本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及一種丹參酮iia磺酸鈉有關(guān)物質(zhì)及其精制方法。

背景技術(shù)：

1、丹參是唇形科鼠尾草屬多年生草本植物，含有多種活性成分，丹參酮ⅱa是丹參中最豐富、結(jié)構(gòu)最具有代表性的脂溶性成分；藥理實(shí)驗(yàn)表明，丹參酮ⅱa具有廣泛的藥理作用，如天然抗氧化作用、心血管藥理作用、抗感染作用、抗腫瘤作用、對(duì)神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用、對(duì)肝、腎、肺的保護(hù)作用，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、鎮(zhèn)痛、抗衰老等作用。由于丹參酮ⅱa水溶性差，腸道吸收緩慢，故有人將其磺化成水溶性鈉鹽-丹參酮ⅱa磺酸鈉供臨床與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)用。

2、丹參酮ⅱa磺酸鈉能夠減輕動(dòng)脈粥樣硬化、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠狀動(dòng)脈血流量、改善心肌缺氧；同時(shí)還可抑制血小板凝集、降低血脂，因此它是一種治療冠心病、心絞痛、心肌梗死的重要心血管藥物。

3、隨著近年來我國(guó)對(duì)藥品注冊(cè)要求的提高，高純度的丹參酮iia磺酸鈉的制備以及對(duì)相關(guān)物質(zhì)進(jìn)行質(zhì)量研究顯得尤為重要，因此獲得這些極低含量相關(guān)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，以及這些標(biāo)準(zhǔn)品在丹參酮ⅱa磺酸鈉有關(guān)物質(zhì)含量控制中標(biāo)準(zhǔn)的建立具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)中未公開丹參酮iia磺酸鈉中含有的影響丹參酮iia磺酸鈉質(zhì)量的物質(zhì)的種類、且未有該物質(zhì)的精制純化方法而導(dǎo)致其結(jié)構(gòu)無法確定，缺乏對(duì)照品從而不能對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行定性分析的缺陷，而提供了一種丹參酮iia磺酸鈉有關(guān)物質(zhì)及其精制方法。該方法簡(jiǎn)單便捷，且得到的如式ii所示的化合物可作為對(duì)照品用于丹參酮iia磺酸鈉生產(chǎn)中式ii所示的化合物的定量及定性分析，進(jìn)一步提高丹參酮iia磺酸鈉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2、本發(fā)明提供了一種如式ii所示化合物，

3、。

4、本發(fā)明提還供了一種上述如式ii所示化合物的精制方法，其包括以下步驟：

5、采用制備色譜法對(duì)制備丹參酮iia磺酸鈉的廢液進(jìn)行精制，得到如式ii所示的化合物，其中：

6、所述制備丹參酮iia磺酸鈉的廢液包括如式ii所示的化合物；

7、所述制備色譜法中：

8、所述色譜柱為c18反相制備柱；

9、所述流動(dòng)相為流動(dòng)相a和流動(dòng)相b的混合物，所述流動(dòng)相a為體積百分比為0.05%~0.1%的三乙胺水溶液，所述流動(dòng)相b為三乙胺的體積百分比為0.05%~0.1%的三乙胺和甲醇的混合液；

10、所述制備色譜法的洗脫方法為四段式梯度洗脫，所述四段式梯度洗脫條件為：（其中%表示體積百分比）

11、

12、其中，t1為1-5；t2為5-25；t3為5-25；t4為30-50；

13、x1為100-90；x2為90-85；x3為85-80；x4為25-20；

14、其中，所述的t表示各階段的持續(xù)時(shí)間；

15、所述精制方法中，所述的制備色譜法中，收集保留時(shí)間為15-30min的洗脫液。

16、某一方案中，所述的保留時(shí)間可為15-18min、25-30min或15-20min；例如25-30min。

17、較佳地，所述的制備丹參酮iia磺酸鈉的廢液中包含：純度為34%~40%（例如37.1%）的丹參酮iib磺酸鈉衍生物、純度為18.0%~24.0%（例如21.0%）的如式ii所示的化合物、純度為3.0%~5.0%（例如4.1%）的丹參酮i磺酸鈉、純度為5.0%~7.0%（例如6.3%）的紫丹參甲素磺酸鈉和純度為5.0%~7.0%（例如6.2%）的丹參酮iia磺酸鈉中的一種或多種。

18、所述的丹參酮iib磺酸鈉衍生物為

19、更佳地，所述的制備丹參酮iia磺酸鈉的廢液中包含以下物質(zhì)的一種或多種：

20、

21、

22、

23、其中，上述表格中，各個(gè)物質(zhì)的保留時(shí)間為將所述的制備丹參酮iia磺酸鈉廢液在以下條件下測(cè)試得到的：

24、使用島津lc-2030c?plus高效液相進(jìn)行純度檢測(cè)分析，色譜條件：采用zorbax?sb-c18色譜柱（4.6×150?mm，5-micton），流動(dòng)相a：20?mm?kh2po4+0.5%三乙胺?(ph?4.0)-甲醇(60:40)，流動(dòng)相b：20?mm?kh2po4+0.5%三乙胺?(ph?4.0)-甲醇?(20:80)；梯度洗脫程序：流速1.0?ml/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)271?nm，進(jìn)樣量10?μl。

25、所述的制備丹參酮iia磺酸鈉的廢液可通過以下方法得到，其包含以下步驟：

26、s1：將丹參酮iia、乙酸酐和有機(jī)溶劑的混合液作為進(jìn)料液a，將硫酸和乙酸的混合液作為進(jìn)料液b，將所述進(jìn)料液a和所述進(jìn)料液b加入第一微反應(yīng)器中，進(jìn)行連續(xù)磺化反應(yīng)，得到反應(yīng)液d；

27、s2：將所述反應(yīng)液d和鈉鹽水溶液加入第二微反應(yīng)器中，進(jìn)行連續(xù)成鹽反應(yīng)，得到反應(yīng)液e；

28、s3：將所述反應(yīng)液e過濾，取濾液；

29、s1中，所述第一微反應(yīng)器的保留體積為40~60ml（例如50ml）；所述進(jìn)料液a泵入所述第一微反應(yīng)器的流速為8~10ml/min（例如9ml/min）；所述進(jìn)料液b泵入所述第一微反應(yīng)器的流速為0.5~1.5ml/min（例如1ml/min）；所述連續(xù)磺化反應(yīng)的停留時(shí)間為2~8min（例如5min）；所述進(jìn)料液a中丹參酮iia和乙酸酐的摩爾比為1：（6~10），例如1:8；所述丹參酮iia和所述硫酸的反應(yīng)摩爾比為1：（4~8），例如1:6；所述連續(xù)磺化反應(yīng)的溫度為20~30℃（例如25℃）；所述進(jìn)料液a和b同時(shí)由第一泵和第二泵泵入所述第一微反應(yīng)器中，混合并進(jìn)行所述連續(xù)磺化反應(yīng)；所述第一泵的材質(zhì)為哈氏合金、不銹鋼、peek和改性聚四氟乙烯中的一種或多種；所述第二泵的材質(zhì)為peek和/或改性聚四氟乙烯；

30、s2中，所述第二微反應(yīng)器的保留體積為5~15ml（例如10ml）；所述鈉鹽水溶液泵入所述第二微反應(yīng)器的流速為5~15ml/min（例如10ml/min）；所述連續(xù)成鹽反應(yīng)的溫度為20~30℃（例如25℃）；所述鈉鹽水溶液由第三泵泵入所述第二微反應(yīng)器中，與所述反應(yīng)液d進(jìn)行連續(xù)成鹽反應(yīng)；所述第三泵的材質(zhì)為哈氏合金、不銹鋼、peek和改性聚四氟乙烯中的一種或多種。

31、s1中，所述有機(jī)溶劑為本領(lǐng)域常規(guī)的能同時(shí)溶解丹參酮iia和乙酸酐的有機(jī)溶劑，例如二氯甲烷；

32、s1中，所述進(jìn)料液b中硫酸和乙酸的摩爾比為本領(lǐng)域此類反應(yīng)常規(guī)摩爾比，例如1：（3~5），例如1:3.9。

33、s1中，所述硫酸為濃硫酸，例如濃度為15~20?mol/l的濃硫酸水溶液，所述乙酸的濃度為15~20?mol/l，例如17.5?mol/l。

34、s1中，所述的第一泵優(yōu)選為平流泵。

35、s1中，所述的第一泵的材質(zhì)優(yōu)選為改性聚四氟乙烯。

36、s1中，所述的第二泵優(yōu)選為平流泵。

37、s1中，所述的第二泵的材質(zhì)優(yōu)選為改性聚四氟乙烯。

38、s2中，所述鈉鹽水溶液中的鈉鹽為本領(lǐng)域常規(guī)，優(yōu)選為無機(jī)酸鈉鹽和/或有機(jī)酸鈉鹽；更優(yōu)選為無機(jī)酸鈉鹽；例如氯化鈉。

39、s2中，所述鈉鹽水溶液的濃度優(yōu)選大于0.7mol/l，例如將鈉鹽配制成飽和水溶液的濃度。

40、s2中，所述連續(xù)成鹽反應(yīng)的停留時(shí)間為本領(lǐng)域常規(guī)的參數(shù)，較佳地為0.3-1.2min，例如0.5min。

41、s2中，所述第三泵優(yōu)選為平流泵；所述第三泵的材質(zhì)優(yōu)選為改性聚四氟乙烯。

42、較佳地，s3中，將所述的濾液分液后，取水相調(diào)節(jié)ph至5~6，所述調(diào)節(jié)ph優(yōu)選使用堿金屬的碳酸鹽、堿金屬的碳酸氫鹽或堿金屬的氫氧化物，例如碳酸鈉，進(jìn)一步例如飽和碳酸鈉水溶液；較佳地，所述的調(diào)節(jié)ph時(shí)，水相的溫度可為0~20℃，優(yōu)選為0~5?℃。

43、所述精制方法中，所述的色譜柱較佳地為動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱。

44、所述精制方法中，所述色譜柱的填料可為c18超耐水填料，較佳地為c18?aq超耐水填料，更佳地為unisil?10-100?c18?aq超耐水填料，例如購于蘇州納微生物科技有限公司的unisil?10-100?c18?aq超耐水填料。

45、所述精制方法中，所述色譜柱的填料的孔徑可為8~12nm，例如10nm。

46、所述精制方法中，所述色譜柱的填料的粒徑可為90~110μm，例如100μm。

47、所述制備方法中，所述色譜柱的長(zhǎng)度可為580~620mm，例如600mm。

48、所述制備方法中，所述色譜柱的直徑可為45~55mm，例如50mm。

49、本發(fā)明某一較佳實(shí)施例中，所述的色譜柱的長(zhǎng)度為600mm，所述的色譜柱的直徑為50mm，所述的色譜柱的填料為unisil?10-100?c18?aq超耐水填料，所述填料的孔徑為10nm，所述填料的粒徑為100μm。

50、所述精制方法中，所述制備色譜法采用的系統(tǒng)可為lc-20ap高壓液相制備系統(tǒng)。

51、所述精制方法中，所述制備色譜法中的色譜柱為動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，其設(shè)備型號(hào)為das50*600，序列號(hào)為sf2310101。

52、所述精制方法中，所述色譜柱的使用壓力較佳地為0~10mpa，例如5mpa。

53、所述精制方法中，所述色譜柱的柱溫較佳地為5~60℃，例如25℃。

54、所述精制方法中，所述流動(dòng)相a可為體積百分比為0.1%的三乙胺水溶液或體積百分比為0.05%的三乙胺水溶液，例如體積百分比為0.1%的三乙胺水溶液。

55、所述精制方法中，所述流動(dòng)相b可為體積百分比為0.1%的三乙胺和甲醇的混合液或體積百分比為0.05%的三乙胺和甲醇的混合液，例如體積百分比為0.1%的三乙胺和甲醇的混合液。

56、所述精制方法中，所述流動(dòng)相為流動(dòng)相a和流動(dòng)相b的混合物，所述流動(dòng)相a為體積百分比為0.1%的三乙胺水溶液，所述流動(dòng)相b為體積百分比為0.1%的三乙胺和甲醇的混合液；

57、或者，所述流動(dòng)相a為體積百分比為0.05%的三乙胺水溶液，所述流動(dòng)相b為體積百分比為0.05%的三乙胺和甲醇的混合液。

58、所述精制方法中，所述流動(dòng)相的流速可為90~110ml/min或40~60ml/min。

59、所述的精制方法中，所述流動(dòng)相的流速可為100ml/min或50?ml/min。

60、所述精制方法中，所述制備色譜法的檢測(cè)方法可為紫外檢測(cè)（檢測(cè)器可為島津lc-20ap）；所述制備色譜法的檢測(cè)波長(zhǎng)可為271nm。

61、所述精制方法中，所述制備色譜法中，進(jìn)樣量較佳地為300~600ml，例如400ml。

62、所述精制方法中，所述的制備色譜法中，優(yōu)選采用如下梯度洗脫條件；

63、所述的梯度洗脫為四段式梯度洗脫時(shí)，在第一階段中，所述的流動(dòng)相a的體積百分比為90%，所述的流動(dòng)相b的體積百分比為10%；

64、和/或，在第二階段中，所述的流動(dòng)相a的體積百分比為85%，所述的流動(dòng)相b的體積百分比為15%；

65、和/或，在第三階段中，所述的流動(dòng)相a的體積百分比為80%，所述的流動(dòng)相b的體積百分比為20%；

66、和/或，在第四階段中，所述的流動(dòng)相a的體積百分比為20%，所述的流動(dòng)相b的體積百分比為80%；

67、和/或，當(dāng)所述的梯度洗脫為四段式梯度洗脫時(shí)，在第一階段中，所述的洗脫時(shí)長(zhǎng)較佳地為3min或5min，例如3min；

68、和/或，在第二階段中，洗脫時(shí)長(zhǎng)較佳地為10min或20min，例如10min；

69、和/或，在第三階段中，洗脫時(shí)長(zhǎng)較佳地為10min或20min，例如10min；

70、和/或，在第四階段中，洗脫時(shí)長(zhǎng)較佳地為37min或45min，例如10min；

71、較佳地，所述的精制方法中，所述的制備色譜法中，所述的流速為90~110ml/min，例如100ml/min；

72、在第一階段中，洗脫時(shí)長(zhǎng)為2~4min；

73、在第二階段中，洗脫時(shí)長(zhǎng)為8~12min；

74、在第三階段中，洗脫時(shí)長(zhǎng)為8~12min；

75、在第四階段中，洗脫時(shí)長(zhǎng)為35~40min。

76、較佳地，所述的精制方法中，所述的制備色譜法中，所述的流速為40~60ml/min，例如50ml/min；

77、在第一階段中，洗脫時(shí)長(zhǎng)為4~6min；

78、在第二階段中，洗脫時(shí)長(zhǎng)為18~22min；

79、在第三階段中，洗脫時(shí)長(zhǎng)為18~22min；

80、在第四階段中，洗脫時(shí)長(zhǎng)為40~50min。

81、所述精制方法中，所述的制備色譜法中，進(jìn)一步優(yōu)選采用如下四段式梯度洗脫條件：

82、條件1：

83、

84、；或者，

85、條件2：

86、。

87、較佳地，所述精制方法中，所述的制備色譜法中，當(dāng)所述梯度洗脫的條件為所述條件1，所述的流動(dòng)相a為體積百分比為0.1%的三乙胺水溶液，流動(dòng)相b為體積百分比為0.1%的三乙胺和甲醇的混合液時(shí)，收集保留時(shí)間為15-20min（例如15-18min）的洗脫液，較佳地，進(jìn)樣量為340~460ml（例如400ml）。

88、較佳地，所述精制方法中，所述的制備色譜法中，當(dāng)所述梯度洗脫的條件為所述條件2，流動(dòng)相a為體積百分比為0.1%的三乙胺水溶液，流動(dòng)相b為體積百分比為0.1%的三乙胺和甲醇的混合液時(shí)，收集保留時(shí)間為20-30min（例如25-30min）的洗脫液，較佳地，進(jìn)樣量為340~460ml（例如400ml）。

89、較佳地，所述的精制方法中，所述的制備色譜法中，當(dāng)所述梯度洗脫的條件為所述的條件1時(shí)，流動(dòng)相a為體積百分比為0.05%的三乙胺水溶液，流動(dòng)相b為體積百分比為0.05%的三乙胺和甲醇的混合液時(shí)，收集保留時(shí)間為15-25min（例如15-20min）的洗脫液，較佳地，進(jìn)樣量為340~460ml（例如400ml）。

90、所述精制方法中，所述精制方法還可包括：將采用上述制備色譜法，獲得的洗脫液進(jìn)行第二次洗脫；

91、優(yōu)選地，所述第二次洗脫的色譜條件中，濃縮去除有機(jī)相后，將所述洗脫液a稀釋1-2（例如1倍）倍后，采用所述制備色譜，將流速調(diào)整到50ml/min，進(jìn)行第二次洗脫。

92、所述第二次洗脫完成后還可包括濃縮和/或干燥；所述的濃縮優(yōu)選為減壓濃縮。

93、所述干燥的操作可為本領(lǐng)域常規(guī)，例如凍干，所述凍干為通過冷凍干燥機(jī)干燥；所述凍干步驟為，-40℃預(yù)凍4小時(shí)，按1℃/8分鐘升溫至30℃，保溫36小時(shí)，得到紅色固體。

94、在符合本領(lǐng)域常識(shí)的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合。即得本發(fā)明較佳實(shí)例。

95、本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。

96、本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于：本發(fā)明通過反相制備丹參酮iia磺酸鈉有關(guān)物質(zhì)（如式ii所示的化合物）。該精制方法簡(jiǎn)單便捷，得到的雜質(zhì)對(duì)照品純度可達(dá)98%以上。將其應(yīng)用于丹參酮iia磺酸鈉生產(chǎn)中進(jìn)行該化合物的定量及定性分析，可進(jìn)一步提高丹參酮iia磺酸鈉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。