本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物材料，具體涉及一種可注射型ptxir780@mps/r848水凝膠及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、目前，腫瘤仍然是威脅人類生命健康的疾病之一，手術(shù)切除是治療惡性實(shí)體腫瘤的首選方法。然而，手術(shù)切除后腫瘤往往面臨著復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)：手術(shù)切除不完全殘留的腫瘤組織與創(chuàng)傷性切除口愈合導(dǎo)致的生理環(huán)境促進(jìn)著腫瘤的復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移性爆發(fā)生長(zhǎng)，導(dǎo)致患者長(zhǎng)期生存率低。因此手術(shù)后需要配合術(shù)后治療。傳統(tǒng)的腫瘤術(shù)后治療以全身化療為主，這種治療方式面臨著諸多困難例如全身毒副作用、生物利用度低等。新興的光熱療法是一種非侵入性、時(shí)空可控性并能誘發(fā)icd效應(yīng)激活適應(yīng)性免疫的抗腫瘤療法，但常常因療效需多次給藥光照。

2、預(yù)防術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)與遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的重點(diǎn)便是對(duì)術(shù)后殘余腫瘤組織的消除和調(diào)控抗腫瘤免疫抑制微環(huán)境。以天然有機(jī)高分子材料構(gòu)建的水凝膠載體擁有著高生物相容性和潮濕性，負(fù)載具有消除和調(diào)控腫瘤免疫的藥物，填充于腫瘤切除的傷口部位能提供傷口愈合的理想環(huán)境并實(shí)現(xiàn)藥物局部的長(zhǎng)效緩釋。

3、r848又名雷西莫特，能夠激活toll樣受體7和toll樣受體8。紫杉醇是一種天然抗癌藥物，在臨床上已經(jīng)廣泛用于治療乳腺癌、宮頸癌和肺癌等，其作用機(jī)制是調(diào)控微管蛋白并抑制細(xì)胞有絲分裂觸發(fā)細(xì)胞凋亡。而據(jù)相關(guān)研究報(bào)道紫杉醇能夠模擬toll樣受體激動(dòng)劑脂多糖的作用，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的成熟和dc細(xì)胞表達(dá)主要組織相容性復(fù)合體ii類激活免疫效應(yīng)。

4、殼聚糖是一種天然堿性多糖，分子鏈上含有大量的氨基和羥基。因其生物相容性、可降解性、抑菌抗菌性等作為遞送載體而廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)產(chǎn)業(yè)（例如以殼聚糖或改性殼聚糖為載體制備的膠束、水凝膠、微球等）。酸性條件下，殼聚糖分子上的氨基發(fā)生質(zhì)子化能溶于水。酸性環(huán)境下殼聚糖分子和β-甘油磷酸鈉分子發(fā)生質(zhì)子交換生成復(fù)合物。室溫下，β-gp上的甘油基團(tuán)增強(qiáng)了復(fù)合物的水化作用；減弱了分子之間的氫鍵作用；復(fù)合物的靜電斥力趨于穩(wěn)定，整個(gè)系統(tǒng)在中性條件下能夠保持良好的流動(dòng)性。隨著溫度的升高，水分子劇烈運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致復(fù)合物上的水分子被移除，分子間氫鍵作用、靜電斥力和疏水性增強(qiáng)，整個(gè)體系從溶膠狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楣虘B(tài)凝膠狀態(tài)。從而實(shí)現(xiàn)凝膠的可注射性能。以可注射殼聚糖水凝膠為載體負(fù)載抗腫瘤藥物，以微創(chuàng)注射的方式遞送藥物到患病部位，持續(xù)緩釋釋放藥物增強(qiáng)藥物生物利用度，降低毒副作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明目的在于提供一種預(yù)防腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的可注射型載多藥水凝膠。

2、本發(fā)明另一目的是提供上述可注射型載多藥水凝膠的制備方法。通過化療、光熱療法及免疫療法的結(jié)合，協(xié)同作用清除手術(shù)切除的殘余腫瘤組織；改善機(jī)體抗腫瘤免疫抑制微環(huán)境，激起抗腫瘤免疫效應(yīng)，有效預(yù)防了手術(shù)切除后腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。

3、本發(fā)明目的通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

4、一種可注射型載多藥水凝膠，其特征在于：可注射型載多藥水凝膠為ptx/ir780@mps/r848水凝膠，是以殼聚糖和β-甘油磷酸鈉合成的可注射水凝膠為載體，負(fù)載雙藥復(fù)合微球和免疫激動(dòng)劑r848，所述雙藥復(fù)合微球是由紫杉醇（ptx）和光熱劑ir780負(fù)載于聚乳酸-羥基乙酸共聚物（plga）形成的ptx/ir780@mps。

5、上述可注射型載多藥水凝膠的制備方法，其特征在于，按如下步驟進(jìn)行：

6、步驟1：制備待用組分

7、分別制備殼聚糖溶液、β-gp溶液、pva溶液和r848鹽酸鹽；

8、步驟2：制備ptx/ir780@mps

9、將plga（聚乳酸-羥基乙酸共聚物）、ptx、ir780混合，加入三氯甲烷超聲充分溶解，再加入步驟1制備的pva溶液，冰水浴下攪拌至有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，離心干燥得ptx/ir780@mps粉末；

10、步驟3：制備ptx/ir780@mps/r848水凝膠

11、將ptx/ir780@mps粉末和r848鹽酸鹽粉末加入步驟1制備的殼聚糖溶液攪拌2?h后，逐滴加入步驟1制備的β-gp溶液，繼續(xù)攪使各組分充分混合溶解，即得可流動(dòng)的溶膠狀態(tài)的ptx/ir780@mps/r848水凝膠。

12、進(jìn)一步，所述步驟1中制備殼聚糖溶液是稱取脫乙酰度90~95%的殼聚糖，加入冰醋酸溶液形成殼聚糖溶液；所述殼聚糖和冰醋酸溶液的質(zhì)量體積比為0.12~0.15g:6ml。

13、所述冰醋酸溶液的濃度為0.1~0.3mmol/l，是由質(zhì)量濃度為0.9%的生理鹽水溶解制得。

14、進(jìn)一步，所述步驟1中制備β-gp溶液是取β-甘油磷酸鈉，加入質(zhì)量濃度為0.9%生理鹽水中，超聲溶解至溶液澄清透明；所述β-甘油磷酸鈉和生理鹽水的質(zhì)量體積比為0.56~0.6g:5ml。

15、進(jìn)一步，所述步驟1中制備pva溶液是取pva粉末，加入質(zhì)量濃度為0.9%生理鹽水中，置于50~60℃的水浴鍋中，磁力攪拌至溶液澄清透明；所述pva粉末和生理鹽水的質(zhì)量體積比為0.5~0.6g:100ml。

16、進(jìn)一步，所述步驟1中制備r848鹽酸鹽是取r848，加入鹽酸溶液，超聲溶解至溶液澄清透明，冷凍干燥得到r848鹽酸鹽粉末。

17、所述r848和鹽酸溶液的質(zhì)量體積比為80mg:1ml，鹽酸溶液的濃度為1mol/ml。

18、進(jìn)一步，所述步驟2中plga、ptx、ir780、三氯甲烷和pva溶液的質(zhì)量體積比為50~55mg:5mg:0.75mg:1~1.5ml:100ml。

19、進(jìn)一步，所述步驟2中攪拌是在冰水浴下高剪切分散乳化機(jī)以6000~8000?rpm攪拌5~10min，然后轉(zhuǎn)移至磁力攪拌器上避光攪拌過夜至有機(jī)溶劑完全揮發(fā)。

20、進(jìn)一步，所述步驟3中制備ptx/ir780@mps/r848水凝膠是將ptx/ir780@mps粉末和r848鹽酸鹽粉末加入聚糖溶液中，在室溫下磁力攪拌2?h后，逐滴加入β-gp溶液繼續(xù)攪拌30min使各組分充分混合溶解，得溶膠狀態(tài)ptx/ir780@mps/r848水凝膠。

21、進(jìn)一步，所述步驟3中ptx/ir780@mps粉末、r848鹽酸鹽粉末、聚糖溶液和β-gp溶液的質(zhì)量體積比為4~5mg:5mg:6ml:1ml。

22、最具體地，一種可注射型ptx/ir780@mps/r848水凝膠的制備方法，其特征在于，按如下步驟進(jìn)行：

23、步驟1：制備待用組分

24、（1）制備殼聚糖溶液：稱取脫乙酰度90~95%的殼聚糖，加入冰醋酸溶液；所述殼聚糖和冰醋酸溶液的質(zhì)量體積比為0.12~0.15g:6ml；所述冰醋酸溶液的濃度為0.1~0.3mmol/l，是由質(zhì)量濃度為0.9%的生理鹽水溶解制得；

25、（2）制備β-gp溶液：取β-甘油磷酸鈉，加入質(zhì)量濃度為0.9%生理鹽水中，超聲溶解至溶液澄清透明；所述β-甘油磷酸鈉和生理鹽水的質(zhì)量體積比為0.56~0.6g:5ml；

26、（3）制備pva溶液：取pva粉末，加入質(zhì)量濃度為0.9%生理鹽水中，置于50~60℃的水浴鍋中，磁力攪拌至溶液澄清透明；所述pva粉末和生理鹽水的質(zhì)量體積比為0.5~0.6g:100ml；

27、（4）制備r848鹽酸鹽

28、取r848，加入鹽酸溶液，超聲溶解至溶液澄清透明，冷凍干燥得到r848鹽酸鹽粉末，所述r848和鹽酸溶液的質(zhì)量體積比為80mg:1ml，鹽酸溶液的濃度為1mol/ml；

29、步驟2：制備ptx/ir780@mps

30、將plga（聚乳酸-羥基乙酸共聚物）、ptx、ir780混合，加入三氯甲烷超聲充分溶解，再加入步驟1制備的pva溶液，在冰水浴下高剪切分散乳化機(jī)以7000?rpm攪拌5min，然后轉(zhuǎn)移至磁力攪拌器上避光攪拌過夜至有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，離心干燥得ptx/ir780@mps粉末，plga、ptx、ir780、三氯甲烷和pva溶液的質(zhì)量體積比為50~55mg:5mg:0.75mg:1~1.5ml:100ml；

31、步驟3：制備ptx/ir780@mps/r848水凝膠

32、將ptx/ir780@mps粉末和r848鹽酸鹽粉末加入聚糖溶液中，在室溫下磁力攪拌2小時(shí)后，逐滴加入β-gp溶液繼續(xù)攪拌30分鐘使各組分充分混合溶解，得溶膠狀態(tài)ptx/ir780@mps/r848水凝膠，ptx/ir780@mps粉末、r848鹽酸鹽粉末、聚糖溶液和β-gp溶液的質(zhì)量體積比為4~5mg:5mg:6ml:1ml。

33、免疫激動(dòng)劑r848是一種咪唑喹啉類小分子化合物，通過tlr7/8信號(hào)通路活化免疫細(xì)胞，抑制遠(yuǎn)端腫瘤生長(zhǎng)，并刺激免疫記憶以抵抗再次接種的腫瘤，可以顯著抑制術(shù)后腫瘤的向遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的危害。但是，當(dāng)將r848負(fù)載于水凝膠中，進(jìn)行靶向注射后，發(fā)現(xiàn)r848由于水凝膠載體的限制，形成緩釋后，導(dǎo)致其對(duì)于靶點(diǎn)的作用效果不明顯，對(duì)于遠(yuǎn)端腫瘤的抑制效果更弱。

34、光熱劑ir780碘化物是一種近紅外親脂性陽離子熒光染料，具有良好的熒光強(qiáng)度，可作為光熱療法藥物。本發(fā)明中的殼聚糖水凝膠中，以天然有機(jī)高分子材料構(gòu)建的水凝膠載體擁有著高生物相容性和可相變性，填充于腫瘤切除的傷口部位能提供傷口愈合的理想環(huán)境并實(shí)現(xiàn)藥物局部的長(zhǎng)效緩釋。ir780除了發(fā)揮自身在近紅外光輻射下產(chǎn)生光熱治療作用抑制腫瘤生長(zhǎng)以外，其通過光熱轉(zhuǎn)化后，使得殼聚糖水凝膠載藥體系的溫度上升，有效調(diào)整了水凝膠中的ptx和r848的釋放速率，減少載體對(duì)其效用的抑制，此外，通過將ir780和ptx優(yōu)先制備成微球，在治療過程中，ir780和ptx的釋放，協(xié)同作用產(chǎn)生較強(qiáng)的ade效應(yīng)，刺激靶點(diǎn)免疫增強(qiáng)，通過調(diào)節(jié)r848的釋放速率以及靶點(diǎn)位置的ade效應(yīng)的協(xié)同作用，增強(qiáng)了r848對(duì)于腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)與遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的抑制作用。通過化療、光熱治療聯(lián)合免疫治療不僅能消除術(shù)后殘余腫瘤組織，還能激活適應(yīng)性免疫達(dá)到持久的抗腫瘤效應(yīng)來預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移。

35、本發(fā)明具有如下技術(shù)效果：

36、本發(fā)明制備的ptx/ir780@mps/r848水凝膠中，ptx/ir780微球和r848鹽酸鹽分散在水凝膠孔隙中，具有優(yōu)異的載藥能力，具備高度變形能力適應(yīng)注射部位的空間結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)藥物滯留，同時(shí)實(shí)現(xiàn)了對(duì)藥物的長(zhǎng)效緩釋，通過三種藥物的復(fù)合協(xié)同作用，實(shí)現(xiàn)化療、光熱療法及免疫療法的結(jié)合，對(duì)術(shù)后殘余腫瘤組織進(jìn)行殺傷破壞，激活長(zhǎng)效免疫記憶持續(xù)抗腫瘤，提供了一種新的術(shù)后腫瘤治療模式。