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噴霧干燥的提取物的制作方法

文檔序號(hào):41873398發(fā)布日期:2025-05-09 18:47閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.生產(chǎn)用于無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的穩(wěn)定的噴霧干燥的細(xì)菌提取物的方法,所述方法包括:

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中所述包含裂解的細(xì)菌組分的細(xì)菌提取物是液體細(xì)菌提取物或再水合的細(xì)菌提取物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法,其中所述組合物包含海藻糖或乳糖。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述混合物包含約25至200g/kg海藻糖。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其中所述混合物包含約50至100g/kg海藻糖。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法,其中所述海藻糖是海藻糖二水合物(tdh)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中所述混合物包含約25至200g/kg乳糖。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其中所述混合物包含約50至100g/kg乳糖。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法,其中所述乳糖是乳糖單水合物(lmh)。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中所述混合物包含約5至10g/l的亮氨酸。

11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中所述混合物包含約25至200g/l棉子糖。

12.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述穩(wěn)定的噴霧干燥的細(xì)菌提取物包含約40至70g/l的所述細(xì)菌提取物固體。

13.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述穩(wěn)定的噴霧干燥的細(xì)菌提取物包含約50至60g/l的所述細(xì)菌提取物固體。

14.根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的方法,其中在步驟(i)中,所述細(xì)菌提取物還與一種或多種高玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(tg)非極性的不帶電氨基酸組合。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法,其中所述一種或多種高tg非極性的不帶電氨基酸選自纈氨酸、色氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸及其任何組合。

16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法,其中所述一種或多種高tg非極性的不帶電氨基酸選自l-纈氨酸、l-色氨酸、l-異亮氨酸、l-亮氨酸、l-丙氨酸、甘氨酸、l-脯氨酸及其任何組合。

17.根據(jù)權(quán)利要求14至16中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述混合物包含5至15g/kg的所述高tg非極性的不帶電氨基酸。

18.根據(jù)權(quán)利要求1至17中任一項(xiàng)所述的方法,其中在步驟(i)中,所述細(xì)菌提取物還與選自亮氨酸、甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、精氨酸及其任何組合的一種或多種氨基酸組合。

19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法,其中所述混合物包含約5至15g/kg的所述一種或多種氨基酸。

20.根據(jù)權(quán)利要求1至17中任一項(xiàng)所述的方法,其中在步驟(i)中,所述混合物還包含麥芽糊精、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、聚乙二醇200、聚山梨醇酯80(80)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp或kollidon12pf)或2-羥基丙基-β-環(huán)糊精。

21.根據(jù)權(quán)利要求1至20中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述噴霧干燥的細(xì)菌提取物包含小于或等于約15%(w/w)的殘留水。

22.根據(jù)權(quán)利要求1至20中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述噴霧干燥的細(xì)菌提取物包含小于或等于約10%(w/w)的殘留水。

23.根據(jù)權(quán)利要求1至20中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述噴霧干燥的細(xì)菌提取物包含小于或等于約5%(w/w)的殘留水。

24.根據(jù)權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)所述的方法,其中在2℃至8℃下儲(chǔ)存至少6個(gè)月后,所述噴霧干燥的細(xì)菌提取物能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

25.根據(jù)權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)所述的方法,其中在2℃至8℃下儲(chǔ)存至少12個(gè)月后,所述噴霧干燥的細(xì)菌提取物能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

26.根據(jù)權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)所述的方法,其中在2℃至8℃下儲(chǔ)存至少18個(gè)月后,所述噴霧干燥的細(xì)菌提取物能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

27.根據(jù)權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)所述的方法,其中在約-20℃下儲(chǔ)存至少6個(gè)月后,所述噴霧干燥的細(xì)菌提取物能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

28.根據(jù)權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)所述的方法,其中在約-20℃下儲(chǔ)存至少12個(gè)月后,所述噴霧干燥的細(xì)菌提取物能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

29.根據(jù)權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)所述的方法,其中在約-20℃下儲(chǔ)存至少18個(gè)月后,所述噴霧干燥的細(xì)菌提取物能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

30.根據(jù)權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)所述的方法,其中在約室溫(20℃)下儲(chǔ)存至少6個(gè)月后,所述噴霧干燥的細(xì)菌提取物能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

31.根據(jù)權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)所述的方法,其中在約室溫(20℃)下儲(chǔ)存至少12個(gè)月后,所述噴霧干燥的細(xì)菌提取物能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

32.根據(jù)權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)所述的方法,其中在約室溫(20℃)下儲(chǔ)存至少18個(gè)月后,所述噴霧干燥的細(xì)菌提取物能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

33.根據(jù)權(quán)利要求24至32中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述滴度通過(guò)方法測(cè)定。

34.根據(jù)權(quán)利要求24至33中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述對(duì)照提取物不包含海藻糖、乳糖、亮氨酸和棉子糖。

35.根據(jù)權(quán)利要求24至33中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述對(duì)照提取物包含海藻糖、乳糖、亮氨酸或棉子糖。

36.根據(jù)權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述噴霧干燥的提取物和所述對(duì)照提取物包含海藻糖,并且所述噴霧干燥的提取物在2℃至8℃下儲(chǔ)存至少12個(gè)月,并在重組之后能夠合成相對(duì)于在時(shí)間零時(shí)重組的所述對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

37.根據(jù)權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)所述的方法,其中當(dāng)將所述噴霧干燥的提取物在2℃至8℃下儲(chǔ)存然后再水合時(shí),所述噴霧干燥的提取物的蛋白質(zhì)合成活性與對(duì)照提取物相比每月降低小于約5%。

38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的方法,其中所述對(duì)照提取物不包含海藻糖、乳糖、亮氨酸和棉子糖。

39.根據(jù)權(quán)利要求37所述的方法,其中所述對(duì)照提取物包含海藻糖、乳糖、亮氨酸或棉子糖。

40.根據(jù)權(quán)利要求1至38中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述噴霧干燥的細(xì)菌提取物在無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成中包含活性氧化磷酸化系統(tǒng)。

41.根據(jù)權(quán)利要求1至40中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述細(xì)菌提取物來(lái)自埃希氏菌屬物種。

42.根據(jù)權(quán)利要求1至41中任一項(xiàng)所述的方法,其中在步驟(i)之前,將所述細(xì)菌提取物在約20℃至45℃下加熱約30分鐘至約10小時(shí)。

43.根據(jù)權(quán)利要求1至41中任一項(xiàng)所述的方法,其中步驟(ii)中的所述噴霧干燥包括:

44.根據(jù)權(quán)利要求43所述的方法,其中從所述混合物中除去大于或等于90%(w/w)的所述液體。

45.根據(jù)權(quán)利要求43所述的方法,其中從所述混合物中除去大于或等于95%(w/w)的所述液體。

46.根據(jù)權(quán)利要求1至45中任一項(xiàng)所述的方法,還包括:(iii)將所述噴霧干燥的細(xì)菌提取物再水合;以及(iv)在支持無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成反應(yīng)的條件下合成所述目標(biāo)蛋白。

47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法,其中所述再水合的細(xì)菌提取物占所述無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成反應(yīng)的約20%至60%(按體積計(jì))。

48.根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法,其中所述再水合的細(xì)菌提取物占所述無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成反應(yīng)的約30%至40%(按體積計(jì))。

49.用于無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的噴霧干燥的細(xì)菌提取物,其包含:

50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的噴霧干燥的提取物,其中所述組合物包含海藻糖或乳糖。

51.根據(jù)權(quán)利要求49所述的噴霧干燥的提取物,其中所述組合物包含約25至200g/kg的海藻糖。

52.根據(jù)權(quán)利要求49所述的噴霧干燥的提取物,其中所述組合物包含約50至100g/kg的海藻糖。

53.根據(jù)權(quán)利要求51或52所述的噴霧干燥的提取物,其中所述海藻糖是海藻糖二水合物(tdh)。

54.根據(jù)權(quán)利要求49所述的噴霧干燥的提取物,其中所述組合物包含約25至200g/kg的乳糖。

55.根據(jù)權(quán)利要求54所述的噴霧干燥的提取物,其中所述組合物包含約50至100g/kg的乳糖。

56.根據(jù)權(quán)利要求54或55所述的噴霧干燥的提取物,其中所述乳糖是乳糖單水合物(lmh)。

57.根據(jù)權(quán)利要求49所述的噴霧干燥的提取物,其中所述組合物包含約5至10g/l的亮氨酸。

58.根據(jù)權(quán)利要求49所述的噴霧干燥的提取物,其中所述組合物包含約25至200g/l棉子糖。

59.根據(jù)權(quán)利要求49至58中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述提取物還包含一種或多種高玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(tg)非極性的不帶電氨基酸。

60.根據(jù)權(quán)利要求59所述的噴霧干燥的提取物,其中所述一種或多種高tg非極性的不帶電氨基酸選自纈氨酸、色氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸及其任何組合。

61.根據(jù)權(quán)利要求59所述的噴霧干燥的提取物,其中所述一種或多種高tg非極性的不帶電氨基酸選自l-纈氨酸、l-色氨酸、l-異亮氨酸、l-亮氨酸、l-丙氨酸、甘氨酸、l-脯氨酸及其任何組合。

62.根據(jù)權(quán)利要求59至61中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述提取物包含5至15g/kg的氨基酸。

63.根據(jù)權(quán)利要求49至62中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述提取物還包含選自亮氨酸、甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸和精氨酸中的一種或多種氨基酸、全部氨基酸的組合或氨基酸的子集。

64.根據(jù)權(quán)利要求63所述的噴霧干燥的提取物,其中所述提取物包含約5至15g/l的所述氨基酸。

65.根據(jù)權(quán)利要求49至64中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述提取物還包含麥芽糊精、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、聚乙二醇200、聚山梨醇酯80(80)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp或kollidon?12pf)或2-羥基丙基-β-環(huán)糊精。

66.根據(jù)權(quán)利要求49至65中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述噴霧干燥的提取物包含小于或等于約15%(w/w)的殘留水。

67.根據(jù)權(quán)利要求49至65中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述噴霧干燥的提取物包含小于或等于約10%(w/w)的殘留水。

68.根據(jù)權(quán)利要求49至65中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述噴霧干燥的提取物包含小于或等于約5%(w/w)的殘留水。

69.根據(jù)權(quán)利要求49至68中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述噴霧干燥的提取物在2℃至8℃下儲(chǔ)存至少6個(gè)月,并且能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

70.根據(jù)權(quán)利要求69所述的噴霧干燥的提取物,其中所述噴霧干燥的提取物在2℃至8℃下儲(chǔ)存至少12個(gè)月,并且能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

71.根據(jù)權(quán)利要求69所述的噴霧干燥的提取物,其中所述噴霧干燥的提取物在2℃至8℃下儲(chǔ)存至少18個(gè)月,并且能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

72.根據(jù)權(quán)利要求49至68中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述噴霧干燥的提取物在約-20℃下儲(chǔ)存至少6個(gè)月,并且能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

73.根據(jù)權(quán)利要求72所述的噴霧干燥的提取物,其中所述噴霧干燥的提取物在約-20℃下儲(chǔ)存至少12個(gè)月,并且能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

74.根據(jù)權(quán)利要求72所述的噴霧干燥的提取物,其中所述噴霧干燥的提取物在約-20℃下儲(chǔ)存至少18個(gè)月,并且能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

75.根據(jù)權(quán)利要求49至68中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述噴霧干燥的提取物在約室溫(20℃)下儲(chǔ)存至少6個(gè)月,并且能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

76.根據(jù)權(quán)利要求75所述的噴霧干燥的提取物,其中所述噴霧干燥的提取物在約室溫(20℃)下儲(chǔ)存至少12個(gè)月,并且能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

77.根據(jù)權(quán)利要求75或76所述的噴霧干燥的提取物,其中所述噴霧干燥的提取物在約室溫(20℃)下儲(chǔ)存至少18個(gè)月,并且能夠合成相對(duì)于對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

78.根據(jù)權(quán)利要求69至74中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述滴度通過(guò)方法測(cè)定。

79.根據(jù)權(quán)利要求69至78中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述對(duì)照提取物不包含海藻糖、乳糖、亮氨酸和棉子糖。

80.根據(jù)權(quán)利要求69至78中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述對(duì)照提取物包含海藻糖、乳糖、亮氨酸或棉子糖。

81.根據(jù)權(quán)利要求69至74中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述噴霧干燥的提取物和所述對(duì)照提取物包含海藻糖,并且所述噴霧干燥的提取物在2℃至8℃下儲(chǔ)存至少12個(gè)月,并在再水合之后能夠合成相對(duì)于在時(shí)間(t)=零時(shí)再水合的所述對(duì)照提取物具有至少80%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

82.根據(jù)權(quán)利要求49至68中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中當(dāng)在再水合之前將所述提取物在2℃至8℃下儲(chǔ)存時(shí),所述再水合的噴霧干燥的提取物的蛋白質(zhì)合成活性每月降低小于約5%。

83.根據(jù)權(quán)利要求49至68中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中當(dāng)在再水合之前將所述提取物在2℃至8℃下儲(chǔ)存大于或等于8個(gè)月時(shí),所述再水合的噴霧干燥的提取物的蛋白質(zhì)合成活性大于或等于再水合的對(duì)照噴霧干燥的提取物的蛋白質(zhì)合成活性。

84.根據(jù)權(quán)利要求83所述的噴霧干燥的提取物,其中在再水合之前將所述噴霧干燥的提取物在2℃至8℃下儲(chǔ)存13個(gè)月。

85.根據(jù)權(quán)利要求83或84所述的噴霧干燥的提取物,其中所述對(duì)照噴霧干燥的提取物不包含海藻糖。

86.根據(jù)權(quán)利要求49至68中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述噴霧干燥的提取物包含海藻糖或乳糖,在2℃至8℃下儲(chǔ)存至少4個(gè)月,并且能夠合成相對(duì)于在-20℃下儲(chǔ)存的不包含海藻糖和乳糖的對(duì)照提取物具有至少75%的滴度的所述目標(biāo)蛋白。

87.根據(jù)權(quán)利要求84所述的噴霧干燥的提取物,其中所述噴霧干燥的提取物包含約75g/kg至105g/kg海藻糖或約100g/kg乳糖。

88.根據(jù)權(quán)利要求49至68中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中與在t=0時(shí)的再水合的提取物的蛋白質(zhì)合成活性相比,在再水合之前將提取物在2℃至8℃下儲(chǔ)存至少18個(gè)月的再水合的提取物具有大于或等于80%的初始蛋白質(zhì)合成活性。

89.根據(jù)權(quán)利要求49至88中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述噴霧干燥的細(xì)菌提取物在無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成中具有活性氧化磷酸化系統(tǒng)。

90.根據(jù)權(quán)利要求49至89中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述提取物來(lái)自埃希氏菌屬物種。

91.根據(jù)權(quán)利要求49至90中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述提取物是粉末。

92.根據(jù)權(quán)利要求49至90中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述提取物不具有塊狀外觀或者不是干燥的塊狀物。

93.制備噴霧干燥的提取物的方法,所述方法包括以下步驟:

94.根據(jù)權(quán)利要求93所述的方法,其中在步驟(i)之前,將所述液體細(xì)菌提取物無(wú)菌過(guò)濾。

95.根據(jù)權(quán)利要求94所述的方法,其中所述無(wú)菌過(guò)濾的液體細(xì)菌提取物通過(guò)加熱被活化。

96.根據(jù)權(quán)利要求95所述的方法,其中在步驟(ii)之前,將包含海藻糖、乳糖、亮氨酸或棉子糖的組合物添加至所述活化的無(wú)菌過(guò)濾的液體細(xì)菌提取物。

97.根據(jù)權(quán)利要求96所述的方法,其中所述組合物包含約25至200g/kg海藻糖、約25至200g/kg乳糖、約5至10g/l亮氨酸或約25至200g/l棉子糖。

98.根據(jù)權(quán)利要求95至97中任一項(xiàng)所述的方法,其中步驟(i)還包括將一種或多種氨基酸添加至所述活化的無(wú)菌過(guò)濾的液體細(xì)菌提取物。

99.根據(jù)權(quán)利要求98所述的方法,其中所述一種或多種氨基酸包括高玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(tg)非極性的不帶電氨基酸,所述高玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(tg)非極性的不帶電氨基酸選自l-纈氨酸、l-色氨酸、l-異亮氨酸、l-亮氨酸、l-丙氨酸、甘氨酸、l-脯氨酸及其任何組合。

100.根據(jù)權(quán)利要求98所述的方法,其中所述一種或多種氨基酸選自亮氨酸、甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸和精氨酸。

101.根據(jù)權(quán)利要求95至100中任一項(xiàng)所述的方法,其中將麥芽糊精、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、聚乙二醇200、聚山梨醇酯80(80)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp或kollidon12pf)、2-羥基丙基-β-環(huán)糊精或其任何組合中的一種或多種添加至所述活化的無(wú)菌過(guò)濾的液體細(xì)菌提取物。

102.根據(jù)權(quán)利要求93至101中任一項(xiàng)所述的方法,其中步驟(ii)包括將所述液體細(xì)菌提取物霧化以產(chǎn)生所述液滴。

103.根據(jù)權(quán)利要求102所述的方法,其中所述霧化包括使所述液體細(xì)菌提取物通過(guò)選自噴嘴或旋轉(zhuǎn)霧化器的霧化裝置。

104.根據(jù)權(quán)利要求102或103所述的方法,其中所述中值液滴大小(dv50)在10至50psig的霧化氣體壓力下為約20至100微米。

105.根據(jù)權(quán)利要求93至104中任一項(xiàng)所述的方法,其中步驟(iii)包括使所述液滴與通過(guò)干燥室的干燥氣體接觸,其中所述干燥氣體具有約60℃至約90℃的出口溫度。

106.根據(jù)權(quán)利要求93至105中任一項(xiàng)所述的方法,其中步驟(iv)包括使用離心力將所述干燥的提取物與所述氣體和較小的顆粒分離。

107.根據(jù)權(quán)利要求93至106中任一項(xiàng)所述的方法,其中步驟(v)包括將所述噴霧干燥的提取物收集在容器中。

108.根據(jù)權(quán)利要求93至107中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述收集的噴霧干燥的提取物包含小于或等于約15%、10%或5%(w/w)的殘留水。

109.根據(jù)權(quán)利要求93至107中任一項(xiàng)所述的方法,其中從所述噴霧干燥的提取物中除去大于或等于85%、90%或95%(w/w)的所述液體。

110.根據(jù)權(quán)利要求93至108中任一項(xiàng)所述的方法,其中當(dāng)在再水合之前將所述提取物在2℃至8℃下儲(chǔ)存時(shí),所述再水合的噴霧干燥的提取物的蛋白質(zhì)合成活性每月降低小于約5%。

111.根據(jù)權(quán)利要求93至110中任一項(xiàng)所述的方法,其中當(dāng)在再水合之前將所述提取物在2℃至8℃下儲(chǔ)存大于或等于8個(gè)月時(shí),所述再水合的噴霧干燥的提取物的蛋白質(zhì)合成活性大于或等于再水合的對(duì)照提取物的蛋白質(zhì)合成活性。

112.根據(jù)權(quán)利要求111所述的方法,其中在再水合之前將所述噴霧干燥的提取物在2℃至8℃下儲(chǔ)存13個(gè)月。

113.根據(jù)權(quán)利要求111或112所述的方法,其中所述對(duì)照噴霧干燥的提取物不包含海藻糖。

114.根據(jù)權(quán)利要求93至108中任一項(xiàng)所述的方法,其中與在t=0時(shí)的再水合的提取物的蛋白質(zhì)合成活性相比,在再水合之前將提取物在2℃至8℃下儲(chǔ)存多達(dá)20個(gè)月的再水合的提取物具有大于或等于80%的初始蛋白質(zhì)合成活性。

115.根據(jù)權(quán)利要求93至114中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述噴霧干燥的細(xì)菌提取物在無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成中具有活性氧化磷酸化系統(tǒng)。

116.根據(jù)權(quán)利要求93至115中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述液體提取物來(lái)自埃希氏菌屬物種。

117.用于無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的噴霧干燥的提取物,所述噴霧干燥的提取物包含:

118.根據(jù)權(quán)利要求117所述的噴霧干燥的提取物,其中所述穩(wěn)定劑選自海藻糖、乳糖和亮氨酸。

119.根據(jù)權(quán)利要求118所述的噴霧干燥的提取物,其中所述穩(wěn)定劑包含約25至200g/kg海藻糖、約25至200g/kg乳糖或約5至10g/l的亮氨酸。

120.根據(jù)權(quán)利要求119所述的噴霧干燥的提取物,其中所述海藻糖是海藻糖二水合物(tdh),以及所述乳糖是乳糖單水合物(lmh)。

121.根據(jù)權(quán)利要求117至120中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中從所述混合物中除去大于或等于85%、90%或95%(w/w)的所述液體。

122.根據(jù)權(quán)利要求117至121中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述提取物還包含一種或多種高玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(tg)非極性的不帶電氨基酸,所述高玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(tg)非極性的不帶電氨基酸選自l-纈氨酸、l-色氨酸、l-異亮氨酸、l-亮氨酸、l-丙氨酸、甘氨酸、l-脯氨酸及其任何組合。

123.根據(jù)權(quán)利要求117至121中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述提取物還包含選自亮氨酸、甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸和精氨酸中的一種或多種氨基酸、全部氨基酸的組合或氨基酸的子集。

124.根據(jù)權(quán)利要求117至123中任一項(xiàng)所述的噴霧干燥的提取物,其中所述提取物還包含麥芽糊精、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、聚乙二醇200、聚山梨醇酯80(80)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp或kollidon?12pf)、2-羥基丙基-β-環(huán)糊精或其任何組合。

125.用于從噴霧干燥的提取物生產(chǎn)目標(biāo)蛋白的方法,所述方法包括:


技術(shù)總結(jié)
本公開(kāi)內(nèi)容提供用包含穩(wěn)定劑的組合物穩(wěn)定噴霧干燥的細(xì)菌提取物的改善方法,使得所述提取物可以用于無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成。本文還提供用于穩(wěn)定的噴霧干燥的細(xì)菌提取物的制劑,所述穩(wěn)定的噴霧干燥的細(xì)菌提取物與不含穩(wěn)定劑的噴霧干燥的細(xì)菌提取物相比具有增加的蛋白質(zhì)合成活性。

技術(shù)研發(fā)人員:道格拉斯·李·格特爾,詹姆士·扎瓦達(dá),羅伯特·戴維·基斯,艾莉森·德懷爾,阿瑪爾吉特·辛格,理查德·艾倫·約翰遜,利薩·薩維茨基·皮耶里,達(dá)蘭·帕特里克·道拉特沙希
受保護(hù)的技術(shù)使用者:蘇特羅生物制藥公司
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/5/8
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