可注射溶液的形式；直腸栓劑形式；通過吸入，例如，以粉末制劑或噴霧劑的形式；和/或經(jīng)皮或鼻內(nèi)。用于制備這種片劑，丸劑，半固體物質(zhì)，包衣片劑，錠劑和硬明膠膠囊，該可治療產(chǎn)品可與藥理學(xué)惰性，無機(jī)或有機(jī)藥物載體物質(zhì)混合，例如與乳糖，蔗糖，葡萄糖，明膠，麥芽，硅膠，淀粉或其衍生物，滑石，硬脂酸或其鹽，脫脂奶粉等混合。為了制備軟膠囊，可以使用藥物載體物質(zhì)，例如植物油，石油，動(dòng)物油或合成油，蠟，脂肪和多元醇。為了制備液體溶液和糖漿，可以使用藥物載體物質(zhì)，例如水，醇，鹽水水溶液，右旋糖水溶液，多元醇，甘油，植物油，石油和動(dòng)物或合成油。對(duì)于栓劑，可以使用藥物載體物質(zhì)，例如植物油，石油，動(dòng)物油或合成油，蠟，脂肪和多元醇。對(duì)于氣溶膠制劑，可以使用適于此目的的壓縮氣體，例如氧，氮和二氧化碳。藥學(xué)上可接受的試劑還可以包括用于保存和穩(wěn)定的添加劑，乳化劑，甜味劑，香料環(huán)，用于改變滲透壓的鹽，緩沖劑，包封添加劑和/或抗氧化劑。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，在考慮了本發(fā)明的公開內(nèi)容后，許多構(gòu)造和變化將是顯而易見的。

12、適合的藥學(xué)上可接受的防腐劑的實(shí)例包括但不限于苯扎氯銨、芐索氯銨和氯化十六烷基吡啶、溴化芐、芐醇、edta二鈉、硝酸苯汞、乙酸苯汞、乙基汞硫代水楊酸鈉、硫柳汞、乙酸鹽和硼酸苯汞、硫酸多粘菌素b、氯己定、對(duì)羥基苯甲酸甲酯和對(duì)羥基苯甲酸丙酯、苯乙醇、氯化季銨鹽、苯甲酸鈉、丙酸鈉、穩(wěn)定的氯氧復(fù)合物、山梨酸或它們的混合物。優(yōu)選的藥學(xué)上可接受的防腐劑包括edta二鈉(乙二胺四乙酸二鈉)和苯扎氯銨或它們的混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的防腐劑的存在量為約0.01％至約2.0％(重量/體積)，優(yōu)選約0.05％至約1％(重量/體積)。

13、適合的藥學(xué)上可接受的緩沖劑的實(shí)例包括但不限于氯化鈉、葡萄糖、乳糖和磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)或者它們的任意組合。其他適合的藥學(xué)上可接受的緩沖劑包括但不限于琥珀酸二鈉六水合物、硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、生理鹽水、tris-hcl(三(羥甲基)氨基甲烷鹽酸鹽)、hepes(n-2-羥乙基哌嗪-n'-2-乙磺酸(n-2-hydroxyethyl?piperazine-n1-2-ethane?sulfonic?acid))、磷酸鈉、硼酸鈉、生理鹽水、檸檬酸鹽、碳酸鹽、磷酸鹽和/或它們的混合物，以獲得期望的同滲容摩(osmolarity)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的緩沖劑的存在量為約0.01％至約2.0％(重量/體積)，優(yōu)選約0.05％至約1％(重量/體積)。

14、適合的藥學(xué)上可接受的螯合劑的實(shí)例包括但不限于乙二胺四乙酸(edta)、edta二鈉及其衍生物、檸檬酸及其衍生物、煙酰胺及其衍生物、脫氧膽酸鈉及其衍生物、或這些螯合劑的混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的螯合劑的存在量為約0.01％至約2.0％(重量/體積)，優(yōu)選約0.05％至約1％(重量/體積)。

15、在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的潤濕劑或表面活性劑的存在量為約0.01％至約5.0％(重量/體積)，優(yōu)選約0.05％至約2.0％(重量/體積)，更優(yōu)選約0.1％至約1.0％(重量/體積)，例如約0.1％、0.2％、0.5％、1.0％(重量/體積)。

16、適合的藥學(xué)上可接受的等滲調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括但不限于d-甘露醇、葡萄糖、甘油、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣和氯化鎂或它們的任意組合。也可以使用各種硝酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽或它們的混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的等滲調(diào)節(jié)劑的存在量為約0.1％至約5.0％(重量/體積)，優(yōu)選約1％至約3％(重量/體積)。